폐암 세포줄에 있는 암 줄기 세포의 방과성
Summary
암 줄기 세포의 존재는 방사선 요법 후에 재발 또는 나쁜 결과와 연관되었습니다. 이 원고는 폐암 세포주에서 암 줄기 세포의 방과성을 연구하는 방법을 설명합니다.
Abstract
암 줄기 세포의 존재 (CSCs) 방사선 요법 후 재발 또는 가난한 결과와 관련 된. 방사능 CSC를 연구하는 것은 방사능 저항을 극복하기 위한 단서를 제공할 수 있습니다. 전압 게이트 칼슘 채널 α2δ1 소단위 이소폰 5는 비소세포 폐암(NSCLC) 세포주에서 내성 CSC에 대한 마커로서 보고되었다. CSC 마커의 예로 칼슘 채널 α2δ1 소부를 사용하여, NSCLC 세포주에서 CSC의 방과성성을 연구하는 방법이 제시된다. CSC는 유세포측정에 의해 가설 마커로 분류되고, 정렬된 세포의 자기 갱신 능력은 구형 분석에 의해 평가된다. 얼마나 많은 세포가 방사선의 특정 복용량 후에 식민지를 형성하는 자손을 생성하는 능력을 분실하는지 결정하는 식민지 형성 분석, 그 후에 분류된 세포의 방과민성을 평가하기 위하여 능력을 발휘합니다. 이 원고는 CSC의 방과성 연구를 위한 초기 단계를 제공하며, 이는 기본 메커니즘에 대한 추가 이해를 위한 기초를 확립합니다.
Introduction
방사선 요법은 암 치료에 중요한 역할을합니다. 그러나, 방사선 저항하는 암 줄기 세포 (CSC)의 존재는 방사선요법 1,2후에 재발 또는 나쁜 결과로 이끌어 낼 수 있습니다. CSC는 자기 재생 능력과 이종성 암세포를 생성하는 능력이특징입니다 3. 보다 효율적인 DNA 손상 수리 능력 또는 자유 래 디 칼 청소 시스템 또는 다른 메커니즘의 상부와장갑, CSC는 방사선 요법에 상대적으로 저항 4,5,6,7 , 8.CSC 마커를 식별하고 메커니즘을 탐구하면 정상적인 조직 손상을 증가시지 않고 내성을 극복 할 수있는 약물 개발을 촉진할 수 있습니다.
전압 게이트 칼슘 채널 α2δ1 소단위 이소폰 5는 NSCLC 세포주 9에서방사성 CSC에 대한 마커로서 보고되었다. α2δ1은 원래 간세포암(HCC)10에대한 CSC 마커로 확인되었다. 동일한 환자에서 원발성 및 재발성 종양으로부터 유래된 HCC 세포주 쌍을 이용한 감산 면역을 사용하여, 1B50-1이라는 항체가 재발성 HCC 세포를 특이하게 표적으로 하는 것으로 확인되었다. 1B50-1-양성 세포는 생체외에서 높은 구체 형성 효율을 나타내고 생체 내에서 높은 종양 발생성을 보였다. 이의 항원들은 질량분석법에 의해, 칼슘 채널 α2δ1 소단위 이소암5로서 확인되었다. α2δ1은 특히 CSC에서 표현되며 대부분의 정상 조직에서 탐지할 수 없기 때문에 CSC10을대상으로 하는 잠재적 후보입니다. α2δ1은 또한 NSCLC 세포주를 위한 CSC 마커로서 작용할 수 있으며, 방사선 9에 반응하여 DNA 손상 복구의 효율을향상시킴으로써 부분적으로 NSCLC 세포에 방사성을 부여하는 것으로 나타났다.
방사능 CSC를 연구하는 것은 방사능 저항을 극복하기 위한 단서를 제공할 수 있습니다. NSCLC에서 α2δ1을 예로 사용하여, CSC의 방과성을 연구하는 주요 방법이 제시된다. 일반적으로 CSC는 가성 표면 마커로 단리되고, 양성 및 음성 세포 집단의 줄기 세포 특성 및 방사능 민감도가 비교된다. 자가 재생을 지원하는 성장 인자로 보충된 무혈청 배지에서구 형성은 시험관 내에서 세포의 줄기를 평가하는 유용한 분석이다. 구체 형성 능력이 높은 세포는 면역결핍 마우스10,11,12에주사시 높은 종양성 성을 보일 가능성이 있다. 콜로니 형성 분석은 세포의 방과성을 평가하기 위해 사용되며, 이는 얼마나 많은 사람들이 방사선13의투여 후 식민지를 형성하는 후손을 생성하는 능력을 잃었는지 결정한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 프로토콜은 시험관내 암 세포주에서 CSC의 방독증을 연구하는 방법을 설명합니다. 본 연구에서, α2δ1의 발현은 NSCLC 세포주에서 연속적이다. 따라서 게이팅은 이소타입 제어를 기반으로 합니다. 분류하기 전에 α2δ1 발현은 유세포측정에 의해 여러 세포주에서 검사되고 QPCR 또는 웨스턴 블롯에 의해 검증되어야 한다. 유세포측정법에 의해, 형광 현미경하에서 형광을 관찰하거나, 또는 QPCR(선별 ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 중국 국립 자연 과학 재단 (81402535 및 81672969)과 국가 핵심 연구 개발 프로젝트 (2016YFC0904703)에 의해 지원되었습니다.
Materials
| 0.5% Trypsin-EDTA (10X), no phenol red | Thermo Fisher | 15400054 | Dilute in to 0.05% (1X) with autoclaved distilled water |
| 1B50-1 | This antibody is produced and friendly supplied by Laboratory of Carcinogenesis and Translational Reseach (Ministry of Education/Beijing), Department of Cell Biology, Peking University Cancer Hospital and Institute. See reference 10. Alternatively, commercial antibody of calcium channel α2δ1 subunit can be used (ABCAM, ab2864) (Yu, et al., Am J Cancer Res, 2016; 6(9): 2088-2097) | ||
| 4% formaldehyde solution | Solarbio | G2160 | |
| A549 | ATCC | RRID: CVCL_0023 | |
| B27 | Thermo Fisher | 17504044 | |
| Biological Safety Cabinet | Thermo Fisher | 1336 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5910R | |
| DMEM/F-12 | Thermo Fisher | 12500062 | |
| EGF Recombinant Human Protein | Thermo Fisher | PHG0311 | |
| Fetal bovine serum | Thermo Fisher | 16140071 | |
| FGF-Basic (AA 1-155) Recombinant Human Protein | Thermo Fisher | PHG0261 | |
| Flow cytometer/cell sorter | BD | FACSARIA III | |
| H1299 | ATCC | RRID: CVCL_0060 | |
| H1975 | ATCC | RRID: CVCL_1511 | |
| Lightning-Link Fluorescein Kit | Innova Biosciences | 310-0010 | |
| linear accelerator | VARIAN | CLINAC 600C/D | |
| Methyl cellulose | Sigma Aldrich | M7027 | |
| Penicillin-Streptomycin, Liquid | Thermo Fisher | 15140122 | |
| Phosphate buffered saline | Solarbio | P1020 | |
| RPMI-1640 | Thermo Fisher | 11875093 | |
| SYBRGREEN | TOYOBO | QPK-201 | |
| TRIzol | Thermo Fisher | 15596026 | |
| Violet crystal staining solution | Solarbio | G1062 |
References
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