Summary
यह प्रोटोकॉल माउस किडनी प्रत्यारोपण की एक नई सर्जिकल तकनीक प्रस्तुत करता है जो एक संशोधित धमनी एनास्टोमोसिस रणनीति पर ध्यान केंद्रित करता है। एक संवहनी सीवन तकनीक जिसमें एक सरल और सुरक्षित मूत्रवाहिनी-मूत्राशय एनास्टोमोसिस विधि भी शामिल है, प्रस्तुत की जाती है। ये संशोधन ऑपरेशन के समय को कम करते हैं और माउस किडनी प्रत्यारोपण प्रक्रिया की सफलता दर में सुधार करते हैं।
Abstract
चूहों में गुर्दा प्रत्यारोपण एक जटिल और चुनौतीपूर्ण सर्जरी प्रक्रिया है। इस कार्रवाई के प्रमुख चरणों का प्रदर्शन करने वाले बहुत कम प्रकाशन हैं। इसलिए, यह लेख तकनीक का परिचय देता है और इस ऑपरेशन से जुड़े सर्जिकल चेतावनियों को इंगित करता है। इसके अलावा, पारंपरिक प्रक्रिया की तुलना में महत्वपूर्ण संशोधनों का प्रदर्शन किया जाता है। सबसे पहले, पेट की महाधमनी का एक पैच काटा जाता है और तैयार किया जाता है ताकि मूत्रवाहिनी धमनी सहित गुर्दे की धमनी के समीपस्थ विभाजन को दाता गुर्दे एन ब्लॉक के साथ एक साथ ट्रांसेक्ट किया जा सके। यह एक मूत्रवाहिनी परिगलन के जोखिम को कम करता है और मूत्र पथ रोड़ा के विकास से बचता है। दूसरे, संवहनी एनास्टोमोसिस की एक नई विधि का प्रदर्शन किया जाता है जो ऑपरेटर को गुर्दे के प्रत्यारोपण के बाद एनास्टोमोसिस के आकार को लचीला रूप से बढ़ाने या कम करने की अनुमति देता है। यह पोत सख्ती और intraabdominal रक्तस्राव के विकास से बचा जाता है। तीसरा, एक तकनीक जो नाजुक दाता मूत्रवाहिनी और प्राप्तकर्ता मूत्राशय के एनास्टोमोसिस को सक्षम बनाती है जो आघात का कारण नहीं बनती है, उसे दिखाया गया है। इस प्रोटोकॉल को अपनाने से ऑपरेशन का समय कम हो सकता है और प्राप्तकर्ता के मूत्राशय को नुकसान कम हो सकता है, जिससे प्राप्तकर्ता चूहों के लिए ऑपरेशन सफलता दर में काफी वृद्धि होती है।
Introduction
चूंकि Sakowitz et al. नेपहली बार 1973 में गुर्दे के प्रत्यारोपण के माउस मॉडल विकसित किए थे, इसलिए यह प्रत्यारोपण इस्केमिक चोट और एलोइम्यून अस्वीकृति के तंत्र का अध्ययन करने के साथ-साथ एलोग्राफ्ट अस्तित्व को लम्बा खींचने और संभवतः प्रतिरक्षाविज्ञानी सहिष्णुता प्राप्त करने के उद्देश्य से नए उपचार विकसित करने के लिए एक महत्वपूर्ण प्रयोगात्मक उपकरण के रूप में साबित हुआ है। हालांकि, सर्जिकल तकनीक जटिल और बहुत मांग करने वाली साबित हुई है, कभी-कभी संवहनी एनास्टोमोटिक सख्ती जैसी जटिलताएं होती हैं जो प्रीरेनल गैर-इम्यूनोलॉजिकल किडनी ट्रांसप्लांट विफलता2 के लिए अग्रणी होती हैं, इस्किमिया के कारण पोस्टरेनल विफलता और बाद में प्रत्यारोपित मूत्रवाहिनी के बाद के परिगलन, प्रत्यारोपित मूत्रवाह और / या प्राप्तकर्ता के मूत्र मूत्राशय के एनास्टोमोसिस की सख्ती होती है जिससे मूत्र बहिर्वाह में व्यवधान होता है। ये सभी कारण हैं कि चूहों में गुर्दे के प्रत्यारोपण को आगे विकसित नहीं किया गया है और इसलिए व्यापक रूप से उपयोग नहीं किया जाता है। संवहनी और मूत्र पथ की जटिलताओं के बिना एक प्रभावी और दीर्घकालिक स्थिर माउस किडनी प्रत्यारोपण मॉडल की स्थापना अभी भी गुर्दे की प्रतिरक्षा मध्यस्थता लेकिन संक्रामक रोगों पर ध्यान केंद्रित करने के साथ प्रत्यारोपण क्षेत्र में कई अध्ययनों के लिए अपूरणीय महत्वहै। इसके अलावा, फेफड़ों, हृदय और आंतों के प्रत्यारोपण 4,5 जैसे मुरीन मॉडल में अन्य अंग प्रत्यारोपणकी तुलना में, माउस किडनी प्रत्यारोपण मॉडल प्रमुख हिस्टोकॉम्पैटिबिलिटी एंटीजन असमानता 3,6 की स्थापना में भी दीर्घकालिक अस्तित्व का अध्ययन करने का मौका प्रदान करता है। यह भी दिखाया गया है कि दाता-प्राप्तकर्ता तनाव संयोजनों की एक ही सेटिंग में हृदय या गुर्दे जैसे विभिन्न अंग प्रत्यारोपण विभिन्न गतिशीलता और एलोग्राफ्ट अस्वीकृति3 की शुरुआत की विशेषता है। इसके अलावा, नेफ्रोलॉजिकल दृष्टिकोण से, यह सरल त्वचा प्रत्यारोपण प्रयोगों की तुलना में तीव्र और पुरानी अस्वीकृति की घटनाओं के संदर्भ में पैरेन्काइमल मध्यस्थता प्रतिरक्षा नियामक तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक अधिक उपयुक्त मॉडल है।
