Summary
Этот протокол описывает процедуру удаления вентральной доли печени у взрослых рыбок данио, чтобы обеспечить возможность изучения регенерации печени.
Abstract
Печеночная недостаточность является одной из ведущих причин смерти во всем мире, а смертность от хронических заболеваний печени резко возрастает в Соединенных Штатах. Здоровая печень способна регенерировать от токсического повреждения, но при запущенном заболевании печени естественная способность печени к регенерации нарушается. Рыбки данио стали мощной экспериментальной системой для изучения регенерации. Они являются идеальной моделью для изучения регенерации печени после частичной гепатэктомии, процедуры, имеющей прямое клиническое значение, при которой часть печени удаляется хирургическим путем, оставляя остальную часть нетронутой. Не существует стандартного протокола для частичной гепатэктомии; Предыдущие исследования с использованием этой модели использовали несколько разные протоколы и сообщали о несопоставимых результатах. Здесь описан эффективный, воспроизводимый протокол для выполнения частичной гепатэктомии у взрослых рыбок данио. Мы используем эту технику, чтобы продемонстрировать, что рыбки данио способны к эпиморфной регенерации резекционированной доли. Этот протокол может быть использован для дальнейшего опроса механизмов, необходимых для регенерации печени у рыбок данио.
Introduction
Среди твердых органов у человека печень является единственным органом, способным к регенерации1. Это имеет решающее значение, так как печень является важным органом, ответственным за ключевые метаболические функции, хранение энергии, детоксикацию крови, секрецию белков плазмы и выработку желчи2. Гепатоциты, потерянные из-за токсического или воспалительного повреждения, заменяются в основном путем деления оставшихся гепатоцитов1. Одной из классических экспериментальных моделей для изучения регенерации печени является частичная гепатэктомия, при которой удаляются отдельные доли печени, оставляя оставшиеся доли нетронутыми3. Эта процедура была первоначально разработана на крысах, у которых удаляется примерно две трети печеночной массы. После частичной гепатэктомии у млекопитающих компенсаторная регенерация происходит в оставшихся долях до тех пор, пока печень не восстановит свою первоначальную массу. Примечательно, что печень млекопитающих не заменяет отсутствующие доли.
Рыбки данио (Danio rerio) представляют собой пригодную модель для изучения регенерации органов взрослыхособей 4. Печень рыбок данио, хотя и структурно отличается от печени млекопитающих, состоит из тех же типов клеток и выполняет ту же функцию, что и у млекопитающих2. Он состоит из трех долей, с двумя дорсальными долями и одной вентральной долей, которые уплощены вдоль кишечника. Частичная гепатэктомия ранее проводилась у рыбок данио, с противоречивыми отчетами о точном способе регенерации. Как правило, одна треть частичной гепатэктомии выполняется путем удаления всей вентральной доли. Первоначальные сообщения указывали, что после удаления вентральной доли она была полностью регенерирована в течениенедели 5,6,7,предполагая, что в отличие от печени млекопитающих, печень рыбок данио способна к эпиморфной регенерации. Последующие исследования показали, что удаление вентральной доли приводило к компенсаторной регенерации в дорсальных долях, а не к регенерации отсутствующей вентральной доли, и в конечном итоге к восстановлению печеночной массы в течение8,9недель. Транскриптомное профилирование дорсальных долей после резекции вентральной доли выявило значительные изменения, связанные с компенсаторной регенерацией10. Учитывая, что режим регенерации печени может варьироваться в зависимости от степени повреждения8,мы предположили, что расхождения в результатах могут быть связаны с техническими вариациями в протоколе частичной гепатэктомии между исследовательскими группами.
Этот протокол описывает процедуру выполнения одной трети частичной гепатэктомии на взрослых рыбках данио путем удаления вентральной доли. Эта методика будет ценна для оценки механизмов регенерации печени.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Рыбок данио выращивали и разводили в соответствии со стандартными процедурами. Эксперименты были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Бригама и женской больницы (2016N000405). Взрослых рыбок данио голодали за 24 часа до начала протокола. Системная вода относится к воде в аквариумах для рыбок данио в водном объекте.
