幼虫，少年和成年斑马鱼的心脏解剖，斑马鱼</em
Summary
一个明确的，标准化的方法是在多个发育阶段的斑马鱼的心脏解剖和隔离。注释和定量分析技术进行了讨论。
Abstract
斑马鱼已成为一种有益和实用的模式生物，胚胎心脏发育的研究 （见1-6最近的评论），但是，工作研究通过成人心脏发育的胚胎后一直有限7-10。研究改变形态的成熟和老化的心脏被限制缺乏技术可用于分期和隔离，少年和成人的心。为了分析对鱼的寿命心脏的发展，我们在许多阶段剖析斑马鱼的心和照片作进一步的分析 11 。心脏的形态特征，可以很容易地被量化和个人的心，可以进一步分析的标准方法。斑马鱼生长在浮动利率和成熟的相关性更好，鱼比年龄大小，因此，固定后，我们作为衡量鱼成熟的鱼照片和测量长度。该协议解释两个不同的，对斑马鱼的大小而定清扫技术，从幼虫3.5mm标准长度（SL）不等，心中100μm的心室长度（VL），成年人，SL为30mm和VL1毫米或更大。幼虫和成鱼有相当不同的身体和器官形态。幼虫不仅明显变小，他们较少有色素和各器官的是视觉上很难辨别。出于这个原因，我们使用不同的夹层技术。
我们用解剖前的固定程序，我们发现，解剖后，euthanization直接的心中有一个变数较多的形态很松散，像气球心房相比，删除以下固定的心中。鱼固定剥离之前，保留在体内的形态和商会位置（数据未显示） 。此外，用于演示目的，我们采取的心脏（心肌）的具体GFP转基因TG（myl7 GFP）的优势twu34（12），这使我们看到整个心脏，并在早期阶段，特别是在发展有用的心脏时，形态是从周围组织明显。解剖的心脏原位杂交，免疫组织化学，RNA提取或其他分析方法在后胚胎斑马鱼更容易在心脏的发展和成熟使用的基本细胞和分子生物学的进一步分析。该协议将提供一个有价值的技术心脏发育成熟和老化的研究。
Protocol
Discussion
后胚胎鱼斑马鱼的心脏解剖这些方法使一个完好的心脏彻底清除。虽然这种技术很简单，并提供外部的削减，这将防止心脏损害的指导，一个稳定的手较小的鱼。
在夹层中的一个关键步骤是识别银色心包，心脏是直接在此囊。心包可视化提供了一个寻找和最终消除心脏形式腔体内的重要标志。此外，切割优于球根动脉的动脉将防止其他心脏的球根无意搬迁。在较大的鱼，它?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
玛丽Birne，Areti Tsiola，Jaymie埃斯特韦斯和Arelys乌里韦感谢。这项工作是支持部分由纽约市立大学研究基金会和霍华德休斯医学研究所资助大学生的暑期计划（SPUR）和NIH RO3 41702-00-01。研究也支持由皇后学院和一些实验成像皇后学院，细胞和分子生物学的核心设施设备进行。
Materials
| Material | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Paraformaldehyde | EMD | PX0055 | .04g/mL in PBS |
| Forceps #55 | FST | 11295-51 | |
| Micro-scissors | FST | 15005-08 | |
| Pin holder | FST | 26016-12 | |
| Micro-needles | FST | 10130-10 | |
| Nutrient Agar | BBL | 11472 | 23g/L in distilled H2O |
| Petri dishes | BD Falcon | 351029 | |
| PCR 8-tube strips | USA Scientific | 1402-2500 | |
| Digital Caliper | Fisher Scientific | 14-648-17 |
References
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