चूहों 3,7,8,9 में गुर्दे के प्रत्यारोपण की सर्जिकल तकनीक पर पिछली रिपोर्टों के आधार पर, हम यहां निम्नलिखित विश्वसनीय सुधारों को प्रदर्शित करते हैं जो हमारे समूह 10,11,12 के भीतर पिछले10 वर्षों के दौरान सफलतापूर्वक लागू किए गए हैं: सबसे पहले, मूत्रवाहिनी धमनी को सुरक्षित रूप से संरक्षित किया जाता है क्योंकि गुर्दे की धमनी को ब्लॉक में उच्छेदित किया जाता है। पेट महाधमनी के संबंधित भाग के साथ एक साथ. दूसरा, एक गांठरहित संवहनी एनास्टोमोसिस की एक नई, सरल और तेज तकनीक जिसमें एनास्टोमोसिस की अंतिम सिलाई पारंपरिक दृष्टिकोण की तरह ऊपरी टाई के अंत से बंधी नहीं है, लेकिन मुक्त रहती है। यह तकनीक पोत की सख्ती और इंट्राएब्डोमिनल रक्तस्राव से बचने के लिए गुर्दे के reperfusion के बाद एनास्टोमोसिस के आकार को बढ़ाने या कम करने में सक्षम बनाती है। तीसरा, 21 जी और 30 जी सिरिंज सुइयों का उपयोग प्राप्तकर्ता के मूत्राशय की दीवार में दाता मूत्रवाहिनी को प्रत्यारोपित करने के लिए एक सहायक पंचर मार्गदर्शक उपकरण के रूप में किया गया था, जो प्राप्तकर्ता के मूत्राशय को नुकसान को कम करता है और सख्ती मुक्त एनास्टोमोसिस के गठन की सुविधा प्रदान करता है।
इस रिपोर्ट में, हमने पारंपरिक, व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली तकनीक की तुलना संशोधित तकनीक के साथ भी की जो हमारी प्रयोगशाला में स्थापित है और गुर्दे ट्यूबलर शोष और गुर्दे के प्रत्यारोपण अंतरालीय ऊतक फाइब्रोसिस की डिग्री में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया है। पिछले अध्ययनों में, हमने स्थानीय रक्तस्राव, घनास्त्रता, पोत एनास्टोमोसिस और जीवित रहने की दर के प्रदर्शन के लिए समय के संदर्भ में पारंपरिक विधि के साथ इस नई तकनीक के परिणामों की तुलना की। हमने स्थानीय घनास्त्रता की घटनाओं (1.1% बनाम 6.6%) की महत्वपूर्ण कटौती जैसे सुधार पाए, एनास्टोमोसिस प्रक्रिया के लिए एक कम समय, और एक अत्यधिक पुनरुत्पादक गुर्दे सिंजेनिक ग्राफ्ट दीर्घकालिक अस्तित्व (शास्त्रीय दृष्टिकोण के साथ 95% बनाम 84%) 10।
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Protocol
सभी पशु प्रयोगों को वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए उपयोग किए जाने वाले जानवरों की सुरक्षा पर यूरोपीय संसद के निर्देश 2010/63 / यूरोपीय संघ के दिशानिर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया था (पशु नैतिकता कार्ड: खाद्य और औषधि सुरक्षा के निचले सैक्सनी मंत्रालय, # 33.9-42502-04-11/0492)। बाँझ सर्जिकल उपकरणों और उपभोग्य पदार्थों (autoclaved) का उपयोग करके प्रक्रियाओं का संचालन करें और ऑपरेटिंग क्षेत्र को यथासंभव बाँझ रखने का प्रयास करें।
नोट: C57BL / 6J पुरुष चूहों ने दाताओं और प्राप्तकर्ताओं (syngeneic प्रत्यारोपण मॉडल) के रूप में कार्य किया, जबकि Balb / c चूहों ने किडनी एलोग्राफ्ट प्राप्तकर्ताओं के रूप में कार्य किया (तीव्र एलोग्राफ्ट अस्वीकृति मॉडल9 का अध्ययन करने के लिए मॉडल)। चूहों की आयु 8-12 सप्ताह के बीच थी, प्रत्यारोपण में ~ 25-30 ग्राम वजन था और मानक शर्तों के तहत रखा गया था। इस पांडुलिपि में रिपोर्ट किए गए डेटा चूहों की सर्जरी में अनुभवी चार सर्जनों द्वारा उत्पन्न किए गए थे।
1. तैयारी कदम
- सर्जरी के लिए, सूक्ष्म-कैंची, माइक्रो-संदंश, एक सुई धारक, माइक्रो हेमोस्टेटिक क्लैंप और एक इलेक्ट्रोसर्जिकल पेन सहित सूक्ष्म उपकरणों के एक सेट का उपयोग करें। 7/0er, 10/0er, या 4/0er नायलॉन monofilament का उपयोग कर टांके प्रदर्शन।
- संज्ञाहरण के लिए, बेहोशी को प्रेरित करने के लिए लगभग 40-60 सेकंड के लिए आइसोफ्लुरेन (2%) के साँस लेने के लिए माउस को बॉक्स में रखें।
- एक बार माउस anesthetized है, माउस वजन.
- माउस के वजन के अनुसार, माउस13 को बेहोश करने के लिए केटामाइन (100 मिलीग्राम / किग्रा) + xylazine (10 मिलीग्राम / किग्रा) + एसेप्रोमाज़िन (2 मिलीग्राम / किग्रा) का एक इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन लागू करें। पुष्टि करें कि माउस एक पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी को देखकर anesthetized है।
- जब संज्ञाहरण प्रभावी हो जाता है, तो पेट के फर को क्लिप करें। फिर, एक बाँझ मास्किंग टेप के साथ अंगों को शिथिल रूप से स्थिर करके ऑपरेशन टेबल पर माउस को ठीक करें।
- माउस को ऑपरेशन टेबल पर रखने के बाद माउस के पेट को कीटाणुरहित करें। पोविडोन आयोडाइड (आयोडोफोर) और अल्कोहल के बारी-बारी से स्क्रब का उपयोग करके कीटाणुशोधन करें, तीन बार (संकेंद्रित पैटर्न का उपयोग करें, पेट के बीच में स्क्रब शुरू करें और बाहर की ओर बढ़ें), और फिर माउस को ठीक से एक फेनेस्टेड सर्जिकल तौलिया का उपयोग करके लपेटें।
- आंख मरहम लागू करें और पूरी प्रक्रिया में बांझपन बनाए रखें।
नोट: एंटीबायोटिकदवाओं को पूरी प्रक्रिया के दौरान अनुशंसित नहीं किया जाता है क्योंकि ये पदार्थ प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकते हैं।
2. दाता आपरेशन प्रक्रिया
- त्वचा को काटने के लिए कैंची का उपयोग करें और लगभग 3-4 सेमी का एक क्रॉस पेट चीरा करें। पेट की दीवार की मांसपेशियों को काटें। कवर और सावधानी से एक खारा imbibed धुंध के साथ दूर विसरा ले जाएँ.