1. Подготовка и обезболивание
- Готовят 0,016% раствор трикаина в системной воде.
ВНИМАНИЕ: Трикаин является раздражителем, если он контактирует с глазами, кожей или дыхательными путями. - Приготовьте губку для хранения анестезированных рыбок данио во время протокола рассечения. Разрежьте полную губку на четвертины. Используя лезвие бритвы, удалите тонкий клин губки, который проходит параллельно длинной оси губчатой четверти.
- Щель должна быть достаточно длинной, чтобы вместить взрослую рыбу (это будет варьироваться между разными размерами рыбы). Например, для взрослой рыбы длиной 35 мм длина щели должна составлять 20 мм. Голова и тело плотно удерживаются в губке, но хвост проходит мимо края губки(рисунок 1В).
- Замочите губку в 0,016% растворе трикаина.
- Поместите взрослых рыбок данио (самцов или самок) в 625 мл 0,016% раствора трикаина.
- Инкубировать в течение 6 минут или до тех пор, пока рыба не перестанет реагировать на прикосновения.
- Используя щипцы, осторожно извлеките рыбу из аквариума Трикаин и поместите рыбу вентральной стороной вверх в канавку губки(Рисунок 1А - В).
- Поместите губку под рассекающий микроскоп с подсветкой сверху вниз.
2. Хирургия
- Используя тонкие щипцы, защемляйте кожу и чешуйки медиально, только с задней стороны сердца(рисунок 1B).
- Используя подпружиненные ножницы, сделайте разрез под щипцами для создания отверстия в полости тела(рисунок 1С - D). Позаботьтесь о том, чтобы не повредить сердце или крупный кровеносный сосуд, так как это приведет к увеличению смертности.
- Используя подпружиненные ножницы, сделайте разрез 3-4 мм вдоль брюшка, обрабатывая с задней стороны до тех пор, пока разрез не поступит на брюшные плавники(рисунок 1D - E). К этому моменту вентральная доля печени может быть видна через разрез.
- Сожмите стороны губки одной рукой, чтобы вытеснить висцеральные органы из полости тела. Вентральная доля печени будет видна поверх кишечника(рис. 1F,2A-B). Печень будет выглядеть как розовая или оранжевая структура, разбросанная по золотисто-коричневой кишке. Животные, обозначенные как фиктивные контрольные, восстанавливаются на этом этапе.
- Сожмите мелкие щипцы так, чтобы два зубья соприкасались. Сохраняя давление на губку, скользите зубьями тонких щипцов между печенью и кишечником(рисунок 1G). Позаботьтесь о том, чтобы не проколоть кишечник, так как это приведет к повышенной смертности.
- Медленно расслабьте давление на щипцы так, чтобы зубья отдаляли друг от друга(рисунок 1H). Это скользящее действие разрывает многочисленные прикрепления воротной вени между вентральной мочкой и кишечником(рисунок 2B)и необходимо для чистого удаления вентральной доли. Повторяйте этот процесс до тех пор, пока все портальные связи между печенью и кишечником не будут разорваны.
- Отшелушить вентральную мочку от кишечника с помощью тонких щипцов и отрезать вентральную мочку свободно от остальной части печени(рисунок 1I).
- Эта процедура приводит к одной трети частичной гепатэктомии(рисунок 1J).
3. Восстановление
- Осторожно выньте рыбу из губки и поместите ее в резервуар с системной водой.
- Пипетная система поливает жабры в течение нескольких минут, пока рыба не заплывет самостоятельно(рисунок 1K).
- Контролируйте рыбу в течение 2-4 часов, прежде чем поместить ее обратно в систему. Не кормите рыбу в течение полных 24 ч после операции.
- Ежедневно контролируйте рыбу в течение всего эксперимента.
- Со временем разрез в стенке тела заживет естественным путем без необходимости наложения швов(рисунок 1L,2C).
4. Анализ доли вентральной доли к кишечнику
- Усыпить всех животных, предназначенных для анализа, в ледяной воде в течение 10 минут до тех пор, пока не прекратятся все оперкулярные движения.
