Waiting
Traitement de la connexion…

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Tuina manipulation för att minska inflammation och broskförlust hos knä artros råttor

Published: June 30, 2023 doi: 10.3791/65451
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1
1Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
* These authors contributed equally

Summary

Vi presenterar ett protokoll för Tuina-manipulation utförd på gips-immobiliserade-inducerade knäartrosråttor. Baserat på de preliminära resultaten föreslog den att metodens effektivitet var beroende av minskning av inflammation och broskförlust.

Abstract

Kliniska prövningar tyder på att Tuina-manipulation är effektiv vid behandling av knäartros (KOA), medan ytterligare studier krävs för att upptäcka dess mekanism. Därför är manipulation av djurmodeller av knäartros avgörande. Detta protokoll tillhandahåller en standardprocess för Tuina-manipulation på KOA-råttor och en preliminär utforskning av Tuinas mekanism för KOA. Press- och knådningsmanipulationsmetoden (en typ av Tuina-manipulation som hänvisar till att pressa och knåda det specifika området på kroppsytan) appliceras på 5 akupunkter runt knäleden hos råttor. Kraften och frekvensen av manipulationen standardiserades genom fingertrycksregistreringar, och råttans position under manipulationen beskrivs i detalj i protokollet. Effekten av manipulation kan mätas med smärtbeteendetester och mikroskopiska fynd i led- och brosk. KOA-råttor visade signifikant förbättring av smärtbeteendet. Den inflammatoriska infiltrationen i ledvävnaden minskade i Tuina-gruppen och uttrycket av tumörnekrosfaktor (TNF)-α var signifikant lägre. Jämfört med kontrollgruppen var kondrocytapoptosen mindre i Tuina-gruppen. Denna studie ger ett standardiserat protokoll för Tuina-manipulation på KOA-råttor och preliminära bevis för att de terapeutiska effekterna av Tuina kan vara relaterade till att minska synovialinflammation och fördröjd kondrocytapoptos.

Introduction

Knäartros (KOA) är en degenerativ sjukdom som främst yttrar sig i ledvärk. Fibros, sprickbildning, sårbildning och förlust av ledbrosk är de främsta orsakerna till denna sjukdom1. KOA har en hög prevalens och kan leda till en djupgående inverkan på patienternas dagliga liv, vilket i allvarliga fall orsakar funktionsnedsättning. Bland personer i åldern 45-84 år ökar prevalensen av KOA med åldern, och prevalensen bland personer i åldern 85 år och äldre är 15 %, med en dominans hos kvinnor 2,3. Dessutom kan KOA medföra en allvarlig ekonomisk börda för både individen och samhället. En undersökning visade att de direkta sjukvårdskostnaderna för KOA per capita uppgick till 8 858 dollar ± 5 120 dollar per år4. Med det åldrande samhället har KOA blivit ett världsomspännande hälsoproblem och en stor social fråga, samt en aktuell fråga för vetenskaplig forskning.

Evidensbaserade studier har visat att Tuina-manipulation är effektiv vid behandling av KOA5. Tuina-manipulation kan lindra smärta och förbättra dysfunktion hos KOA-patienter, vars mekanism är relaterad till antiinflammatoriska effekter 6,7. Forskare fann att Tuina-manipulation effektivt hämmade uttrycket av inflammatoriska faktorer som interleukin (IL)-β och 5-hydroxytryptamin och bromsade degenerationen av ledbrosk i en kanin KOA modell8. Det tydde på att Tuina kunde främja blodcirkulationen och ämnesomsättningen på lesionsstället, vilket hjälpte till att rensa inflammatoriska faktorer som IL-1, IL-6 och tumörnekrosfaktor (TNF)-α, och därigenom lindra de kliniska symtomen på KOA9. Dessutom kan ledens passiva rörelse genom Tuina-manipulation främja penetration och diffusion av ledvätska i ledbrosket och förbättra vävnadens näringsmetabolism10. Andra studier tyder på att Tuina-manipulation effektivt kan förbättra de biomekaniska indexen hos KOA-patienter11. Manipulationer som appliceras på mjukvävnader kan förbättra stressfördelningen över extremiteter och förbättra balansfunktionen12,13. Samtidigt, med vissa ledjusteringsmanipulationer, kan inriktningen av de nedre extremiteterna också justeras för att korrigera onormala gångarter14,15.