- धीरे से आंतों, पेट और प्लीहा को दाईं ओर (माउस के दृष्टिकोण से) की ओर हटाने के लिए एक कपास झाड़ू का उपयोग करें, कवर करें और सावधानी से एक खारा आत्मसात धुंध के साथ विसरा को दूर ले जाएं।
- बाएं गुर्दे, महाधमनी, और अवर वेना कावा (आईवीसी) को उजागर करने के लिए माइक्रो संदंश का उपयोग करें।
- बाएं काठ की नसों को नियंत्रित करने के लिए एक इलेक्ट्रोसर्जिकल पेंसिल का उपयोग करें, जिसमें उनकी अंतर्निहित शाखाओं और बाएं अधिवृक्क पोत के साथ अन्य छोटे जहाजों सहित, ध्यान से।
- बाएं मूत्रवाहिनी को विच्छेदित करने के लिए सूक्ष्म कैंची और संदंश का उपयोग करें और सावधानी से इसे आसपास के ऊतकों से जुटाएं। इसे यूरिनरी ब्लैडर के करीब साफ काट लें। लंबाई में लगभग 2 मिमी बाएं और दाएं गुर्दे की धमनियों के बीच महाधमनी क्षेत्र को जुटाएं।
- इन्फ्रारेनल अवर वेना कावा (आईवीसी) और महाधमनी को अलग करने के लिए माइक्रो संदंश का उपयोग करें, और फिर इस पोत के चारों ओर 7-0 रेशम टांके की ढीली टाई रखने के लिए महाधमनी के नीचे से गुजरने के लिए घुमावदार संदंश का उपयोग करें।
- क्रॉस क्लैंप सही गुर्दे धमनी और अवर वेना कावा (IVC) के नीचे महाधमनी के क्षेत्र दो 5 मिमी माइक्रोवैस्कुलर clamps का उपयोग कर क्लैंप.
- वेना कावा से बाईं वृक्क शिरा को ट्रांसेक्ट करें।
- हेपरिन खारा समाधान (60 U / mL) के 1 mL के साथ महाधमनी फ्लश करने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें।
- चरण 2.5 पर लागू लिगचर को कसने के लिए माइक्रो संदंश का उपयोग करें। फिर, महाधमनी को लिगचर के नीचे और साथ ही समीपस्थ क्लैंप के नीचे काट लें। इसके साथ, गुर्दे की धमनी के समीपस्थ विभाजन (कृपया ध्यान दें कि धमनी उद्घाटन को बड़े करीने से काटा जाना चाहिए, अन्यथा यह एनास्टोमोसिस को प्रभावित करेगा) और मूत्रवाहिनी धमनी को शामिल किया जाता है और एन ब्लॉक में ट्रांसेक्ट किया जाता है। ध्यान से तैयार करें, ताकि नाजुक मूत्रवाहिनी धमनी पूरी तरह से संरक्षित हो।
- इलेक्ट्रोसर्जिकल पेंसिल और संदंश का उपयोग करें ताकि बाएं गुर्दे और संबंधित वाहिकाओं को पूरी तरह से मुक्त किया जा सके, सावधानीपूर्वक ऊतक के आसपास के सभी पोतों को cauterizing द्वारा। गुर्दे को निकालें और इसे 4 डिग्री सेल्सियस पर खारे समाधान में संग्रहीत करें।
- decapitation द्वारा anesthetized दाता माउस euthanize.
3. प्राप्तकर्ता कार्रवाई प्रक्रिया
- प्रारंभिक सर्जिकल चरणों (संज्ञाहरण और नसबंदी सहित, चरण 1.1 से 1.7 देखें) के रूप में दाता माउस के लिए वर्णित प्रदर्शन करें।
- एक औसत चीरा (लंबाई में लगभग 2.5 सेमी) के माध्यम से पेट को खोलने के लिए कैंची का उपयोग करें, और फिर खारा समाधान का उपयोग करके गीले धुंध के साथ पेट के अंगों को कवर करें।
- इन्फ्रारेनल महाधमनी और अवर वेना कावा (आईवीसी) को सावधानीपूर्वक संरक्षित करें और सुनिश्चित करें कि हर बड़ी पोत शाखा को काउटराइज्ड किया गया है। गुर्दे के श्रोणि के समीपस्थ स्थिति में बाएं मूत्रवाहिनी को सावधानीपूर्वक विच्छेदित करने के लिए इलेक्ट्रिक कैटरी का उपयोग करें। फिर, बाईं किडनी को हटा दें।
- पेट की महाधमनी और अवर वेना कावा को उजागर करने के लिए सूक्ष्म संदंश और कपास की कलियों का उपयोग करें और उन्हें आसपास के वसा ऊतक (लंबाई में लगभग 4 मिमी से अधिक) से अलग करें।
- दो माइक्रोवैस्कुलर क्लैंप का उपयोग करें और उन्हें एक साथ अवर वेना कावा और पेट की महाधमनी दोनों पर समीपस्थ और दूरस्थ रूप से स्थित करें।
- एक माइक्रो सुई धारक का उपयोग करें एक 10/0 मोनोफिलामेंट (एक चिकनी सतह के साथ सिंथेटिक फाइबर से बना) सीवन सुई का मार्गदर्शन करने के लिए, जिसे महाधमनी दीवार के माध्यम से एक समीपस्थ से दूरस्थ तरीके से रखा जाता है।
- टांका के एक कोमल ऊपर की ओर कर्षण के साथ लगभग 1 मिमी की एक अंडाकार धमनीविज्ञान प्राप्त करें, जबकि ठीक, घुमावदार कैंची के साथ सुई के निचले चेहरे के नीचे सीधे काटते हैं।
- लगभग 1.5 मिमी की पर्याप्त लंबाई के साथ अवर वेना कावा (आईवीसी) अनुदैर्ध्य रूप से काटने के लिए माइक्रो कैंची का उपयोग करें। इस चीरे को इसके महाधमनी समकक्ष के थोड़ा नीचे रखें।
- दाता और प्राप्तकर्ता महाधमनी एनास्टोमोसिस को एंड-टू-साइड तरीके से निष्पादित करें। प्राप्तकर्ता के अवर वेना कावा के दाईं ओर दाता गुर्दे को प्राप्तकर्ता के उदर महाधमनी के एनास्टोमोसिस के साथ दाता के पेट की महाधमनी के कफ को संरेखित करते हुए रखें।
