Nous présentons ici une nouvelle méthode pour la résection partielle du lobe hépatique gauche chez les souris néonatales (jour 0). Ce nouveau protocole est convenable pour l’étude d’atteinte hépatique aiguë et réponse de blessures dans le cadre néonatal.
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Article de méthode
Une hépatectomie partielle lobulaire : Un modèle chirurgical pour la régénération du foie morphologique
Dans cet article
Résumé
Résumé
Régénération d’orgue morphologiques suite à la perte de tissu aiguë est fréquente chez les vertébrés inférieurs, mais est rarement observée dans la vie postnatale chez les mammifères. Régénération du foie adulte après hépatectomie partielle de 70 % se traduit par hypertrophie des hépatocytes avec une réplication dans des lobes restants avec la restauration de l’activité métabolique, mais avec une perte permanente de la morphologie et l’architecture de la lobe blessé. Ici, nous détaillons une nouvelle méthode chirurgicale chez le nouveau-né qui laisse un environnement physiologique propice à la régénération. Ce modèle implique l’amputation de l’apex du lobe gauche et un régime de gestion conservatrice subséquente et n’a pas la nécessité d’une ligature des principaux vaisseaux hépatiques ou des lésions chimiques, laissant un environnement physiologique où la régénération peut se produire. Nous étendons ce protocole à des amputations sur des souris (P7-14) juvéniles, au cours de laquelle le foie blessé passe de régénération d’organes à croissance compensatoire par l’hypertrophie. Le protocole présenté, bref 30 min fournit un cadre pour étudier les mécanismes de régénération, son déclin âge-associé chez les mammifères et la caractérisation des souches hépatiques putatif ou progéniteurs.
Introduction
La capacité de régénérer un organe, soit de rétablir la forme et la fonction, a été pensée pour être plus souvent perdu au fil du temps évolutionnaire. Le potentiel de régénération du foie chez les mammifères adult après une lésion aiguë chimique ou physique s’est avéré implique la mobilisation de tous les hépatocytes restants aboutissant à des vagues d’hypertrophie et quelques tours de la division cellulaire, résultant en un mais fonctionnel orgue architecture différente1,2,3,4,5. Récemment, les études ont....
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Protocole
Toutes les expériences sur des animaux ont été réalisées en stricte conformité avec les directives énoncées par l’Association pour l’évaluation et de la Commission Administrative d’accréditation du laboratoire Animal Care International (AAALAC) et de l’Université de Stanford sur l’Animal de laboratoire Soins (APLAC), (numéro de protocole #10266) et dans les États-Unis ou la Loi sur la protection des animaux européenne, Directive 2010/63/UE. Le protocole a été approuvé par le Comité sur l’éthique de l’expérimentation animale du gouvernement de Bavière, en Allemagne et a reçu la permission ne : 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. la préparation animaux....
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Résultats
Figure 1 a détaille une chronologie générale de l’hépatectomie partielle lobulaire néonatale (schématique à la Figure 1 b) et la durée prévue de la période d’attente jusqu'à ce que la régénération est observée. Régénération subtile du lobe gauche peut être observée 7-14 jours post chirurgie. La régénération complète a souvent été observée après que 56 jours après l’intervention chirurgicale. Souris ne devraient montrer aucun sign.......
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Discussion
Atteinte hépatique aiguë a traditionnellement étudiée à l’aide de produit chimique (acétaminophène, éthanol, tétrachlorure de carbone) ou modèles chirurgicaux (70 % une hépatectomie partielle). La réponse régénératrice après hépatectomie partielle de 70 % a été caractérisée d’impliquer l’hypertrophie des hépatocytes global et plusieurs cycles de division cellulaire4,5. Pour arrêter l’hémorragie, cependant, ce modèle est limité, car les principaux vaisseaux doiven.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucune divulgation.
Remerciements
Nous remercions P. Chu pour l’exécution de H & E et histologie ; et C. Wang et A. McCarty pour discussions utiles. Recherche a été financée grâce au financement de la Virginie et D. K. Ludwig Fund for Cancer Research ; le National Heart, Lung, and Blood Institute (R01HL058770 et U01HL099999) ; le California Institute for Regenerative Medicine (RC1 00354) subventions à I.W. Y.R. a été soutenue par le Human Frontier Science programme Career Development Award (CDA00017), la Fondation de recherche allemande (RI 2787/1), l’Institut de cellules souches de Siebel et le Thomas et Stacey Siebel Foundation (1119368-104-GHBJI). J.M.T. était accompagnée de la NIH (T32GM007365), l....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Animals | |||
| Mère avec portée de chiots nouveau-nés du jour 0 (toute souche) | |||
| Mère porteuse et portée de substitution (facultatif) | |||
| Name | Company | Numéro de catalogue | Comments |
| Réactifs étalons | |||
| Sérum tamponné au phosphate (PBS) | |||
| Solution antiseptique de providine-iode ou équivalente | |||
| Name | Company | Numéro de catalogue | Comments |
| Matériel chirurgical | |||
| microscope à dissection | Zeiss | ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000 | |
| Micro ciseaux à ressort droit | 3mm Vannas | 72932-01 | |
| 5SF Pince | Dumont | 11252-00 | |
| Pince Kelly droite | Grainger | 17-050G | |
| Coussin chauffant | Sunbeam | 000771-810-000 | |
| Isoflurane | Abbott Labs | 0044-5260-05 | |
| Système d’anesthésie pour rongeurs | Kent Scientific | 1205S | |
| Gaze, 10,16 x 10,16 cm | Fisher Scientific | 13-761-52 | |
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Comments |
| Équipement standard | |||
| Tube de microcentrifugation de 1,5 ml | Eppendorf | 22363204 | |
| 6-0 sutures monocryles | Ethicon | MCP489G | |
| Boîte de Pétri | Fisher Scientific | S35839 | |
| Pipet-Aid, Plain, 110V | Drummond | 4-000-110 | |
| Mettler Toledo NewClassic ME Balances analytiques | Fisher Scientific | 01-912-402 | |
| Chambre d’induction à faible coût | Kent Scientific | SOMNO-0730 |
Références
- Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. Liver Regeneration. Science. 276 (80), 60-66 (1997).
- Ponfick, V. A. Surgery of the Liver. Lancet. 1, 881(1890).
- Higgins, G., Anderson, R. M. Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).
- Miyaoka, Y., et al.
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Réimpressions et autorisations