- Извлеките рыбу из ледяной воды и поместите ее брюшной стороной вверх в паз губки.
- С помощью подпружиненные ножницы сделайте разрез в стенке вентрального тела в передне-заднем положении сердца. Затем сделайте еще два разреза, которые проходят вдоль передне-задней оси от первого разреза до брюшных плавников. (Рисунок 2А).
- Отшелушивайте кожу и мышцы, чтобы выявить висцеральные органы(рисунок 2А).
- Получение ярко-полевых и флуоресцентных изображений висцеральных органов с помощью эпифлуоресцентного микроскопа. Это поле зрения будет включать область, где была резектирована вентральная доля. Поскольку животные подвергаются эвтаназии перед анализом, этот вид анализа исключает долгосрочную визуализацию одной и той же рыбы.
5. Анализ соотношения печени к массе тела
- Усыпить всех животных, предназначенных для анализа, в ледяной воде в течение 10 минут до тех пор, пока не прекратятся все оперкулярные движения.
- Поместите рыбу в коническую трубку 50 мл.
- Добавьте 25 мл 4% параформальдегида в 1x PBS и 0,3% Tween в пробирку.
ВНИМАНИЕ: Формальдегид токсичен, и растворы, содержащие формальдегид, всегда должны обрабатываться в химической вытяжке. - Нутят в течение 48 ч при 4 °C.
- Выполните четыре 10-минутные стирки в 1x PBS и 0,3% анимации.
- Достать рыбу щипцами и смахнуть насухо на бумажном полотенце.
- Запишите вес всей рыбы.
- С помощью подпружиненные ножницы сделайте разрез в стенке вентрального тела в передне-заднем положении сердца. Затем сделайте еще два разреза, которые проходят вдоль передне-задней оси от первого разреза до тазовых плавников. (Рисунок 2А).
- Отшелушивайте кожу и мышцы, чтобы выявить висцеральные органы(рисунок 2А).
- Получайте изображения печени с ярким полем с помощью эпифлуоресцентного микроскопа.
- Рассеките печень, поместив кусочки печени на весовую лодку.
- Запишите вес печени.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Чтобы изучить регенеративный потенциал печени взрослой рыбки данио, мы провели частичную гепатэктомию (PHX) у взрослых рыбок данио. В основном отбирались крупные взрослые особи (30-40 мм в длину), начиная от 1,5-2,5 лет. В ходе отдельных экспериментов животные были отобраны из одного аквариума и соответствовали возрасту и размеру. В качестве соответствующего контроля мы использовали фиктивные операции, в которых животное было обезболено и получило большой разрез в стенке вентрального тела, но было восстановлено без удаления какой-либо ткани. Показатели выживаемости для фиктивного контроля варьировались от 90% до 100% как для самцов, так и для самок рыбок данио. Выживаемость для животных PHX варьировалась от 60% до 75% для самцов рыбок данио и 60%-90% для самок рыбок данио, причем все смерти произошли в первые 24 ч после операции.
Золотым стандартом для количественной оценки восстановления печени после PHX является отношение печени к массе тела, или LBR. Этот анализ использовался как для измерения восстановления массы печени у млекопитающих11, так и у рыбок данио моделей8. Чтобы достоверно количественно оценить вес печени, мы провели измерения веса на фиксированных животных, какописано ранее 8. Мы провели измерения LBR на диких типах, неповредимых рыбок данио и обнаружили, что, как сообщалосьранее 8,самки рыбок данио имели почти вдвое больше LBR по сравнению с самцами рыбок данио (3,3% для самок рыбок данио и 1,8% для самцов рыбок данио)(рисунок 3A). Мы выполнили как фиктивный, так и PHX на взрослых рыбок данио обоих полов и проанализировали LBR через 0 и 7 дней после травмы (dpi)(рисунок 3B). При 0 dpi фиктивные животные имели хорошо видимую вентральную мочку, тогда как у животных PHX вентральная доля полностьюотсутствовала (рисунок 3C). Примечательно, что это привело к значительному сокращению LBR (30% сокращение мужской рыбы, 20% сокращение женской рыбы)(рисунок 3D). В когорте рыб, проанализированных при 7 dpi, мы обнаружили, что вентральная доля не регенерировалась(рисунок 3E),и все же LBR PHX и фиктивного контроля были сопоставимы(рисунок 3F). Эти измерения показывают, что к 7 dpi печень восстановила массу относительно фиктивного контроля, предположительно путем компенсаторной регенерации в дорсальных долях, в соответствии с предыдущими сообщениями8,9.