- एनास्टोमोसिस के समीपस्थ और डिस्टल सिरों को सिलाई करने के लिए एक सूक्ष्म सुई धारक और दो अलग-अलग 10-0 टांके का उपयोग करें।
- बांधने के बाद, सुई सहित दो लंबे टांके को जगह पर छोड़ दें। एनास्टोमोसिस की एरॉर्टल दीवार के बाईं ओर को लगातार दो समान रूप से एक डिस्टल-समीपस्थ दिशा में टांके के साथ सिलाई करें।
- अंतिम सिलाई के बाद, ऊपरी रहने वाले सीवन टाई के ऊपर पोत की दीवार की आंशिक मोटाई के माध्यम से टांका का मार्गदर्शन करें।
- कम सीवन टाई के छोटे छोर पर कोमल कर्षण को एक साथ लागू करने के लिए माइक्रो संदंश का उपयोग करें।
नोट: इस नई knotless तकनीक में, अंतिम सिलाई ऊपरी टाई के छोटे अंत से बंधा नहीं है। - प्रतिरोपित गुर्दे को उसकी सामान्य स्थिति में बदलने के लिए सूक्ष्म संदंश का उपयोग करें। अब लगातार एक समीपस्थ से दूरस्थ तरीके से तीन टांके का उपयोग कर aortal anastomosis की सही दीवार सिलाई.
नोट: पारंपरिक सर्जिकल तकनीक 7,8 की तुलना में अंतिम सीवन को पास के डिस्टल टाई के साथ विलय कर दिया जाता है। इसे निचले सीवन के अंत में न बांधें, इसके बजाय 2-3 मिमी की मुक्त लंबाई छोड़ने के लिए इसे काट लें। - शिरापरक एनास्टोमोसिस को एक ही स्यूटिंग प्रक्रिया का उपयोग करके निष्पादित करें जैसा कि पहले इस अंतर के साथ वर्णित किया गया है कि एनास्टोमोसिस के प्रत्येक पक्ष के लिए चार से पांच टांके की आवश्यकता होती है। अंतिम सिलाई को ऊपर वर्णित एरोटल एनास्टोमोसिस के समान लंबाई के एक मुक्त अंत के रूप में छोड़ दिया जाता है।
- दोनों एनास्टोमोसेस को पूरा करने के बाद, लगभग 10-20 सेकंड के लिए टांके वाले क्षेत्र की ओर कोमल दबाव डालने के लिए एक सूखे स्वाब का उपयोग करें।
- दोनों clamps को हटाने के लिए एक क्लिप applicator संदंश का उपयोग करें, पहले निचले फिर ऊपरी। 38.0 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 0.9% सोडियम क्लोराइड के साथ उदर गुहा कुल्ला।
- प्रतिरोपित गुर्दे के reperfusion का निरीक्षण करें।
4. मूत्रवाहिनी आरोपण
- प्राप्तकर्ता के मूत्र मूत्राशय के माध्यम से 10/0 सीवन (सीधी सुई) के साथ प्रवेश करने के लिए एक सूक्ष्म सुई धारक का उपयोग करें और इसे मार्गदर्शन के लिए 21 जी सुई लुमेन में डालें ( अनुपूरक चित्रा 1 ए देखें)।
- अब पिछले सुई आवेदन (पूरक चित्रा 1b) के स्थान पर एक छेद सिलाई करने के लिए 21 जी सुई गाइड।
- 21 जी सुई को बाहर निकालें (पूरक चित्रा 1 सी)।
- एक सूक्ष्म सुई धारक और 10/0 सीवन का उपयोग करने के लिए सिलाई (कोई टाई) छंटनी मूत्रवाहिनी अंत और इस 10/0 सीवन के साथ मूत्राशय को फिर से अपनी प्रविष्टि के स्थान पर छिद्रित करें (पूरक चित्रा 1 डी)।
- 10/0 फिलामेंट और यूरेटर को निर्मित छेद के माध्यम से मूत्र मूत्राशय में टो करने के लिए एक सूक्ष्म सुई धारक का उपयोग करें (पूरक चित्रा 1ई)।
- प्राप्तकर्ता के मूत्र मूत्राशय के लिए दाता के मूत्रवाहिनी को एनास्टोमोस करने के लिए एक माइक्रो सुई धारक और एक और 10/0 सीवन का उपयोग करें। यहां, मूत्राशय की बाहरी झिल्ली को मूत्राशय की दीवार की बाहरी झिल्ली से जोड़ें, और 3 से 4 टांके के साथ आंतरायिक टांके करें। अंत में, कर्षण टांका (पूरक चित्रा 1f) को बाहर निकालें।
- आंतों को पेट की गुहा में वापस रखने के लिए संदंश का उपयोग करें। 4/0 फिलामेंट का उपयोग करके पेट के घाव को बंद करने के लिए दो-परत टांके (पहले पेट की मांसपेशियों के बाद त्वचा) का प्रदर्शन करें।
- प्रत्यारोपित चूहों को सर्जरी के बाद ठीक होने के लिए ऑक्सीजन और तापमान-नियंत्रित कक्ष में रखें।
- पश्चात एनाल्जेसिया के लिए, सीधे Metamizol 200 मिलीग्राम / किग्रा प्रति ओएस आपरेशन के बाद दे।
ऑपरेशन के बाद चार और 16 घंटे मेटामिज़ोल को 200 मिलीग्राम / किलोग्राम प्रति ओएस प्लस कारप्रोफेन (5 मिलीग्राम / किग्रा) एससी देते हैं। आगे के अनुवर्ती में, ऑपरेशन13 के बाद लगातार तीन दिनों के लिए हर 24 घंटे में प्रत्यारोपित चूहों के लिए कारप्रोफेन (5 मिलीग्राम / किग्रा) एससी लागू करें। यदि अपर्याप्त एनाल्जेसिया के कोई संकेत हैं तो 0.05 मिलीग्राम / किग्रा अतिरिक्त रूप से हर 8 घंटे एससी दिया जाता है।
5. Contralateral nephrectomy और प्राप्तकर्ता माउस का बलिदान
नोट: प्रतिरोपण के 5 दिन बाद प्राप्तकर्ता माउस के contralateral nephrectomy प्रदर्शन करें।
