Summary
Denne artikel beskriver, hvordan at injicere virale vektorer i musen frontale cortex at teste adfærdsmæssige analyser, der kræver GPCR heteromere formation.
Introduction
Hallucinogener, såsom LSD, psilocybin og mescalin medføre betydelige ændringer i den menneskelige bevidsthed, kognition og emotion 7-9. Inaktivering af serotonin 5-HT 2A receptor signalering ved enten genetiske eller farmakologiske metoder forårsager markant svækket adfærdsmæssige reaktioner på hallucinogener i begge gnavermodeller 3,10 og mennesker 11. Selvom hallucinogener binder andre receptorsubtyper 8 er 5-HT2A-receptoren betragtes som nødvendig for den unikke adfærdsmæssige aktivitet af disse kemikalier.
Gruppe II metabotrope glutamatreceptorer (dvs.., MGlu2 og mGlu3) har været mål for betydelig opmærksomhed om den molekylære mekanisme af hallucinogener og deres integrerende rolle underliggende psykose 12. Tidligere er det blevet vist, at mus med ingen ekspression af mGlu2 protein (mGlu2-KO-mus) er ufølsomme over for de cellulære og adfærdsmæssige virkninger af hallucinogens fem. Det er også blevet foreslået, at 5-HT 2A og mGlu2 receptorer danner en specifik heteromerkompleks hvorigennem serotonin og glutamat ligander modulere mønster af G-protein kobling i levende celler 1,2.
Strukturelt transmembrane (TM) domæner 4 og 5 i mGlu2 spiller en fundamental rolle i heteromere formation med 5-HT 2A receptor 5. Derudover yderligere undersøgelse viste, at tre rester placeret i den intracellulære ende af TM4 af mGlu2 er nødvendige for at danne 5-HT 2A -mGlu2 receptor heterokompleks i levende celler 6.
Baseret på disse resultater observeret i heterologe ekspressionssystemer, Her beskrives anvendelsen af HSV-medieret ekspression af vildtype mGlu2 og mGlu2 / mGlu3 kimære konstruktioner i den frontale cortex hos mGlu2-KO-mus at teste, om heteromer dannelse mellem 5-HT 2A og mGlu2 er nødvendig forhead-twitch opførsel induceret af hallucinogene 5-HT 2A receptor-agonister.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BEMÆRK: Alle procedurer for dyreavl og bekymringer blev udført i overensstemmelse med Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC) regulering af Icahn School of Medicine på Mount Sinai. Sørg for at bruge sterile handsker under hele proceduren.
1. Drug og Virus Forberedelse
- Drug Preparation
- Forbered 15,0 ml ketamin / xylazin bedøvelsesmiddel ved opløsning 1,35 ml 100 mg / ml ketamin og 0,75 ml 20 mg / ml xylazin i 12,9 ml 0,9% saltvandsopløsning. Bland løsning.
- viruspræparat
- Klone mGlu2 og mGlu2ΔTM4N konstruktioner i en bicistronisk herpes simplex virus (HSV) -vektor ifølge standardprotokoller tidligere beskrevet 6. Pakke de virale partikler som tidligere beskrevet 6,13,14. Udskiftning af rester Ala-677 4,40, Ala-681 4,44 og Ala685 4.48 i mGlu2 for Ser686 4.40, PhE690 4,44 og Gly-694 4.48 i mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) er blevet beskrevet tidligere 6.
BEMÆRK: Det er tidligere påvist, at den kimære konstruktion HA-mGlu2ΔTM4N udtrykkes ved plasmamembranen med intakt G-protein-afhængige signalering 6. - Opbevar virale vektorer i -80 ° C, når den ikke anvendes. Tø virusvektor på is, og derefter udportionerer i 10 pi alikvoter. For den kirurgiske procedure, holde på is.