Verkningsmekanismen för Tuina-manipulation vid behandling av KOA återstår att utforska, och därför är en experimentell studie nödvändig. Nyckeln till tillämpningen av Tuina på försöksdjur är standardisering av modellering, djurfixering och interventionsmetoder16. Modelleringsmetoden avgör om försöksdjuret kan uppvisa sjukdomens egenskaper. Under tiden kan lämpliga fixeringsmetoder underlätta ingreppet av Tuina-manipulationen och bättre återspegla effekten av Tuina. Standardiseringen av interventionsmetoder är den svåraste delen av Tuina-manipulationen. År 2010 nämnde det grundläggande systemet för kinesiska akupunkturstandarder akupunkturpunktsstandarderna för försöksdjur, vilket ger möjlighet till akupunktur och Tuina-operationer i djurförsök17. Det finns dock fortfarande svårigheter med att standardisera Tuina-manipulation. Det finns flera olika typer av Tuina-manipulation18. Valet av den specifika manipulationen beror främst på vilken sjukdom som ska behandlas och de terapeutiska teorier som artisten föredrar. I studien av Tuina för KOA har mer uppmärksamhet ägnats åt punktpresssmanipulation (att trycka på de specifika akupunkterna med tummen eller armbågen), Yizhichan tryckmanipulation (en tryckande manipulation genom att vicka på tummen) och press- och knådningsmanipulation (som hänvisar till att trycka och knåda det specifika området av kroppsytan med fingret eller handflatan)19. Press- och knådningsmanipulation är en av de mest använda Tuina-manipulationerna, som kombinerar pressning och knådning för att flytta den subkutana vävnaden20. Manipulation av tryck och knådning som appliceras på akupunkter kan främja blodcirkulationen och lindra smärta och representerar den terapeutiska effekten av Tuina på KOA19.

I detta protokoll kommer driften av press- och knådningsmanipulation på KOA-råttor att beskrivas i detalj, inklusive utvalda akupunkter, intensitet och frekvens av manipulationen och råttans kroppsposition, för att ge en referens för framtida forskning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Denna studie har klarat den djuretiska granskningen utförd av den experimentella djuretikkommittén vid Yueyang Hospital of integrated traditional Chinese and western medicine ansluten till Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (YYLAC-2022-166).

1. Förberedelse och gruppering av försöksdjur

  1. Förberedelse av djur
    1. Uppföd totalt 10 friska SPF SD-honråttor på 200-220 g vid rumstemperatur (18-21 °C), luftfuktighet 40%-50%, 12 h: 12 timmars cirkadiska rytmväxlingar. Utföra smärtrelaterade djurförsök i strikt överensstämmelse med relevanta bestämmelser i djuretiska riktlinjer och riktlinjer.
  2. Gruppering av djur
    1. Dela slumpmässigt in råttorna i Tuina-gruppen och kontrollgruppen. Behandla råttor i Tuina-gruppen med press- och knådningsmanipulation i 21 dagar efter modellering. Placera råttor från kontrollgruppen i samma Tuina-rum och placera dem i en svart tygpåse samtidigt som Tuina-gruppen genomgår behandling.