- संज्ञाहरण के तहत प्रत्यारोपण के 5 दिन बाद प्रत्यारोपित माउस के contralateral nephrectomy प्रदर्शन। लिगेट करें और प्राप्तकर्ता के ऑटोलॉगस सही गुर्दे की धमनियों और नसों में कटौती करें, सही गुर्दे को हटा दें और पेट की गुहा को बंद करें। पश्चात की देखभाल और एनाल्जेसिया पहले वर्णित के रूप में ही हैं (चरण 4.7 देखें)।
- माउस की स्थिति को ऊपर उठाएं और रिकॉर्ड करें. प्रत्यारोपित माउस पश्चात एनाल्जेसिया, भोजन, और पानी की आपूर्ति प्रदान करें।
- प्रत्यारोपण के चार सप्ताह बाद, प्रत्यारोपित चूहों के आधे हिस्से का बलिदान करें और अपने गुर्दे के प्रत्यारोपण के लिए एच एंड ई स्टेनिंग करें।
- प्रत्यारोपण के 12 सप्ताह बाद, शेष चूहों का बलिदान करें और इन गुर्दे के प्रत्यारोपण के मैसन गोल्ड स्टेनिंग करें।
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Representative Results
प्रत्यारोपण के चार सप्ताह बाद, दोनों संशोधित तकनीक के साथ-साथ पारंपरिक तकनीक ने देशी प्राप्तकर्ता contralateral गुर्दे (चित्रा 1) की तुलना में गुर्दे ट्यूबलर शोष 14,15 के मध्यम संकेत प्रदर्शित किए। गुर्दे की नलिकाएं शोष की डिग्री ने दो अलग-अलग तकनीकों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया। ट्रांसप्लांटेशन के 12 सप्ताह बाद मैसन गोल्डनर के ट्राइक्रोम ने 14,15 गुर्दे को समान रूप से अंतरालीय ऊतक फाइब्रोसिस के स्पष्ट संकेत दिखाए जब सामान्य गैर-प्रत्यारोपित गुर्दे (चित्रा 2) की तुलना में।
हमने पहले इस नई गांठरहित तकनीक (एन = 175) के परिणाम की जांच की थी और प्रक्रिया के तकनीकी पहलुओं और इंट्राऑपरेटिव और पोस्टऑपरेटिव जटिलताओं के संदर्भ में शास्त्रीय दृष्टिकोण (एन = 122) से इसकी तुलना की थी ( तालिका 1) 10 भी देखें। यहां दिखाई गई संशोधित तकनीक इंट्राग्राफ्ट धमनी या शिरापरक थ्रोम्बोटिक घटनाओं की कम घटना से जुड़ी थी (चित्रा 3 बी, 1.1% बनाम 6.6%)। एनास्टोमोसिस करने का समय काफी कम था (चित्रा 3 ए), और एक अत्यधिक पुनरुत्पादक किडनी ग्राफ्ट दीर्घकालिक अस्तित्व प्राप्त किया गया था (95% बनाम 84%, पी < 0.001, चित्रा 3 सी) जैसा कि प्रतिरोपण के 12 सप्ताह बाद प्राप्तकर्ता जीवित रहने द्वारा निर्धारित किया गया था। इसके अलावा, इस संशोधित प्रत्यारोपण प्रक्रिया का आवेदन गुर्दे एलोग्राफ्ट फ़ंक्शन को प्रभावित नहीं करता है जैसा कि सीरम क्रिएटिनिन द्वारा 12 सप्ताह10 की अवलोकन अवधि के दौरान मूल्यांकन किया गया था।
| परम्परागत | नई गाँठ रहित तकनीक | |
| (n=122) | (n=175) | |
| ऑपरेशन समय | ||
| धमनी एनास्टोमोसिस के लिए समय (न्यूनतम) | 9.2 ± 0.09 | 7.5 ± 0.06 ** |
| शिरापरक एनास्टोमोसिस के लिए समय (न्यूनतम) | 9.1 ± 0.10 | 7.5 ± 0.05 ** |
| जटिलता दर | ||
| घनास्रता | 8 (6.6%) | 2 (1.1%)* |
| स्थानीय रक्तस्राव | 4 (3.3%) | 1 (0.6%) |
| सफलता दर | 103 (84.4%) | 167(95.4%)** |
| रोंग, एस, लुईस एजी, कुंटर यू, एट अल। माउस में गुर्दा प्रतिरोपण के लिए एक गांठरहित तकनीक. जे प्रत्यारोपण. Epub2012:127215,(2012). | ||
तालिका 1: इस नई तकनीक (एन = 175) की तुलना पारंपरिक तकनीक (एन = 122) के लिए प्रक्रिया के तकनीकी पहलुओं और इंट्राऑपरेटिव और पोस्टऑपरेटिव जटिलताओं के संदर्भ में10। संख्याएं प्रत्येक प्रक्रिया के मिनटों में ऑपरेशन समय का प्रतिनिधित्व करती हैं (मतलब ± एसडी)।
चित्रा 1: प्रतिनिधि हिस्टोलॉजिकल परिणाम ट्यूबलर शोष का आकलन. प्रत्यारोपण (40x) के 4 सप्ताह बाद गुर्दे के प्रत्यारोपण का धुंधला होना: (ए) सामान्य गैर-प्रत्यारोपित गुर्दे, (बी) पारंपरिक तकनीक, और (सी) एक सिंजेनिक गुर्दे के प्रत्यारोपण की संशोधित तकनीक। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: अंतरालीय फाइब्रोसिस का आकलन करने वाले प्रतिनिधि हिस्टोलॉजिकल परिणाम। (ए) सामान्य गैर-प्रत्यारोपित गुर्दे के प्रत्यारोपण (40x) के 12 सप्ताह बाद मैसन गोल्डनर की ट्राइक्रोम धुंधला हो जाती है, (बी) पारंपरिक तकनीक, और (सी) एक सिंजेनिक गुर्दे के प्रत्यारोपण की संशोधित तकनीक। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: पोत एनास्टोमोसेस के संचालन के समय की तुलना, जटिलताओं की आवृत्ति, और संशोधित और पारंपरिक तकनीक के बीच में सफलता की दर10 (ए) में बारग्राफ पोत एनास्टोमोसिस करने के लिए आवश्यक ऑपरेशन समय को दर्शाते हैं; (बी) में बारग्राफ इंट्राग्राफ्ट थ्रोम्बोसिस की घटनाओं और स्थानीय रक्तस्राव की समस्याओं को दर्शाते हैं; जबकि (सी) में bargraphs देशी contralateral गुर्दे के अतिरिक्त स्पष्टीकरण के बाद 12 सप्ताह से अधिक के बाद के अस्तित्व के अनुसार नई गांठरहित तकनीक की एक उच्च सफलता दर का प्रदर्शन करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: पारंपरिक (सी) और संशोधित तकनीक (डी) दोनों के लिए महाधमनी और गुर्दे की धमनी की संरचनात्मक संरचना (ऊपरी पैनल ए और बी) और लकीर रेखाओं का अवलोकन (डी) ( ए) पेट की महाधमनी, (बी) गुर्दे की धमनी, (सी) मूत्रवाहिनी धमनी, (डी) किडनी, (ई) मूत्रवाहिनी। शिरापरक वाहिकाओं (वी. कावा, जिसमें वीवी. गुर्दे शामिल हैं) को बिंदीदार रेखाओं के रूप में दर्शाया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: धमनी वाहिका एनास्टोमोसिस के एक गांठरहित सिलाई का अनुकरणीय प्रदर्शन (ए) पेट की महाधमनी, (बी) गुर्दे की धमनी, और (सी) गांठरहित सिलाई तकनीक जहां एनास्टोमोसिस की अंतिम सिलाई बंधी नहीं है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
अनुपूरक चित्रा 1: प्राप्तकर्ता के मूत्र मूत्राशय के साथ दाता मूत्रवाहिनी का एनास्टोमोसिस। (ए) प्राप्तकर्ता के मूत्राशय के माध्यम से 10/0 मोनोफिलामेंट के साथ प्रवेश करें और इसे 21 जी सुई के लुमेन में डालें, (बी) पिछली सुई वेध पर स्थित छेद करने के लिए 21 जी सुई का मार्गदर्शन करें, (सी) 21 जी सुई को बाहर निकालें, (डी) छंटनी किए गए मूत्रवाहिनी के अंत को 10/0 टांके के साथ सिलाई करें और मूत्राशय को 10/0 टांके के साथ फिर से इसके प्रवेश के स्थान पर छिद्रित करें, (ई) फिर, निर्मित छेद के माध्यम से मूत्र मूत्राशय में 10/0 सीवन और मूत्रवाहिनी को टो करें, (एफ) और प्राप्तकर्ता के मूत्राशय के लिए दाता के मूत्रवाहिनी को एक और 10/0 टांके के साथ एनास्टोमोस करें। अंत में, कर्षण सीवन को बाहर निकालें। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।
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Discussion
जबकि चूहों में त्वचा प्रत्यारोपण मॉडल सरल और एलोइम्यून अस्वीकृति की घटनाओं का अध्ययन करने के लिए प्रदर्शन करने में आसान है, हृदय16 और गुर्दे के प्रत्यारोपण10 के बाद अधिक विशेष रूप से एलोइम्यून से संबंधित भड़काऊ परिवर्तनों की जांच करने के लिए सर्जिकल तकनीकें जटिल और बहुत मांग वाली साबित हुई हैं। प्रत्यारोपण नेफ्रोलॉजिस्ट के दृष्टिकोण से, एक प्रभावी और दीर्घकालिक स्थिर माउस गुर्दे प्रत्यारोपण मॉडल की स्थापना अभी भी कई कार्यात्मक और प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों के लिए एक अपूरणीय महत्व है। इसके अलावा, अन्य अंग प्रत्यारोपण की तुलना में, माउस किडनी प्रत्यारोपण मॉडल एक लंबे समय तक जीवित रहने के लिए भी प्राप्त कर सकता है, यहां तक कि प्रमुख हिस्टोकॉम्पैटिबिलिटी एंटीजन में कुछ अंतर के साथ भी अस्वीकृति के दीर्घकालिक विकास में प्रतिरक्षा विनियमन तंत्र का अध्ययन करने का अवसर या एलोइम्यून सहिष्णुतास्थापित करने के लिए पूर्वशर्त कारकों की पहचान दोनों का अर्थ है।
जैसा कि पहले वर्णित है, चूहों में गुर्दे का प्रत्यारोपण एक चुनौतीपूर्ण प्रक्रिया है, और यहां तक कि अनुभवी सर्जनों की सफलता दर 40 और 95% 10,17,18,19,20 के बीच व्यापक रूप से भिन्न होती है। इस सर्जिकल तकनीक पर दुनिया भर के विभिन्न शोध टीमों की रिपोर्टों के संबंध में, हमने शास्त्रीय दृष्टिकोण की तुलना में निम्नलिखित संशोधन किए हैं जो कई सुधारों के लिए अग्रणी हैं।
सबसे पहले, पेट की महाधमनी का एक पैच काटा जाता है और तैयार किया जाता है ताकि गुर्दे की धमनी और मूत्रवाहिनी धमनी के समीपस्थ विभाजन को ट्रांसेक्ट किया जा सके, जिसमें दाता किडनी एन ब्लॉक भी शामिल है। यह पैंतरेबाज़ी न केवल पेरियूरेटरल ऊतक को चोट से बचने के द्वारा दाता के मूत्रवाहिनी की रक्त आपूर्ति और कार्य को पूरी तरह से संरक्षित और बनाए रखती है, इस प्रकार एक पोस्टऑपरेटिव हाइड्रोनेफ्रोसिस को रोकती है, बल्कि यह गुर्दे की धमनी (चित्रा 4) के पश्चात की सख्ती को भी रोकती है। इसलिए, गुर्दे प्रत्यारोपण ischemia गुर्दे धमनी की एक सख्ती से मध्यस्थता या एक hydronephrosis के कारण एक सख्त और इस्केमिक प्रत्यारोपण मूत्रवाहिनी द्वारा मध्यस्थता से बचा जाता है, इस मॉडल में दीर्घकालिक प्रत्यारोपण अस्तित्व को प्राप्त करने के लिए प्रमुख पहलुओं में से दो का प्रतिनिधित्व करते हैं। हालांकि, मूत्रवाहिनी धमनी की संतानों के लिए एनाटॉमिक वेरिएंट हैं। उदाहरण के लिए, कुछ चूहों में मूत्रवाहिनी धमनी गुर्दे की धमनी के बजाय पेट की महाधमनी के मुख्य ट्रंक से उत्पन्न होती है और इस संतान की स्थिति ज्यादातर गुर्दे की धमनी की संतानों से लगभग 0.2 से 0.5 मिमी डिस्टल होती है ( चित्र4 में दर्शाया गया है)। हमारे अनुभव से, हम C57BL / 6J पुरुष चूहों (अप्रकाशित अवलोकन) के बारे में 20% में महाधमनी से सीधे उत्पन्न मूत्रवाहिनी धमनी की घटना का अनुमान लगाएंगे, और शायद ही कभी BALBc जैसे चूहों के अन्य उपभेदों में। रिपोर्ट किए गए पारंपरिक सर्जिकल तरीकों में से कुछ में, इस महत्वपूर्ण पोषक पोत को कभी-कभी रक्षा करने के लिए उपेक्षित किया गया था, क्योंकि इसे नजरअंदाज कर दिया गया था और सीधे लिगेटेड या इलेक्ट्रोकॉटर किया गया था।
