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Article de méthode

Une technique chirurgicale modifiée pour la transplantation rénale chez la souris

7K vues

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DOI :

10.3791/63434

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22 juillet 2022

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* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ce protocole présente une nouvelle technique chirurgicale de transplantation rénale de souris axée sur une stratégie d’anastomose artérielle modifiée. Une technique de suture vasculaire comprenant une méthode d’anastomose uretère-vessie simple et plus sûre est également présentée. Ces modifications raccourcissent le temps d’opération et améliorent le taux de réussite de la procédure de transplantation rénale de souris.

Résumé

La transplantation rénale chez la souris est une procédure chirurgicale compliquée et difficile. Il existe très peu de publications démontrant les étapes clés de cette opération. Par conséquent, cet article présente la technique et souligne les mises en garde chirurgicales associées à cette opération. En outre, des modifications importantes par rapport à la procédure conventionnelle sont démontrées. Tout d’abord, une plaque de l’aorte abdominale est coupée et préparée de sorte que les bifurcations proximales de l’artère rénale, y compris l’artère urétérale, soient transectées avec le rein du donneur en bloc. Cela réduit le risque de nécrose de l’uretère et évite le développement d’une occlusion des voies urinaires. Deuxièmement, une nouvelle méthode d’anastomose vasculaire est démontrée qui permet à l’opérateur d’augmenter ou de diminuer de manière flexible la taille de l’anastomose après que la reperfusion de transplantation rénale a déjà été initiée. Cela évite le développement de sténoses vasculaires et de saignements intraabdominaux. Troisièmement, une technique qui permet l’anastomose de l’uretère donneur délicat et de la vessie receveuse qui ne provoque pas de traumatisme est montrée. L’adoption de ce protocole peut raccourcir le temps d’opération et réduire les dommages à la vessie du receveur, augmentant ainsi considérablement le taux de réussite de l’opération pour les souris receveuses.

Introduction

Depuis que Sakowitz et al. ont développé des modèles murins de transplantation rénale en 1973 pour la première fois1, il s’est avéré être un outil expérimental important pour étudier les mécanismes de lésion ischémique de transplantation et de rejet allo-immun ainsi que pour développer de nouveaux traitements visant à prolonger la survie de l’allogreffe et éventuellement à atteindre une tolérance immunologique. Cependant, la technique chirurgicale s’est avérée complexe et très exigeante, présentant parfois des complications telles que des sténoses anastomotiques vasculaires entraînant une insuffisance rénale non immunologiquep....

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Protocole

Toutes les expériences sur les animaux ont été menées conformément aux lignes directrices de la directive 2010/63/UE du Parlement européen sur la protection des animaux utilisés à des fins scientifiques (Carte d’éthique animale: Ministère de la sécurité des aliments et des médicaments de Basse-Saxe, n ° 33.9-42502-04-11/0492). Effectuez des procédures à l’aide d’instruments chirurgicaux stériles et de consommables (autoclavés) et essayez de garder la zone opératoire aussi stérile que possible.

REMARQUE : Les souris mâles C57BL/6J ont servi de donneurs et de receveurs (modèle de greffe syngénique) tandis que les souris Balb/c ont servi de re....

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Résultats

Quatre semaines après la transplantation, la technique modifiée ainsi que la technique conventionnelle présentaient des signes modérés d’atrophie tubulaire rénale14,15 par rapport aux reins controlatéraux du receveur natif (figure 1). Le degré d’atrophie des tubules rénaux n’a démontré aucune différence significative entre les deux techniques différentes. La coloration trichrome de Masson Goldnersur 14,15.......

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Discussion

Alors que le modèle de transplantation cutanée chez la souris est simple et facile à réaliser pour étudier les événements de rejet alloimmun, les techniques chirurgicales pour étudier plus spécifiquement les altérations inflammatoires liées à l’alloimmune après le cœur16 et la transplantation rénale10 se sont avérées complexes et très exigeantes. Du point de vue du néphrologue de transplantation, l’établissement d’un modèle de transplantation rénale de souris efficace et st.......

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Remerciements

Nous remercions l’équipe du Dr Tiantian Bai pour son aide en voix off, Mlle Mian Pao pour son aide dans l’illustration médicale. Ce travail a été soutenu en partie par la Fondation allemande pour la recherche (DFG) pour promouvoir les collaborations internationales (HO2581/4-1 à AH) et la Fondation nationale de la science de Chine (NSFC; #81760291 à FJ).

....

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Aiguilles 30GBraun456300-acépromazine
CP PharmaTranquisol
P-Bepanthen pommade oculaireHaus-ApothekePZN01578675-Bonn
Micro ForcepsFST11083-07-Boîte
pour dispositif d’isolation et d’alimentation en oxygèneRUSKINNINVIV-C57BL
/6J  ; sourisRivière Charles. Allemagnepas de numéro
catalogue-CarprofèneZoetisRimadyl 50 mg/
26GTERUMOSurflo-W-Clip
Applicateur Pince StyleFST18057-14-Pince
courbeWPI14114-G-Cutasept
désinfection cutanéeVWRBODL980365-
DéshydrateurDIAPATHDonatello-stylo
électrochirurgicalBovieCHANGE-A-TIP-Machine
d’enrobageWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5-Ethanol
Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD100092683-Frozen
plate-formeWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5-gazes
, cotons-tigesLohmann-Rauscher13353-Lame
verreServicebioG6004-HE
kit de solutions de teintureServicebioG1003-Tapis
chauffantTHERMO MAT PRO 30WHTP-30-éponge
hémostatiqueCuraSponJ1276A-heparine-solution
Haus-ApothekePZN 03029820-
GlacièrePETZAucun numéro de cataloguedisponible-Système
d’imagerieNikonNikon DS-U3-Dispositif
d’anesthésie par inhalationGROPPLERBKGM 0616-isoflurane
CP PharmaIsofluran CP 1 ml/ml-kétamine
Zoetispas de numérode catalogue-Masson
dye solution setServicebioG1006-metamizole
WDTno catalognumer-Micro
ciseauxFST15000-00,15000-10-Micro
Serrefine ( Clamp ) Coudé / 16 mmFST18055-06-Microscope
LeicaLEICAMZ6-Microscope
lightSCHOTTKL2500LED-Neutral
gumSCRC10004160-Oven
Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., LtdGFL-230-Trancheuse de
pathologieShanghai Leica Instrument Co., LtdRM2016-Solution
saline (NaCl 0,9 %)Haus-ApothekePZN
06178437-ciseauxPeha Instruments991083/
4-SlidesServicebio-
petite boîte de PétriSarstedt8,33,900-pince
droiteWPI14113-G-ruban
chirurgicalBSN4120-Pince
à attacher les sutures - 10 cmFST18025-10-Sutures
(10-0)MedtronicN2540-Sutures
(4-0)ETHILONV4940H-
Sutures(7-0)ETHILON1647H-Seringue
(0,3 mL)BD324826-Seringue
(1 mL)BD
320801-Épandeur de tissusZhejiang Kehua Instrument Co., LtdKD-P-Microscope
optique droitNikonNikon Eclipse E100-xylazine
BayerRompun-
XyleneSinopharm Group Chemical Reagent Co. Ltd10023418-
de ml-CATHETER-FEP de

Références

  1. Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).
  2. Jiang, K., et al.

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Réimpressions et autorisations

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