2. Modellering av djur

  1. Bedövning av djuret
    1. Använd isofluran för gasanestesi. Placera råttan i induktionslådan med en induktionskoncentration på 3 %. Vicka lådan efter att ha lagt ner råttan och bekräfta bedövningen när råttan rullar över utan att försöka återgå till bukläge.
    2. Ta bort råttan från induktionslådan och fixera nosen i bedövningsmasken. Justera isoflurankoncentrationen till 2 % för att bibehålla anestesi. Bekräfta bedövningen när råttan inte reagerar när den nyper i tassarna. Applicera ögonsalva på råttorna för att förhindra torrhet när råttorna sövs, eftersom ögonlocken inte kan stängas.
  2. Modelleringsmetod21
    1. Använd rakmaskin för att ta bort håret på höger bakben. Placera en medicinsk bomullsrondell mellan råttans högra fotled och höftled. Fixera höger knäled vid 180° förlängning med 5-6 lager vått gipsbandage jämnt. Spirallinda gipsbandaget med början från fotleden och täck 1/3 av det föregående. Använd en hårtork för att torka och härda gipset.
    2. Linda in gipset utvändigt med protesbasmaterial efter att gipsbandaget har torkat och härdat för att fixera gipset och förhindra att det gnager.
    3. Blanda protesbasmaterialen så att de blir klibbiga och fäst blandningen på utsidan av gipset (blandningen får inte överstiga bandagets kant, figur 1). När blandningen blir hård, stäng av bedövningsmaskinen och vänta tills djuret vaknar naturligt. Övervaka råttorna för att förhindra anestesiolyckor innan råttorna vaknar.
    4. Fäst plåstret på lämpligt sätt på råttans högra bakben, eftersom en tät fixering begränsar blodcirkulationen, medan en lös fixering tenderar att falla av. Observera blodcirkulationen i terminalextremiteten. Om svullnad i den yttersta delen eller en lila hy upptäcks, klipp omedelbart av en del av plåstret för att hjälpa till att återställa cirkulationen. Gör om gipset om det är trasigt och inte underhåller förlängningen av de nedre extremiteterna.
    5. Ta bort plåstret efter 3 veckors kontinuerlig immobilisering. Använd en kirurgisk sax för att klippa av protesens basmaterial utanför och gipsbandage. Skölj råttans nedre extremitet med koksaltlösning och torka den med gasbinda. Om det finns lokala hudskador, sterilisera med jodofor.
  3. Mall för verifiering22
    1. Röntgenbaserad verifiering
      1. Utför en röntgenundersökning av höger knä 1 dag efter avslutad modellering. Ta anteroposteriora röntgenbilder i ryggläge med höftflexion vid 30°, knäextension vid 0° och höftabduktion vid 15°. Håll knäskålen direkt framför knät och placera kylarröret 110 mm från knäleden.
      2. Ta laterala röntgenbilder i höger lateralt decubitusläge med höger höftböjning vid 30° och höger knäextension vid 0°. Gör höftböjningen i vänster extremitet i 70° och knäböjningen i 45° och placera kylarröret 110 mm från knäleden. Ställ in detektionsparametrarna som exponeringsspänning 50 kV, ström 250 mA, exponeringsdos 32 mAs och exponeringstid 128 ms.
      3. Jämför med normal röntgenbild av råttor, kontrollera att den modellerade knäröntgenbilden visar smalare ledutrymme med osteofythyperplasi i kanten.
    2. Osteoarthritis Research Society International (OARSI) får23 poäng
      1. Placera råttan i avlivningslådan och perfusionera CO2 med en hastighet av 30%-70% burvolym per minut. Sluta perfusionera CO2 efter att ha upptäckt att råttan är orörlig, inte andas och att pupillen är vidgad. Observera i ytterligare 2 minuter för att bekräfta döden.
        OBS: Cervikal luxation kan utföras efter CO2-baserad eutanasi som en sekundär form för att bekräfta dödsfall. Fäst råttan på bordet och ta tag i svansen med ena handen. Tryck ner råttans huvud med tummen och pekfingret på den andra handen. Bekräfta döden när du hör ljudet av en smäll, och råttan förlorar rörelse och hjärtslag samtidigt.
      2. Fixera råttan i ryggläge med en sprutnål på en skumskiva med höger bakben böjd i abduktion och utåtrotation. Nyp upp huden runt knäleden med en kirurgisk sax. Exponera musklerna runt knäleden genom att skära i huden och sedan skära av den subkutana fascian.
      3. Klipp av lårbenet och skenbenets diafys med en bensax och ta bort höger knäled. Ta försiktigt bort de extra mjuka vävnaderna, såsom muskler och ligament, utanför leden.
      4. Fixera fogen i 4% paraformaldehyd i 24-48 timmar vid 4 °C. Avkalka leden i 10% myrsyralösning i 3 dagar tills benvävnaden lätt kan petas med en nål.
      5. Placera och trimma den avkalkade vävnaden i dragskåpet och överför den till en uttorkningslåda i uttorkningsmaskinen. Tillsätt 75 % etanol i 4 timmar, sedan 90 % etanol i 2 timmar, följt av 95 % etanol i 1 timme, absolut etanol i 30 minuter, ytterligare en omgång färsk absolut etanol i 30 minuter, alkoholbensen i 5-10 minuter, xylen i 5–10 minuter, ytterligare en omgång färsk xylen i 5–10 minuter, vax i 1 timme, ytterligare en omgång färskt vax i 1 timme, och sista omgången färskt vax i 1 timme för uttorkning och nedsänkning av genomskinligt vax.
      6. Placera sedan vävnaden i maskinen för inbäddning. Skär vaxblocket i vaxskivor på 4 μm efter att paraffinet har stelnat och platta till skivan i varmt vatten. Lägg skivan på en glasskiva och torka. Förvara den i rumstemperatur.
      7. Observera broskprovet och poängsätt det enligt OA-broskhistopatologins bedömning (tabell 1)23. Om poängen för råttor efter modellering är signifikant högre än för de normala råttorna, var modelleringen framgångsrik.