Мы решили выяснить, способна ли вентральная доля печени к регенерации, при наличии достаточного количества времени. Взрослые Tg(fabp10a: CFP-NTR) рыбы были отобраны для экспериментов, так как эти рыбы экспрессируют CFP в гепатоцитах, что позволяет визуализировать печень с помощью флуоресцентной микроскопии. Когорта животных была подвергнута полному протоколу частичной гепатэктомии на одну треть. Животных анализировали при 1 или 36 dpi(рисунок 4A). Для каждого животного измеряли отношение длины вентральной доли к кишечнику(рисунок 4В).
Животные, подвергаемые фиктивным операциям, имели выдающуюся вентральную мяку, которая занимала 50-100% длины кишечника, тогда как животные, подвергаемые частичной гепатэктомии на одну треть, имели сильно уменьшенную вентральную мяку. Поразительно, что многие животные с частичной гепатэктомией при 36 dpi имели повышенное отношение вентральной доли к кишечнику по сравнению с животными с частичной гепатэктомией при 1 dpi(рисунок 4C). Не наблюдалось увеличения размера вентральной доли в фиктивном контроле; однако статистически значимое увеличение размеров вентральной доли наблюдалось после восстановления после частичной гепатэктомии(рисунок 4D). Мы отметили, что наблюдались широкие различия в реакции на операцию, причем некоторые животные не проявляли регенерации, а другие явно регенерировали четко определенную вентральную мость(рисунок 4E). Эти результаты демонстрируют, что вентральная доля способна регенерировать от хирургической резекции печени у взрослых рыбок данио. Взятые вместе, наша работа показывает, что печень рыбок данио способна как к эпиморфной, так и к компенсаторной регенерации.
Рисунок 1:Протокол частичной гепатэктомии. (A) Диаграмма взрослой рыбки данио, с отмеченными передне-задней и дорсально-вентральной осями. (B) После анестезии животное встраивается в губку (показана синим цветом) таким образом, чтобы она была вентральной стороной вверх. Тонкие щипцы используются для защемления кожи только с задней стороны сердца. Губка не показана на последующих панелях для наглядности. Ножницыиспользуются, чтобы сломать кожу только с задней стороны сердца. (D-E) Ножницы используются в теперь открытой ране, чтобы сделать разрез 3-4 мм, идущий от переднего к заднему, заканчивающийся непосредственно перед брюшными плавниками. (F)Сдавливание боков губки приводит к тому, что висцеральные органы выскакнули из более крупной раны. (G) Тонкие щипцы с касанием обоих зубцов скользят между вентральной лепенкой печени и кишечником. (H) Щипцы расслаблены, в результате чего они разрывают прикрепления воротной вени между печенью и кишечником. Этот процесс повторяется по длине вентральной доли. (I-J) Вентральная доля подтягивается от ее заднего конца, в то время как ножницы используются для отсылки вентральной доли от остальной части печени. (K) Животное помещается в восстановительную камеру с системной водой, где оно приходит в сознание и само права. Современем внутренние органы втягиваются обратно в полость тела, и рана заживает. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2:Анатомия рыбок данио и восстановление после частичной гепатэктомии. (А) Для анализа висцеральных органов животных усыпляют и помещают вентральной стороной вверх на губку. Сначала разрез выполняется в передне-заднем положении сердца (красная линия). Затем образуются два разреза, которые проходят вдоль передне-задней оси к брюшным плавникам (синяя линия). Затем кожа и мышцы отслаиваются назад, обнажая висцеральные органы. Маркируются кишечник, вентральная доля печени и центральная вена в этой доле. (B) Живое изображение вентрального вида рыбки данио, подготовки к анализу висцеральных органов. Вентральная доля печени очерчена пунктирной белой линией. Желтое поле на изображении 2x указывает местоположение изображения 8x. Белые наконечники стрел указывают на портальные велинные связи между кишечником и печенью. (C)Вентральный вид раны, полученный в результате процедуры частичной гепатэктомии в указанные моменты времени. Со временем разрез заживает полностью. Шкала стержней, 500 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3:Компенсаторная регенерация после частичной гепатэктомии. (A)Соотношение печени к массе тела (LBR) измеряли для диких, неповрежденных рыбок данио. Самки рыбок