- Klone mGlu2 og mGlu2ΔTM4N konstruktioner i en bicistronisk herpes simplex virus (HSV) -vektor ifølge standardprotokoller tidligere beskrevet 6. Pakke de virale partikler som tidligere beskrevet 6,13,14. Udskiftning af rester Ala-677 4,40, Ala-681 4,44 og Ala685 4.48 i mGlu2 for Ser686 4.40, PhE690 4,44 og Gly-694 4.48 i mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) er blevet beskrevet tidligere 6.
2. Kirurgi
- Kirurgi Forberedelse
- Afvej mus og injicere mus med passende dosis af ketamin / xylazin cocktail (for detaljer, se 1.1.1).
- Tjek musen til at se, om ordentligt bedøvet, presse foden og hale for smerte respons, er forhindret i at fremkalde en reaktion, er musen ordentligt bedøvet.
- Shave musen hoved fra bunden af kraniet til spidsen af næsen ved hjælp af klippere. Påfør oftalmisk gel til musen AFterward at forhindre blindhed af musen.
- Læg hver sprøjte på stereotaktisk ramme. Derefter vippes vinkelret del af hver arm af stereotaktisk ramme, således at de er 10 grader væk fra normalen. Sikre, at armene er vippet, således at nålene er rettet mod hinanden.
- Rengør hver sprøjte ved at fylde nålen med 70% ethanol. Kanylen fyldes mindst tre gange for at sikre, at sprøjten er ren.
- Når nålen er blevet renset, skylles nålen ved at fylde nålen med dobbelt destilleret H2O Når skylles, fylde hver nål med 1,3 pi dobbelt destilleret H2O Vride stemplet i sprøjten for at frigive 0,3 pi dobbelt destilleret H2O Hvis vand perler på spidsen af nålen, forsigtigt tørre vand. Hvis der ikke kommer ud af sprøjten, skubbe stemplet helt ned og derefter gentage rengøring af sprøjte.
- Efter påfyldning med vand, og derefter trække sprøjten fylde sprøjten med0,5 pi luft.
- Når luften og vandet er i sprøjten, forsigtigt fylde sprøjten med 1,3 pi virus løsning. På dette tidspunkt sikre, at det samlede volumen i sprøjten er 2,8 pi. Igen vride spidsen af sprøjten at frigive 0,3 pi virus. Hvis flydende perler på spidsen af nålen, omhyggeligt tørre væsken. Hvis der ikke kommer ud af sprøjten, skubbe stemplet helt ned og derefter gentage rengøring af sprøjte.
- Kirurgi
- Fastgør mus til stereotaktisk ramme, og sørg for at justere stereotaktisk ramme, så kraniet er plan og flad. Påfør povodine-iod til den eksponerede hovedbunden. Ved hjælp af en skalpel, lave en sagittal snit langs midterlinien af kraniet i det udsatte barberet område. Sæt derefter buretten klemmer til huden på incisionssted for at sikre, at kraniet forbliver udsat for.
- Brug H 2 O 2 at opløse væk periosteum at blotlægge suturerne ikranium. Nu, hvor bregma og suturer er synlige, skal du sørge for at justere stereotaktisk ramme for at sikre, at kraniet er niveau.
- Juster nålen tips af sprøjterne med bregma og registrere koordinaterne for bregma. Beregne koordinaterne for den, hvor nålene er kommer til at blive indsat.
- For Rostral-Cauldal (RC) fly, tilsættes 1,6 mm til de optagne RC bregma koordinater (+1,6 fra Bregma). For Dorsal-ventrale (DV) fly, trække 2,4 mm fra de optagede DV bregma koordinater (-2.4 fra Bregma).
- Endelig for Medial Lateral (ML) fly, tilsættes 2,6 mm til de optagne ML bregma koordinater (+2,6 fra Bregma). For alle koordinater være sikker på at optage både venstre og højre koordinater, da dette er en bilateral injektion.
- Bring nåle til de ønskede koordinater. Markér steder, hvor nåle vil blive indsat og med en boremaskine, bore de markerede områder.
- Med en vatpind wipe væk eventuelt overskydende blod eller knogle fragment.
- Bringe nåle til kraniet, hvor spidserne af nålene er berøre overfladen af hjernen. Sænk derefter nåle til de ønskede koordinater langsomt sænke dem.