विशेष रूप से शारीरिक रूपों की इन स्थितियों में जब माउस की मूत्रवाहिनी धमनी की संतान गुर्दे की धमनी की संतानों के नीचे पेट की महाधमनी के मुख्य ट्रंक से उत्पन्न होती है, तो एन ब्लॉक ट्रांससेक्शन और महाधमनी एनास्टोमोसिस के पुनर्निर्माण की यह विधि और भी अधिक उपयुक्त है। अनुभवी सर्जन यह भी तय कर सकते हैं कि पारंपरिक या संशोधित एन ब्लॉक एनास्टोमोसिस का उपयोग कब करना है।
दूसरा, एक गांठरहित संवहनी एनास्टोमोसिस की एक नई, सरल और तेज तकनीक का आवेदन जिसमें एनास्टोमोसिस की अंतिम सिलाई पारंपरिक दृष्टिकोण की तरह ऊपरी टाई के अंत से बंधी नहीं होती है, लेकिन इसके बजाय एक मूल्यवान लाभ प्रदान करती है ( चित्रा 5 देखें)। यह तकनीक अभी भी गुर्दे के प्रत्यारोपण reperfusion पहले से ही शुरू किया गया है के बाद anastomosis के आकार को बढ़ाने या कम करने की अनुमति देता है। यह पोत सख्ती और intraabdominal रक्तस्राव के विकास से बचा जाता है। इसके अलावा, धमनियों या नसों के स्टेनोसिस से बचने के लिए एनास्टोमोसिस को लचीलापन से समायोजित करने और विस्तारित करने के लिए दोनों सिरों पर एंकरिंग टांके की मुक्त पूंछ को विपरीत दिशाओं में खींचा जा सकता है। सिलाई तकनीक, इसलिए, सर्जरी दोष सहिष्णुता दर में सुधार करती है औरनौसिखियों 20 के अनुकूल है।
तीसरा, दाता मूत्रवाहिनी और प्राप्तकर्ता मूत्राशय के एनास्टोमोसिस को एट्रूमैटिक रूप से निष्पादित करने के लिए, 21 जी और 30 जी सिरिंज सुइयों का उपयोग सहायक पंचर गाइड उपकरण के रूप में किया गया था। चूहों में, मूत्रवाहिनी काफी पतली और अंत-से-अंत एनास्टोमोसिस करने के लिए बहुत नाजुक होती है। आमतौर पर, दाता मूत्रवाहिनी को सिरिंज सुई के साथ मूत्राशय को छिद्रित करने के बाद मूत्रवाहिनी का मार्गदर्शन करने के लिए संदंश का उपयोग करके सीधे मूत्राशय में खींचा जाता है। हमने इस विधि में और सुधार किया है, 21 जी सिरिंज सुई (सेल्डिंगर प्रक्रिया) के लिए एक गाइड के रूप में एक पतले व्यास 30 जी सिरिंज सुई का उपयोग करके। इस एट्रॉमैटिकल तकनीक के साथ, 21 जी सिरिंज सुई पूरे मूत्राशय में प्रवेश नहीं करती है, जो मूत्राशय को नुकसान और मूत्रवाहिनी आरोपण17 (पूरक चित्रा 1) की कठिनाई को कम करती है।
प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण चरण धमनी उद्घाटन का विन्यास है। दोनों मामलों में (दाता और प्राप्तकर्ता) इन्हें बड़े करीने से काटा जाना चाहिए, अन्यथा यह एनास्टोमोसिस की गुणवत्ता को प्रभावित करेगा। इसके अलावा, इस नई गांठरहित तकनीक में, अंतिम सिलाई को गांठदार धागे से बांधा नहीं जाता है। एनास्टोमोसिस के बाद, सर्जन को शुरू में एनास्टोमोटिक स्टोमा को छोटा रखना चाहिए। फिर, reperfusion के बाद, इसे बड़ा करने के लिए ऊपरी और निचले सिरों पर धागे के सिरों को खींचें। एक और महत्वपूर्ण कदम जिसके बारे में किसी को पता होना चाहिए, वह है दाता गुर्दे की धमनी के चीरे की स्थिति क्योंकि मूत्रवाहिनी धमनी को संरक्षित करने के लिए पहचाना जाना चाहिए।
इस तकनीक की एक प्रमुख सीमा वर्णित सुधारों के अलावा है- कि ऑपरेटर को अभी भी उच्च आवश्यकताओं को पूरा करने की आवश्यकता है क्योंकि पोत की दीवारें छोटी और बहुत निविदा हैं। तीव्र और दृढ़ अभ्यास के बिना, सर्जरी की सफलता दर कम होगी।
