В этой статье описывается моделирование ишемии-реперфузии (I / R) в 3-дневном эмбрионе цыпленка с использованием крючка, настроенного на спинальную иглу, чтобы лучше понять развитие и лечение I / R. Эта модель проста, быстра и недорога.
Расстройства ишемии и реперфузии (I / R), такие как инфаркт миокарда, инсульт и заболевания периферических сосудов, являются одними из ведущих причин болезни и смерти. Многие модели in vitro и in vivo в настоящее время доступны для изучения механизма I/R в заболевании или поврежденных тканях. Однако до настоящего времени не сообщалось о модели ovo I/R, что позволило бы лучше понять механизмы I/R и ускорить скрининг лекарств. В этой статье описывается моделирование I /R с использованием крючка спинальной иглы в 3-дневном эмбрионе цыпленка, чтобы понять механизмы развития и лечения I/R. Наша модель может быть использована для исследования аномалий на уровнях ДНК, РНК и белка. Этот метод прост, быстр и недорог. Текущая модель может использоваться независимо или в сочетании с существующими моделями I/R in vitro и in vivo .
Ишемия-реперфузионное повреждение тканей было связано с рядом патологий, включая сердечные приступы, ишемический инсульт, травмы и заболевания периферических сосудов1,2,3,4,5. В первую очередь это связано с отсутствием всестороннего понимания прогрессирования заболевания и отсутствием эффективной исследовательской модели. Ишемическое повреждение возникает, когда кровоснабжение определенного участка ткани прекращается. В результате ишемическая ткань в конечном итоге некротизируется, хотя скорость варьируется в зависимости от ткани. Следовательно, восстановление кровоснабжения может помочь смягчить ущерб. Однако в некоторых случаях было замечено, что реперфузия вызывает больше повреждений тканей, чем одна только ишемия6,7,8. Поэтому понимание молекулярных и клеточных механизмов ишемии-реперфузии требуется для разработки эффективного терапевтического вмешательства. В настоящее время не известно эффективного лечения I/R травм. Это несоответствие побудило к созданию новых экспериментальных моделей, начиная от моделей in vitro до in vivo, для решения существующей проблемы9,10,11,12,13.
Эмбрионы цыплят (Gallus gallus domesticus) широко используются в исследованиях из-за их простоты доступа, этической приемлемости, относительно большого размера (по сравнению с другими эмбрионами), низкой стоимости и быстрого роста14. Мы использовали эмбрион цыпленка в 72 ч развития для создания in ovo I/R путем окклюдирования и высвобождения правой вителлиновой артерии с помощью спинномозговой иглы. Мы назвали его моделью ишемии-реперфузии Hook-I/R (рисунок 1). Модель, используемая в этом исследовании, способна точно моделировать все последующие процессы, включая окислительные и воспалительные пути, которые часто связаны с повреждением I/R15,16,17.
Целью исследований ишемии-реперфузии является создание терапевтических стратегий, которые предотвращают гибель клеток и способствуют выздоровлению29,30. Чтобы преодолеть существующие ограничения в исследованиях I/R, мы разработали модель эмбриона цыпле…
The authors have nothing to disclose.
Мы хотим выразить нашу признательность Шанкару за его критический вклад во время видеографии и монтажа, г-ну Бакеру Хуссейну за закадровый голос, г-ну Асгару Ризви за редактирование видео, г-ну Мохаммаду Хайдеру за видеосъемку, г-ну Мохаммаду Данишу Сиддики за помощь в ходе экспериментов.
(-80°C) freezer | Haier, China | – | |
1.5mL Centrifuge tube | TARSONS, India | 500010X | |
100mm Petri dish (sterile) | Tarsons, India | 460050 | |
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm) | Ramsons, India | 13990 | |
1mL Syringe | DISPO VAN | – | |
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm) | DISPO VAN, india | 30722D | |
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity | Gentek, India | GL-100 | |
37°C laboratory incubator | SCIENCE TECH, India | CB 101-14 | |
3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich, USA | M9281 | |
3mL Pasture Pipette | TARSONS, India | 940050 | |
50mL Beaker | TARSONS, India | – | |
5mL Syringe | DISPO VAN, India | IP53 | |
70% ethanol | Merck Millipore, United States | 64-17-5 | |
Adhesive tape/Cello tape | Sunrise, India | – | |
Ambra1 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00387943_m1 | |
Anti-mouse IgG | Cell Signaling Technology, USA | 7076S | |
Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, USA | 711-035-152 | |
Atg7 | R&D Systems, USA | MAB6608 | |
Atg7 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00893766_m1 | |
Autoclave Bag | Tarsons, India | 550022 | |
Autoclave Machine | Local made, Lucknow, India | – | |
Beclin-1 | Proteintech, USA | 66665-1-Ig | |
Beta Actin | ImmunoTag, USA | ITT07018 | |
Bovine Serum Albumin | Himedia, Mumbai, India | TC194 | |
Calcium Chloride | Himedia, Mumbai, India | GRM534 | |
Catalase | ImmunoTag, USA | ITT5155 | |
Cleaning wipes | Kimberly-Clark, India | 370080 | |
Cleaved Caspase3 | ImmunoTag, USA | ITT07022 | |
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate | Himedia, Mumbai, India | GRM39611 | |
Doppler blood flowmeter | Moors instrument, United Kingdom | moorVMS-LDF1 | |
Egg rack | – | – | |
Egg rack | – | – | |
GAPDH | ImmunoTag, USA | M1000110 | |
GAPDH primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs02758991_g1 | |
Glycine | Himedia, Mumbai, India | MB013 | |
Kidney tray | HOSPITO | – | |
LC3A/B | Cell Signaling Technology, USA | 4108S | |
Methanol | Rankem laboratories, Mumbai, India | M0252 | |
Micromanipulator | Narishige, Japan | M-152 | |
N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, USA | A7250 | |
Naringenin | Sigma Aldrich, USA | 67604-48-2 | |
NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, USA | 51-0500 | |
NLRP3 | ImmunoTag, USA | ITT07438 | |
Nose plier | Local made, Lucknow, India | – | |
Ocular forceps | Stoelting, Germany | 52106-40 | |
Ocular iris | Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India | Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8" | |
OHP marker pen | Camlin, India | – | |
ORP-150 | ImmunoTag, USA | ITT08329 | |
Pointed sharp edge scissor | Stoelting, Germany | 52132-11 | |
Potassium Chloride | Himedia, Mumbai, India | MB043 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Himedia, Mumbai, India | MB050 | |
Protease Inhibitor | Abcam, United States | Ab65621 | |
SOD-1 | ImmunoTag, USA | ITT4364 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific, Mumbai, India | 27605 | |
Sodium dodecyl sulphate | Himedia, Mumbai, India | GRM886 | |
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm) | Ramson, India | GS-2029 | |
Stereo Zoom surgical microscope | Olympus, Japan | SZ2-STU3 | |
Syringe discarder | BIOHAZARD | 882210 | |
Toothed forceps | Stoelting, Germany | 52102-30 | |
Tris Base | G Biosciences, United States | RC1217 | |
Tris Hydrochloric Acid | Himedia, Mumbai, India | MB030 | |
Tween 20 | G Biosciences, United States | RC1227 | |
White Leghorn Chicken 0-day eggs | – | – | |
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, USA | FK009 |