- Når nålene er på de ønskede koordinater, langsomt injicere indholdet i sprøjten ved at dreje stemplet af nålen 0,1 pi per minut i løbet af 5 min (i alt 0,5 pi).
- Når injektionen er foretaget forlade sprøjten i cortex i yderligere 5 min.
- Lukning Up / Pleje
- Fjern nåle fra musen cortex støt og langsomt. Fjern derefter musen fra stereotaktisk ramme.
- Anvend cyanoacrylat (dermal lim) til basen flapper af hud fra snittet og derefter med pincet fat i flapper af hud og placere dem sammen.
- Tillad cyanoacrylat tørre. Placer musen i buret over en varmepude (varmepude er frivillig, hvis Surgical suite holdes under RT på 37 ° C - ellers ikke nødvendigt). Sørg for at placere musen på et stykke køkkenrulle til at sørge for, at strøelse ikke overholder operationsstedet.
- Afhængigt af længden af den kirurgiske procedure, at musene er ude af anæstesi inden for 30 - 60 minutter efter proceduren. Efter kirurgi, er dyret placeres i sin egen bur og overvåges, indtil det bliver bevidst før vender tilbage til sin plads at komme sig. Ingen der anvendes analgetika postoperativt, fordi de kan påvirke resultatet af vore eksperimenter ved at modificere nogle af hjernen biokemiske veje. Men dyrene overvåges, indtil de komme fra anæstesi på dagen for operationen, og daglig post-operation for tegn på infektion og vurdering af smerte / lidelse.
Eksperiment 3. Hovedet Twitch respons
- Opsætning
- Udfør alle adfærdsmæssige test fra 10:00 til 14:00, 2 - 3 dage efter stereotaCTIC injektion af viruspartikler.
- Opløs (±) -1- (2,5-dimethoxy-4-iodphenyl) -2-aminopropan-hydrochlorid (DOI) i en 0,9% saltvandsopløsning til 2,0 mg / kg. Også forberede en 0,9% saltvandsopløsning.
- Forbered et bur (28 x 18 x 15 cm) uden strøelse og anvendelse af en tri-pod, justere et kamera, således at visningen af videokameraet er direkte over hjem bur.
- Vænne musene til værelset i mindst 4 timer før begyndelsen af forsøget.
- Opsæt et videokamera til at optage hovedet spjæt.
- Eksperiment
- Anbring kameraet, så det er direkte over et hjem bur. Kalibrere kameraet, så hele hjemmet buret er i synsfeltet.
- Afvej mus og injicere mus intraperitonealt med passende dosis af enten 0,9% saltvand eller DOI (0,01 ml / g). BEMÆRK: Hvis en mus vejer 25 gram, administrere dosis til et samlet volumen på 0,25 ml.
- Placer hver mus tilbage i deres hjem bur for 10 min. Efter 10 minutter sted mus i midten af det tomme bur og validere, at der ikke er nogen blinde pletter i synsfeltet for kameraet. Tryk optage på videokameraet. Forlad rummet.
BEMÆRK: musebevægelser og forskellige adfærdsmæssige reaktioner deri (... Hovedtrækning, øre bunden, osv Der henvises til supplerende data tabel 1 i Gonzalez-Maeso et al 2007 for hele listen af adfærdsmæssige reaktioner fremkaldt af DOI) 3, vil blive optaget i 30 min. Derfor er det vigtigt at der ikke er nogen blinde pletter i synsfeltet registreres. - Efter 30 minutter stoppe optagelsen på videokameraet og sted mus tilbage i oprindelige hjem bur. Gentag denne proces for hver mus.
- anmeldelse
- Lad hver dommer gennemgang båndene blinde til de eksperimentelle betingelser for mus (dvs.., Lægemidler, der anvendes under hovedtrækning eksperiment eller virus anvendes under intrakranielle injektion)). Manuelt registrere hver hoved spjæt througHout videoen.