данио имеют почти вдвое больше LBR по сравнению с самцами рыбок данио. Самок животных сравнивали с самцами животных с помощью теста на сумму ранга Уилкоксона, ****p < 0,0001. (B) Схема, указывающая, что дикий тип рыбок данио использовался для этого эксперимента. Животных подвергали фиктивной или частичной гепатэктомии (PHX), а затем либо фиксировали через 0 или 7 дней после травмы (dpi). Фиксированные животные были изображены и подвергнуты измерениям LBR. (С,Э) Показаны репрезентативные изображения животных, подвергающихся фиктивному или PHX при 0 dpi(C)и 7 dpi(E). Обратите внимание на полное отсутствие вентральных долей у животных PHX. Для всех изображений показан вентральный вид висцеральных органов. Изображения являются изображениями яркого поля. Вентральная доля печени очерчена белым цветом. Шкала стержней, 500 мкм. (Д,Ф) Гистограммы соотношения печени к массе тела как для самцов, так и для самок рыбок данио после операций sham и PHX при 0 dpi(D)и 7 dpi(F). Высота стержня является средним значением, а полосы ошибок представляют SEM. В то время как наблюдается снижение LBR после частичной гепатэктомии при 0 dpi, нет существенной разницы между PHX и фиктивными животными при 7 dpi, что указывает на восстановление LBR. Образцы частичной гепатэктомии сравнивали с фиктивной контрольной контролем с использованием теста на сумму ранга Уилкоксона, ns = незначимый, *p < 0,05, **p < 0,01. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4:Рыбки данио могут регенерировать свои вентральные доли после частичной гепатэктомии. (A) Схема, указывающая, что для этого эксперимента использовались Tg(fabp10a: CFP-NTR). Хирургия и анализ методом визуализации выполнялись в указанные моменты времени. (B) Пример изображения, демонстрирующего, как анализировались животные. Животных количественно оценивали, измеряя длину вентральной доли (красным цветом), длину кишечника (желтым) и вычисляя процент кишечника, который занимает вентральная доля (в белом цвете). (C)Показано репрезентативное изображение животных, подвергающихся фиктивной или частичной гепатэктомии (PHX) через 1 и 36 дней после травмы (dpi). (D) Скрипичные графики соотношения длины вентральной доли к длине кишечника для животных, подвергающихся фиктивной или частичной гепатэктомии при 1 и 36 dpi. Каждая точка представляет значение от одной рыбы. Значения для самцов рыб синие, самки рыбы в красном. Образцы частичной гепатэктомии сравнивали с фиктивной контрольной цепкой с использованием теста на сумму ранга Уилкоксона, ns = незначимый, *p < 0,05. Показаныдва примера частичной гепатэктомии животных при 36 dpi, которые не регенерируют, и два примера, которые регенерируют. Для всех изображений показан вентральный вид висцеральных органов. Изображения представляют собой слияние флуоресцентного изображения CFP и изображения яркого поля. Флуоресценция CFP присутствует только в печени. Вентральная доля печени очерчена красным цветом. Процент кишечника, который занимает вентральная доля, белого цвета. Шкала стержней, 500 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Анатомические различия между моделями регенеративной печени рыбок данио и млекопитающих представляют собой уникальные проблемы для резекции печени. Печень у рыбок данио находится в непосредственной близости от сердца и кишечника; непреднамеренное повреждение любого органа приводит к увеличению смертности. Печень рыбок данио не инкапсулирована, что затрудняет ее отделение от кишечника. Печень получает богатую питательными веществами кровь из кишечника через портальные вены. У млекопитающих вены, выходящие из кишечника, сходятся на первичной воротной вене, которая затем расщепляется, когда она входит в печень12. Напротив, печень рыбок данио получает портальную циркуляцию из серии крошечных сосудов, которые движутся непосредственно из кишечника в печень(рисунок 2B). Таким образом, каждая доля печени, сплющенные над кишечником, надежно прикрепляется к кишечнику этими сосудами. Попытка удалить вентральную мочку без предварительного разрыва портальных вен часто может привести к неполной резекции (данные не показаны). Некоторые из исходных протоколов описывают вытягивание вентральной доли через относительно небольшой разрез, который не позволяет разорвать эти портальные крепления5,6.
