강렬한 공부 선충류 벌레<em> Caenorhabditis 엘레간스</em>는 transgenically 인간 β – 아밀로이드 펩타이드를 (Aβ) 표현하는 설계하실 수 있습니다. 의 Aβ의 유도 표현<em> C. 엘레간스</em> 근육은 Aβ 독성을 조절 치료를 모니터링하는 데 사용할 수있는 신속하고 재현할 마비의 표현형로 연결됩니다.
β – 아밀로이드 펩티드 (Aβ)의 축적은 일반적으로 알츠하이머 질병의 유도 중심으로 생각하지만, 독성의 관련 메커니즘 (들)은 아직 명확하지가있다는거다. Aβ는 또한 포함 바디 Myositis, 심한 인간 myopathy에 intramuscularly 입금됩니다. 강렬한 공부 선충류 웜 Caenorhabditis의 엘레간스는 transgenically 인간의 Aβ를 표현하기 위해 설계하실 수 있습니다. Aβ 표현의 조직이나 타이밍에 따라, 유전자 변형 벌레는 Aβ 독성의 읽기 아웃 역할을 쉽게 측정 phenotypes 수 있습니다. 세스 외, 예를 들어, 범 -의 연결 Aβ 표현과 함께 유전자 변형 벌레가 제정 근육 특정 표현과 함께 유전자 변형 웜은 프로 그레시브, 나이에 의존 마비의 표현형을 (링크 1995 표시하면서 결함이 연관 학습 (. Dosanjh 외 2009)입니다했습니다 . 2006). 하나는 특히 유용 C. 엘레간스 모델은 온도 upshift (링크 외. 2003)에 재현할 마비의 표현형의 결과, Aβ transgene의 온도 inducible 근육 표현을 엔지니어로 mRNA 감시 시스템의 온도에 민감한 돌연변을 사용합니다. 이 모델에서 카운터 Aβ 독성이 [예, 보호 transgene (핫산 외. 2009)의 표현이나 징코 빌로바 추출물 (우 외. 2006)에 노출] reproducibly 이러한 유전자 변형의 온도 upshift에 의해 유도된 마비의 속도를 변경할 것을 처리 웜. 여기 우리는이 유전자 변형 C.에 마비의 속도를 측정을위한 프로토콜을 설명 이 측정에 영향을 미칠 수 실험 변수에 특히주의와 엘레간스 모델.
우리가 설명이 프로토콜은 효율적으로 분석 Aβ 독성에 대한 화합물의 효과를 위해 사용될 수 있습니다. 게시 예제는 징코 빌로바 추출물의 성분의 영향 (우 외. 2006)과 reserpine을 (아리아 외. 2009 년) 등이 있습니다. 다른 시스템에서 Aβ 독성에 대한 보호되었습니다 화합물도 (예, memantine, 우리되지 않은 결과)이 모델에서 보호하는 표시되었습니다. 이 모델 수립을위한 중요한 근거는 C.에서 잘 개발된 유전자와 분자 도구를 사용할 수 있습니다 엘레간스는 Aβ 독성의 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 따라서 Aβ 독성에 미치는 영향 특정 돌연변이 (예, DAF – 2 손실 기능 돌연변이, Florez – 매클루레 외. 2007 년 도입하여 신호와 같은 인슐린을 줄이는 효과) assayed,이 모델은 또한 수 있습니다 과잉 표현 transgenes (폰트 외. 2008)의 영향을 조사하는 데 사용됩니다. 우리는 최근 Aβ의 단일 아미노산 대체 (게시되지 않은 데이터)의 독성에 미치는 영향을 조사하기 위해이 모델의 광범위한 사용을 만들었습니다.
유전자 변형 모델은 assays에게 여기에 근육 세포 기능에 급성 Aβ 표현의 효과를 설명했다. 마비 근육 세포 및 sarcomere 시에 손상되며, 마비의 표현형 근육 세포 사망의 결과 없습니다. 그러나, 마비 후 (초기 upshift 후 ~ 48 시간) 근육 무결성 및 웜의 최종 죽음의 고장이 있습니다. 우리는 Aβ 표현이 다운 스트림 효과를 조사하거나 독성 표지로 사용하지 않았습니다.
여기에 설명된 inducible의 Aβ 표현 모델은 글 β – 아밀로이드 형성을 조절 치료를 조사에 적합하지 않습니다. 제정 Aβ 표현 양식을 쉽게 감지 아밀로이드 침전물과 함께 유전자 변형 벌레가지만 (.. 페이 외 1998; 링크 외 2001), inducible의 Aβ의 표현과 함께 유전자 변형 벌레 거의 아밀로이드 침전물이없고 마비의 표현형은 아밀로이드 증착 (드레 이크 외 독립 나타납니다. 2003). 결과는보기와 일치하는 가용성 oligomeric Aβ의 축적이 아니라 아밀로이드 증착에서 유도 Aβ 표현 결과의 급성 독성.
The authors have nothing to disclose.
우리는 프로토콜을 개발하는 데 도움 특히, 여기 원래 프로 시저를 개발 긴 폰트를 설명하는 링크 실험실의 현재와 전 회원에게 감사를 표합니다. 이 작품은 CDL에 NIH (AG12423) 및 알츠하이머 협회 (제니스 대상)에서 수상에 의해 지원되었습니다
Reagents | Quantity/2L | Company/Catalogue # | Comments |
NaCl | 6g | Sigma-Aldrich / S9888 | |
Agar | 40g | Sigma-Aldrich / A7002 | |
Peptone | 5g | Sigma-Aldrich / P0556 | |
ddH2O | 2L | ||
1M CaCl2 | 2mL | 147.02mg/mL in ddH2O | |
Uracil | 2mL | 2mg/mL in ddH2O | |
Cholesterol | 2mL | 5mg/mL in ethanol (do not autoclave) | |
1M MgSO4 | 2mL | 246.5mg/mL in ddH2O | |
1M KPO4 | 50mL | 98mg KH2PO4.mL, 48mg K2HPO4/mL in ddH2O, pH | |
Erlenmeyer Flask | VWR |