BEMÆRK: Head-twitch defineres som en hurtig omrystning hovedbevægelser foretaget af en mus (supplerende video). - For hver mus, gennemsnit det endelige HTR svar fra de tre summen af de blinde dommere. Så gruppen disse værdier ved eksperimentel tilstand og udføre statistiske analyser (dvs.., T-test eller ANOVA).
- Lad hver dommer gennemgang båndene blinde til de eksperimentelle betingelser for mus (dvs.., Lægemidler, der anvendes under hovedtrækning eksperiment eller virus anvendes under intrakranielle injektion)). Manuelt registrere hver hoved spjæt througHout videoen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tidligere resultater viser, at head-spjæt murine adfærdsmæssig reaktion er pålideligt og robust fremkaldt af hallucinogener, og det er fraværende i 5-HT 2A -KO mus 3. Endvidere er det blevet vist, at hovedet-twitch respons fremkaldt af hallucinogene 5-HT2A agonister DOI og LSD blev signifikant reduceret i mGlu2-KO-mus 5. Men selv om tidligere resultater overbevisende, at 5-HT 2A og mGlu2 er samlet som en heteromerkompleks in vitro i transfekterede celler 1,2,15, uanset om denne strukturelle arrangement opfører sig som sådan i levende mus forblev uløst. Fuldt ud at forstå den rolle, som 5-HT 2A -mGlu2 receptor heterokompleks i de psykoaktive-lignende virkninger induceret af hallucinogene 5-HT 2A receptoragonister, ekspression af enten mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N i frontal cortex af mGlu2-KO-mus for at undersøge, om denne Manipulation regulerer adfærd.
Mus modtog corticale injektioner af bicistronisk HSV inden for frontal udtrykker grønt fluorescerende protein (GFP) og enten mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N, eller GFP alene. Først blev det bekræftet, at virusset overudtrykker mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N i muse frontale cortex (figur 1A og 1B). Som tidligere demonstreret 5, head-twitch opførsel induceret af DOI var til stede i mGlu2-KO-mus injiceret med den tomme vektor HSV-GFP. Navnlig blev head-twitch respons induceret af hallucinogene 5-HT2A agonist DOI reddet i mGlu2-KO-mus overudtrykker mGlu2, men ikke mGlu2ΔTM4N, i frontal cortex sammenlignet med den, der ses hos dyr, der udtrykker GFP (figur 1C). Tilsammen tyder disse resultater på, at 5-HT 2A -mGlu2 receptorkomplekset i frontal cortex er kritisk for regulering af psykose-lignende tilstande.
Figur 1. Ekspression af mGlu2 som receptor heterokompleks. Ekspression af mGlu2 som en receptor med 5-HT 2A er nødvendig for psykose-lignende opførsel induceret af hallucinogener. (A) repræsentativt billede af HSV-medieret transgen ekspression i frontal cortex. HSV-mGlu2, som også udtrykker GFP, blev sprøjtet ind i frontal cortex, og GFP-ekspression blev afsløret ved immunocytokemi, skala bar, 200-um. (B) HSV-medieret transgen ekspression i muse frontale cortex af mGlu2-KO-mus, og anti-mGlu2 reaktivitet blev målt ved Western blotting. Specificiteten af det primære antistof mod mGlu2 receptor er tidligere blevet bekræftet i knockout mus 6. Metabotrope glutamatreceptorer er GPCR'er der danner kovalent bundne homodimerer. Vi målte immunoreaktivitet af mGlu2 som en monomer (100 kDa) 6. (C et al (2012) 6. Klik her for at se en større version af dette tal.
