근육 조직이 직접 액체 질소에 몰입 할 때 이슈 결빙 멀티 홀 Cryovial 제거
Summary
이 프로토콜은 액체 질소에 직접 급락으로 근육 조직을 동결하는 절차를 설명합니다. 이 프로토콜은 또한 질소 가스의 "블랭킷 효과"를 방지 할 수있는 새로운 cryovial를 강조 할 때, 액체 질소 연락처 검체의 조직 표면.
Abstract
골격 근육의 생리에 대한 연구는 적절하게 명확하게 볼 세포질 구획으로 섹션을 얻기 위해 표본을 처리하는 기술적 과제에 직면 해있다. 또 다른 장애물은 주위 조직에 근섬유의 꽉 동격이다. 조직 고정 및 파라핀 매립 처리는 근섬유의 수축을 초래하기 때문에, 동결 절편을 위해 근육 조직 강화의 최적의 방법이다. 그러나, 일반적으로 발생하는 문제, 얼음 결정의 형성은, 때문에 근육의 높은 수분 함량의 동결 절편의 준비 기간 동안 발생합니다. 여기에 제시된 프로토콜은 제 적절히 액체 질소에 침지하여 그 근육 조직을 동결하는 간단하고 효율적인 방법을 설명한다. 단독으로 액체 질소를 사용의 문제점은 다음 절연체로서 작용하고 조직의 냉각을 저해 조직에 질소 가스 배리어의 형성을 유발한다는 것이다. 하는 네브라스카이 "증기 담요 '효과를 방지하려면w cryovial은 조직 표면 주위의 액체 흐름 속도를 증가하기 위해 설계되었다. 이것은 병의 벽 (14 개)에 유입 구멍의 총 펀칭에 의해 달성 하였다. 버블 역학에 따르면, 작은 거품 적은 가능성의 액체 흐름의 결과의 높은 속도는 가스 배리어를 형성한다. 액체 질소가 유입 관통 구멍 cryovial로 유입되면, 조직 주변의 유속 가스 배리어를 제거하기에 충분히 빠르다. 미리 냉각 펜탄을 이용하여 근육 조직을 동결하는 방법에 비해,이 프로토콜은보다 간단하고 효율적이며 처리량하게 근육을 고정하기 위해 사용될 수있다. 또한,이 방법은 실온에서 가연성이 매우 이소 펜탄에 액세스 할 수없는 기관에 최적입니다.
Introduction
골격 근육은보기의 영양 및 처리 지점에서 고기를 생산하는 동물의 가장 중요한 구성 요소입니다. 근육 성장의 효율성과 결과 고기의 품질 : 육류 산업에서,이 개 특히 중요한 측면이있다. 근육의 주성분으로, 근육 섬유 성장 성능과 동물 1 신선한 고기의 품질에 직접적으로 관련이 있습니다. 예를 들어, 섬유의 총 수 (TNF)와 섬유의 단면적 (CSAF)은 주로 근육 질량과 고기의 품질을 결정; 또한, 섬유 유형 구성 (FTC)가 강하게 신선한 고기의 품질이 영향을 미칩니다. 따라서, 동물의 근육 섬유 특성의 조작은 코어 수익성 농장 1의 경쟁력을 높이기 위해 매우 효과적인 방법이다.
지금까지 여러 가지 고유 및 외부 요인은 근육 섬유 characterist를 조작 확인 된ICS 1. 이 조작은 돼지 5 소 3 미오 스타틴 유전자 양 4의 Callipyge 유전자 및 RYR1 IGF2 유전자와 같은 특정 유전자와 동물의 대상 선택을 통해 달성 될 수있다. 또한, 다이어트 제어 및 특정 호르몬 치료는 근육 섬유의 특성 (6)에 중요한 역할을한다. 따라서, 유전 및 영양 요소를 결합하는 방법은 살코기의 내용과 고기의 품질을 향상시킬 수 있습니다. 근육 섬유의 구조의 해명은 여전히 도전이기 때문에, 근육 섬유에 대한 연구는 육류 산업에 제한됩니다.
근섬유 특성 등 미오신 triphosphatase 아데노신 (ATP 아제) 조직 화학 분석과 같은 방법을 사용하여 식별된다. 이 방법의 냉동 (6-8 μm의) 얇은 섹션에있는 효소는 사실에 의존근육 섬유는 화학적으로 특정 제품에 반응 할 수있다. 단, 근육의 수분 함량은 위치에 관계없이 (즉, 뒤, 복부 또는 뒷다리) (7), 돼지, 토끼, 마우스 및 인간의 75 % 이상이다. 이전에 8, 9를 설명한 바와 같이, 저온부의 준비 과정 – 유물을 동결 – 근육의 높은 수분 함량은 일반적으로 발생하는 문제가 발생합니다. 대부분의 경우, 적절하게 우리의 경험에 따르면, 도살장 생산 라인에서 근육 조직을 동결하는 것은 거의 불가능하다.
여기에 제시된 프로토콜은 높은 처리량 방식으로 냉동 절편을 위해 근육 조직을 동결하기 위해 실험실에서 사용 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다. 이 방법의 하이라이트는 액체 질소에 냉동 플래시 근육 조직 용으로 설계된 새로운 cryovial이다. 현재 워크 플로우 동시에 조직을 용이하게 할 수명확하게 표시 함과 세포질 주변 조직에 꽉 근섬유의 동격으로 우수한 근육 동결 절단 (Cryosections)에 대한 동결 처리. 액체 질소가 조직과 혼합되지 않기 때문에, 또한,이 프로토콜은 조직 분석 옵션의 다양한 배열에 적용될 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기서는 동결 근육 기능의 조직 학적 평가를 수행하는 근육 조직을 저장하는 새로운 다공 cryovial을 설명한다. 이 프로토콜의 핵심 변성 단계는 다공 cryovial의 샘플은 직접 액체 질소에 침지된다는 점이다. 우리의 지식에, 이것은 기존의 동결 방법 중 근육의 냉동 절편 우수한 냉동 샘플 (대표 결과를 참조)를 얻을 수있는 간단하고 rapidest 방법입니다.
근육 연구자들이 직면 한…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 프로젝트는 중국 국가 자연 과학 재단 (NSFC)에 의해 지원되었다 : 31301950 및 31671288입니다.
Materials
| Cryostat Microtome | Leica | Leica CM1950 | |
| Digital Microscope | Nikon | Nikon DS-U3 | |
| Cryogenic Vial Plastic film | Designed by ourself | ||
| Liquid Nitrogen | Commomly-used | ||
| Scalpel | Commomly-used | ||
| 10cm-forcep | Commomly-used | ||
| 25cm-tweezer | Commomly-used | ||
| Safety glass | Commomly-used | ||
| Freezer gloves | Commomly-used |
References
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