Протокол, описанный здесь, предназначен для решения этих проблем, чтобы обеспечить последовательное удаление вентральной доли. Анестезированные рыбки данио плотно помещаются в бороздку губки, чтобы держать жабры влажными, а их тела неподвижными на протяжении всей процедуры. Защемление кожи только с задней части сердца позволяет разместить разрез в коже, не повреждая ни один из внутренних органов. Открытие большого (3-4 мм) разреза делает удаление печени и оценку степени удаления простым(рисунок 2С). Важно отметить, что рыбки данио могут оправиться и в конечном итоге залечить рану такого размера без какого-либо первичного закрытия раны. Сжимая губку и сжимая стенку тела, висцеральные органы становятся более доступными и можно скользить зубьями щипцов между печенью и кишечником. Затем щипцы могут быть использованы для разрыва портальных связей между печенью и кишечником. Как только это будет достигнуто, тонкие щипцы могут быть использованы для отшелушивания вентральной доли, чтобы ее можно было отделить от остальной части печени.
Мы измерили отношение печени к массе тела (LBR) животных, подвергающихся фиктивным операциям и операциям PHX. Мы обнаружили, что по 7 dpi LBR животных PHX был сопоставим с контрольной частью(рисунок 3F). Учитывая, что вентральная доля не регенерировалась в этот момент(рисунок 3E),мы сделали вывод, что регенерация произошла путем компенсации в дорсальных долях. Чтобы решить вопрос о том, может ли вентральная доля в конечном итоге регенерировать у рыбок данио, мы выполнили PHX и исследовали повторный рост печени. В среднем отношение длины вентральной доли к кишечнику было выше при 36 dpi, чем при 1 dpi, что свидетельствует о регенерации вентральной доли(рисунок 4C-D). Существует большой разброс в реакции животных на травмы, причем некоторые животные испытывают очень небольшой рост, а другие испытывают значительное восстановление вентральной доли(рисунок 4E). Мы пришли к выводу, что печень может регенерировать с помощью смеси эпиморфной регенерации вентральной доли и компенсаторной регенерации в дорсальных долях, хотя и в разных временных масштабах. Поскольку предыдущие исследования использовали частичную гепатэктомию для анализа роли отдельных генов5,7,9 и сигнальных путей6,8,10 после резекции, мы ожидаем, что этот протокол будет способствовать нашему пониманию молекулярных и клеточных механизмов регенерации печени у взрослых позвоночных.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Acknowledgments
I.M.O. поддерживается NIAAA (F32AA027135). W.G. поддерживается R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 и Программой Клаудии Адамс Барр по передовому опыту в исследованиях рака. W.G. является ученым Pew в области биомедицинских наук.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Systems, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72997-07 | |
| Epifluorescence microscope | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight | Biomedical Research Instruments | 11-1020 | |
| Tricaine methanesulfonate | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
References
- Michalopoulos, G. K. Principles of liver regeneration and growth homeostasis. Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).
- Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research. Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).
- Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).
- Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy. The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).
- Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy. PLoS One. 9, (2014).
- Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish. BMC Genomics. 16, 979 (2015).
- Michalopoulos, G. K.
- Grisham, J. W.