Supplerende Video 1. Leder Twitch svar. (Højre klik for at downloade). CD-1 vægt mus blev injiceret med 2,0 mg / kg DOI og anbragt i et bur (væg mørklagt mellem de to bure) for at fremkalde head-twitch respons (adfærd fremkaldte *).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sammen med tidligere resultater i mGlu2-KO-mus 5, resultaterne med mGlu2 og mGlu2 / mGlu3 kimære konstruktioner, der ikke danner 5-HT 2A -mGlu2 receptorkomplekset i dyrkede celler tyder på, at 5-HT 2A -mGlu2 heteromere receptorkomplekset i muse frontale cortex er nødvendig for at inducere head-twitch adfærd ved LSD-lignende hallucinogene 5-HT 2A receptor-agonister. En begrænsning ved denne metode er, at den ikke måler tæt molekylære lighed på et subcellulært niveau i nativ væv. Desuden er der forskellige kritiske punkter skal bemærkes. Fordi mus injiceres med en HSV viral vektor, tidsrammen, at forsøgene skal udføres er 2 - 4 dage efter injektion. Placeringen og udtryk af de virale vektorer bør verificeres med immunfluorescensfarvning af sektioneret hjerne ikke mere end fire dage efter den første injektion. Mus, i hvilke koordinaterne ikke passer eller ikke udtrykker den virale vektor skaludelukkes fra de eksperimentelle data, da de ikke udtrykker mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N. Pleje efter stereotaktisk kirurgi er også afgørende, da ukorrekt lukning af sår i hovedet kan føre til infektion, som kan forårsage problemer i både in vivo-forsøg og immunfluorescensfarvning. Endelig efter stereotaktisk injektion enhver adfærdsmæssig paradigme (. Åben mark, skiftevis t-test, etc) kan anvendes, så længe det er inden for 2 - 4 efter injektion af viruspartikler. Igen bør koordinater og ekspression bekræftes ved immunofluorescens.
Idéen om, at GPCR'ere fungerer som homo- og / eller heteromerer i levende celler er nu veletableret 16-18. Trods visse fremskridt, er der behov for flere undersøgelser for at definere den præcise rolle (r) GPCR heteromerkomplekser i hele dyremodeller 19. Tilgange såsom BRET og / eller FRET billedbehandling for at undersøge protein-protein fysisk nærhed inden dybe væv af små dyrmodeller kan tilvejebringe midler til at øge forståelsen af den funktionelle rolle af GPCR heteromerer i levende fag 20. Brug af HSV-medieret ekspression af GPCR'er enten nativ eller med modificerede transmembrane proteiner, tilvejebringer en in vivo-model til vurdering af funktion og interaktion af GPCR'er.
Yderligere undersøgelser i gnavere modeller er også behov for at undersøge stabiliteten og levetid (dannelse og dissociation) af GPCR heteromerer 21-23, strukturelle omlejringer mellem deres komponenter 24, og potentiale G-protein kobling efter receptor internalisering 25,26. I betragtning af den grundlæggende rolle GPCRs i cellesignalering og funktion, er det sandsynligt, at dette område kan føre til interessante grundlæggende og translationelle studier.
Selvom yderligere undersøgelser er påkrævet for at kvantitativt karakterisere ultrastrukturelle co-lokalisering af begge receptorer i mennesker og mus CNS, sammen med tidligere studør der overbevisende den elektrofysiologiske, cellulære og adfærdsmæssige reaktioner fremkaldt af hallucinogener i musemodeller er uløseligt forbundet med 5-HT2A receptor-udtrykkende kortikale pyramideneuroner 3,27,28, de her beskrevne resultater opnået under anvendelse af HSV-medieret ekspression tilgang foreslå at heteromere dannelse mellem 5-HT2A og mGlu2 receptorer i muse frontale cortex er behov for head-twitch psykose-lignende opførsel induceret af hallucinogene 5-HT2A receptoragonist DOI.
