Gravações de uma única célula de sucção de cones fotorreceptores rato
Summary
Vamos mostrar como gravar respostas flash de cones do mouse usando um eletrodo de sucção.
Abstract
Haste e cone fotorreceptores na retina são responsáveis pela detecção de luz. Na escuridão, nucleotídeo cíclico-gated (CNG) no segmento de canais externos são abertos e permitem o fluxo constante cátions para o interior através da membrana, despolarizando a célula. Exposição à luz provoca o fechamento dos canais de CNG, bloqueia o fluxo para dentro cação atual, e, portanto, resulta em hiperpolarização celular. Com base na polaridade de fotorreceptores, um método de gravação de sucção foi desenvolvido em 1970 que, ao contrário da técnica patch-clamp clássico, não requer penetrar a membrana plasmática<sup> 1</sup>. Desenhar o segmento externo em uma pipeta de vidro bem presas preenchido com solução extracelular permite a gravação das mudanças atuais em células individuais por testes de flash-exposição. No entanto, este bem estabelecido "outer-segmento-in (OS-in)" de gravação de sucção não é adequado para gravações cone mouse, por causa da baixa porcentagem de cones na retina do rato (3%) e as dificuldades na identificação do cone segmentos externos. Recentemente, um segmento interno–in de configuração (IS-in) de gravação foi desenvolvido para desenhar o segmento de interior / região nuclear do fotoreceptor para a pipeta de gravação<sup> 2,3</sup>. Neste vídeo, vamos mostrar como gravar a partir photoresponses mouse individual cone usando uma única célula do eletrodo de sucção.
Protocol
Discussion
De uma única célula de gravação de sucção de células fotorreceptoras foi desenvolvido três décadas atrás. Ele nos permite gravar trans-membrana mudança corrente induzida pela estimulação luminosa sem penetrar a membrana celular. Por causa da adesão celular de alta, é difícil isolar vara única saudável e cone da retina do rato como retina de anfíbios e é difícil encontrar cones individuais devido ao baixo percentual (3%) e tamanho pequeno. O segmento interno–in (IS-in) método de gravação supera e…
Acknowledgements
Suportado pelo Prémio Carreira de Desenvolvimento de Pesquisa para prevenir a cegueira, NIH conceder EY 019.312, e concessão irrestrita de Pesquisa para prevenir a cegueira e EY 02.687 (Departamento de Oftalmologia & Visual Sciences da Universidade de Washington).
References
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