संक्षेप में, यह रिपोर्ट चूहों में गुर्दे के प्रत्यारोपण प्रक्रिया के तकनीकी संशोधन की प्रयोज्यता को दर्शाती है। यहां प्रस्तुत सर्जरी प्रक्रिया एक मूल्यवान और विश्वसनीय विधि के रूप में साबित हुई है जो पिछले 10 वर्षों के भीतर कई शोध प्रकाशनों के एक आवश्यक घटक के रूप में सेवा कर रही थी 3,19,20। शास्त्रीय और व्यापक रूप से स्थापित सर्जरी मॉडल की तुलना में, यहां प्रदर्शित विधि कई महत्वपूर्ण सुधार प्रदान करती है जो कम जटिलता दर और सिंजेनिक किडनी ट्रांसप्लांट सेटिंग 3 में लंबे समय तक प्रत्यारोपण जीवित रहने की दर का कारण बनतीहै। यह उल्लेख करना महत्वपूर्ण है कि दोनों तकनीकें (संशोधित और पारंपरिक) प्राप्तकर्ता की मृत्यु दर को प्रभावित करने वाली समान आगे की जटिलताओं को साझा करती हैं जैसे कि आंत की क्षति, मूत्र का रिसाव, हाइड्रोनेफ्रोसिस, संक्रमण, आदि, जो अलग-अलग नहीं थे। संक्षेप में, यह नई सर्जिकल तकनीक समग्र सफलता दर और दीर्घकालिक ग्राफ्ट अस्तित्व में सुधार करती है जिससे यह गुर्दे के प्रत्यारोपण के बाद एलोइम्यून प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए एक विश्वसनीय उपकरण बन जाता है।
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Disclosures
कोई नहीं।
Acknowledgments
हम आवाज के साथ मदद के लिए डॉ Tiantian बाई टीम को धन्यवाद, चिकित्सा चित्रण में उसकी मदद के लिए मिस मियां पाओ. इस काम को जर्मन रिसर्च फाउंडेशन (DFG) द्वारा अंतर्राष्ट्रीय सहयोग (HO2581/4-1 से AH) और चीन के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (NSFC; #81760291 to FJ) को बढ़ावा देने के लिए आंशिक रूप से समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 30G-needles | Braun | 456300 | - |
| acepromazine | CP Pharma | Tranquisol P | - |
| Bepanthen eye ointment | Haus-Apotheke | PZN 01578675 | - |
| Bonn Micro Forceps | FST | 11083-07 | - |
| Box for insulation and oxygen supply device | RUSKINN | INVIV | - |
| C57BL/6J mice | Charles River. Germany | no catalog number | - |
| Carprofen | Zoetis | Rimadyl 50 mg/ml | - |
| CATHETER-FEP 26G | TERUMO | Surflo-W | - |
| Clip Applicator Forceps Style | FST | 18057-14 | - |
| Curved forceps | WPI | 14114-G | - |
| Cutasept skin disinfection | VWR | BODL980365 | - |
| Dehydrator | DIAPATH | Donatello | - |
| electrosurgical pen | Bovie | CHANGE-A-TIP | - |
| Embedding machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | - |
| Ethanol | Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 100092683 | - |
| Frozen platform | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | - |
| gauze pads, cotton swabs | Lohmann-Rauscher | 13353 | - |
| Glass slide | Servicebio | G6004 | - |
| HE dye solution set | Servicebio | G1003 | - |
| Heating mat | THERMO MAT PRO 30W | HTP-30 | - |
| hemostatic sponge | CuraSpon | J1276A | - |
| heparine-solution | Haus-Apotheke | PZN 03029820 | - |
| ice box | PETZ | No Catalog Number available | - |
| Imaging system | Nikon | Nikon DS-U3 | - |
| Inhalation anesthesia device | GROPPLER | BKGM 0616 | - |
| isoflurane | CP Pharma | Isofluran CP 1 ml/ml | - |
| ketamine | Zoetis | no catalog numer | - |
| Masson dye solution set | Servicebio | G1006 | - |
| metamizole | WDT | no catalog numer | - |
| Micro scissors | FST | 15000-00,15000-10 | - |
| Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm | FST | 18055-06 | - |
| Microscope | Leica | LEICAMZ6 | - |
| Microscope light | SCHOTT | KL2500LED | - |
| Neutral gum | SCRC | 10004160 | - |
| Oven | Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd | GFL-230 | - |
| Pathology slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | - |
| Saline solution (NaCl 0.9 %) | Haus-Apotheke | PZN 06178437 | - |
| scissors | Peha Instruments | 991083/4 | - |
| Slides | Servicebio | - | |
| small Petri dish | Sarstedt | 8,33,900 | - |
| straight forceps | WPI | 14113-G | - |
| surgical tape | BSN | 4120 | - |
| Suture Tying Forceps - 10 cm | FST | 18025-10 | - |
| Sutures(10-0) | Medtronic | N2540 | - |
| Sutures(4-0) | ETHILON | V4940H | - |
| Sutures(7-0) | ETHILON | 1647H | - |
| Syringe (0,3 mL) | BD | 324826 | - |
| Syringe (1 mL) | BD | 320801 | - |
| Tissue spreader | Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P | - |
| Upright optical microscope | Nikon | Nikon Eclipse E100 | - |
| xylazine | Bayer | Rompun | - |
| Xylene | Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 10023418 | - |
References
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