HSV-medieret ekspression af mGlu2, men ikke mGlu2ΔTM4N, i frontale kortikale neuroner i mGlu2-KO-mus redder hovedstationen twitch opførsel induceret af hallucinogene 5-HT2A receptoragonist DOI. Denne translationel værktøj kan være en fordel for prækliniske studier for at evaluere adfærdsmæssige fænotyper af GPCR heteromerer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
NIH R01MH084894 deltog i finansieringen af denne undersøgelse. Vi vil gerne takke Drs. Yasmin Hurd og Scott Russo på Mount Sinai School of Medicine ved donation af mus og brugen af deres kirurgi og adfærd faciliteter under indspilningen af dette arbejde.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| mGlu2 bicitronic herpes simplex virus (HSV) vector | MIT Core | mGlu2 and mGlu2DTM4N were subcloned into the bicistronic HSV-GFP virus vector p1005+ HSV expressing GFP under the control of the CMV promoter. Viral particles were produced by the Viral Core Facility at the McGovern Institute (MIT). For more information, please contact the director, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu) | |
| mGlu2ΔTM4N bicitronic herpes simplex virus (HSV) vector | MIT Core | mGlu2 and mGlu2DTM4N were subcloned into the bicistronic HSV-GFP virus vector p1005+ HSV expressing GFP under the control of the CMV promoter. Viral particles were produced by the Viral Core Facility at the McGovern Institute (MIT). For more information, please contact the director, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu) | |
| GFP bicitronic herpes simplex virus (HSV) vector | MIT Core | mGlu2 and mGlu2DTM4N were subcloned into the bicistronic HSV-GFP virus vector p1005+ HSV expressing GFP under the control of the CMV promoter. Viral particles were produced by the Viral Core Facility at the McGovern Institute (MIT). For more information, please contact the director, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu) | |
| Xylazine | Lloyd | List no. 4811-20ml, NADA #139-236, NDC Code(s): 61311-481-10 | 1.35 ml of ketamine (100 mg/ml) + 0.75 ml of xylazine (20 mg/ml) are diluted in 12.0 ml of 0.9% saline solution |
| Ketamine | Vedco | KetaVed-10ml, NADA #200-029, NDC Code(s): 50989-161-06 | 1.35 ml of ketamine (100 mg/ml) + 0.75 ml of xylazine (20 mg/ml) are diluted in 12.0 ml of 0.9% saline solution |
| Ophthalmic gel | Fisher Scientific | NC0550805 | |
| Burret clips | Fisher Scientific | NC9268369 | |
| Feather surgical blade | Fisher Scientific | NC9032736 | |
| Hydrogen Peroxide | Fisher Scientific | 19-898-919 | |
| Hamilton syringe | Fisher Scientific | 14815203 | |
| Hamilton™ Small Hub Removable Needles (33 Ga) | Fisher Scientific | 14816206 | |
| Cordless Micro Drill | Fisher Scientific | NC9089241 | |
| Dermabond Dermal Adhesive | Fisher Scientific | NC0690470 | |
| (±)-1-(2,5-Dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropane hydrochloride (DOI) | Sigma-Aldrich | 42203-78-1 | Dissolved in 0.9% saline solution to the concentration of 2.0 mg/kg |
References
- Fribourg, M., et al. Decoding the Signaling of a GPCR Heteromeric Complex Reveals a Unifying Mechanism of Action of Antipsychotic Drugs. Cell. 147 (5), 1011-1023 (2011).
- Gonzalez-Maeso, J., et al. Identification of a serotonin/glutamate receptor complex implicated in psychosis. Nature. 452 (7183), 93-97 (2008).
- Gonzalez-Maeso, J., et al. Hallucinogens Recruit Specific Cortical 5-HT(2A) Receptor-Mediated Signaling Pathways to Affect Behavior. Neuron. 53 (3), 439-452 (2007).
- Gonzalez-Maeso, J., et al. Transcriptome fingerprints distinguish hallucinogenic and nonhallucinogenic 5-hydroxytryptamine 2A receptor agonist effects in mouse somatosensory cortex. J Neurosci. 23 (26), 8836-8843 (2003).
- Moreno, J. L., Holloway, T., Albizu, L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Metabotropic glutamate mGlu2 receptor is necessary for the pharmacological and behavioral effects induced by hallucinogenic 5-HT2A receptor agonists. Neurosci Lett. 493 (3), 76-79 (2011).
- Moreno, J. L., et al. Identification of Three Residues Essential for 5-HT2A-mGlu2 Receptor Heteromerization and its Psychoactive Behavioral Function. J Biol Chem. 287, 44301-44319 (2012).
- Geyer, M. A., Vollenweider, F. X. Serotonin research: contributions to understanding psychoses. Trends Pharmacol Sci. 29 (9), 445-453 (2008).
- Nichols, D. E.
- Hanks, J. B., Gonzalez-Maeso, J.
- Fiorella, D., Rabin, R. A., Winter, J. C. Role of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in the stimulus effects of hallucinogenic drugs. II: Reassessment of LSD false positives. Psychopharmacology (Berl). 121 (3), 357-363 (1995).
- Vollenweider, F. X., Vollenweider-Scherpenhuyzen, M. F., Babler, A., Vogel, H., Hell, D. Psilocybin induces schizophrenia-like psychosis in humans via a serotonin-2 agonist action. Neuroreport. 9 (17), 3897-3902 (1998).
- Moreno, J. L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Group II metabotropic glutamate receptors and schizophrenia. Cell Mol Life Sci. 66 (23), 3777-3785 (2009).
- Kurita, M., et al. HDAC2 regulates atypical antipsychotic responses through the modulation of mGlu2 promoter activity. Nat Neurosci. 15 (9), 1245-1254 (2012).
- Kurita, M., et al. Repressive Epigenetic Changes at the mGlu2 Promoter in Frontal Cortex of 5-HT2A Knockout Mice. Mol Pharmacol. 83 (6), 1166-1175 (2013).
- Rives, M. L., et al. Crosstalk between GABAB and mGlu1a receptors reveals new insight into GPCR signal integration. Embo J. 28 (15), 2195-2208 (2009).
- Milligan, G. The Prevalence, Maintenance and Relevance of GPCR Oligomerization. Mol Pharmacol. (84), Epub ahead of print 158-169 (2013).
- Ferre, S., et al. G protein-coupled receptor oligomerization revisited: functional and pharmacological perspectives. Pharmacol Rev. 66 (2), 413-434 (2014).
- Gonzalez-Maeso, J. GPCR oligomers in pharmacology and signaling. Mol Brain. 4 (1), 20 (2011).
- Gonzalez-Maeso, J. Family a GPCR heteromers in animal models. Front Pharmacol. 5, 226 (2014).
- Dragulescu-Andrasi, A., Chan, C. T., De, A., Massoud, T. F., Gambhir, S. S. Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) imaging of protein-protein interactions within deep tissues of living subjects. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (29), 12060-12065 (2011).
- Calebiro, D., et al. Single-molecule analysis of fluorescently labeled G-protein-coupled receptors reveals complexes with distinct dynamics and organization. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (2), 743-748 (2013).
- Fonseca, J. M., Lambert, N. A. Instability of a class a G protein-coupled receptor oligomer interface. Mol Pharmacol. 75 (6), 1296-1299 (2009).
- Hern, J. A., et al. Formation and dissociation of M1 muscarinic receptor dimers seen by total internal reflection fluorescence imaging of single molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (6), 2693-2698 (2010).
- Hlavackova, V., et al. Sequential inter- and intrasubunit rearrangements during activation of dimeric metabotropic glutamate receptor 1. Sci Signal. 5 (237), 59 (2012).
- Irannejad, R., et al. Conformational biosensors reveal GPCR signalling from endosomes. Nature. 495 (7442), 534-538 (2013).
- Calebiro, D., Nikolaev, V. O., Persani, L., Lohse, M. J. Signaling by internalized G-protein-coupled receptors. Trends Pharmacol Sci. 31 (5), 221-228 (2010).
- Celada, P., Puig, M. V., Diaz-Mataix, L., Artigas, F. The hallucinogen DOI reduces low-frequency oscillations in rat prefrontal cortex: reversal by antipsychotic drugs. Biol Psychiatry. 64 (5), 392-400 (2008).
- Béïque, J. -C., Imad, M., Mladenovic, L., Gingrich, J. A., Andrade, R. Mechanism of the 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated facilitation of synaptic activity in prefrontal cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (23), 9870-9875 (2007).