Tabell 1. Bedömning av graden av OA-broskhistopatologi. Grad är djupprogression till brosk. Totalpoäng = Betyg x Iscensättning. 0 för normala leder, 24 för svår artrit. Klicka här för att ladda ner denna tabell.

Figure 1
Figur 1. Råttor immobiliserade i gips. Efter att råttorna sövts lindades deras högra nedre extremiteter med gipsbandage, fixerades i hyperutsträckt läge och täcktes med ett lager av protesbasmaterial utanför. Klicka här för att se en större version av denna figur.

3. Tuina manipulation

  1. Användningsområde
    1. Välj totalt 5 akupunkter på höger bakben på råttor, inklusive ST34, ST35, SP10, EX-LE4 och BL40 (figur 2). Lokalisera akupunkterna enligt principerna för akupunktpositionering i 24.
  2. Position för ansökan
    1. Klipp en svart trasa i en 9 cm x 15 cm påse med en sidoöppning och dra åt öppningen med ett rep. Innan Tuina-manipulationen drar du försiktigt i råttans svans för att få den att gräva sig in i påsen och exponera sina bakben utanför påsen.
    2. Använd ena handen för att hålla råttan i bukläge och håll svansen och bakbenet medan den andra handen utövar press- och knådningsmanipulation på en specifik akupunkt (Figur 3).
  3. Tuina manipulation
    1. Utför press- och knådningsmanipulation på de 5 akupunkterna på höger bakben i 2 minuter vardera. Placera artistens tumme på den valda akupunkturpunkten för att utföra rytmisk press och knådning, vilket driver ihop huden och subkutan vävnad i en cirkulär rörelse.
    2. Använd fingertrycksregistreringar (enheter i Newton) för att säkerställa konsekvent intensitet och frekvens av manipulationen. Håll intensiteten mellan 3-5 N och frekvensen vid 2 Hz (figur 4). Applicera manipulationen en gång om dagen i 21 dagar.

Figure 2
Figur 2. Akupunkters position. SP10 sitter 5 mm ovanför den inre knäleden hos råttor. ST34 sitter 5 mm ovanför den yttre knäleden hos råttor. EX-LE4 är lokaliserad i den mediala sidan av knäligamentet hos råttor. ST35 är lokaliserad i den laterala sidan av knäligamentet hos råttor. BL40 är placerad i mitten av den tvärgående poplitealranden. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Figure 3
Figur 3. Tuina manipulation tillämpas på råttor. Råttorna hölls i en svart säck med bakbenen blottade. Artisten höll råttans svans med vänster hand medan den högra handen utförde manipulationen. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Figure 4
Figur 4. Inspelningar av fingertryck. En enhet som registrerar kraften och frekvensen av fingertryck används för återkoppling i realtid om intensiteten och frekvensen i Tuina-manipulationsprocessen. A) Tryckgivare och transmissionsutrustning. (B) Registrering av fingertryck. (C) Den kraft som registrerats under Tuina-manipulationen. Klicka här för att se en större version av denna figur.

4. Tester av smärtbeteende

  1. Testa smärtbeteende före och efter modellering, och 1 dag efter (D1), 7 dagar efter (D7), 14 dagar efter (D14) och 21 dagar efter (D21) Tuina-manipulationen, inklusive mekanisk tillbakadragandetröskel och tasstillbakadragande latenstester.
  2. Mekanisk uttagströskel (MWT)
    1. Placera råttorna i ett 20 cm x 10 cm x 20 cm genomskinligt skåp i härdat glas placerat på en 40 cm hög scen som består av ett trådgaller med en storlek på 10 mm x 10 mm öppning. Förvara rumstemperaturen vid 23 °C ± 2 °C.
    2. Sedimentera råttorna i beteendelaboratoriet i minst 2 timmar per dag under beteendetestfasen för att undvika störningar i testresultaten på grund av djurens bristande anpassning till miljön i början av det formella testet. Placera råttorna i beteendelaboratoriet i 30 minuter innan det formella testet börjar för att underlätta deras anpassning till miljön och för att minska distraherande faktorer.
    3. Använd elektroniska Von Frey-fibrer för att mäta MWT. Stimulera råttan med fibern i mitten av foten och dra tillbaka fibern när råttan visar uppenbara rörelser som att höja benet och undvika. Maskinen kan automatiskt registrera det maximala tryckvärdet (N) i detta ögonblick.
    4. Starta nästa stimulering på samma råtta minst 15 s efter den aktuella stimuleringen. Överskrid inte 5 s under varje stimulering för att förhindra sensibilisering för taktila stimuli i råttans tassar. Upprepa testet 5 gånger tills skillnaden mellan de tre på varandra följande mätningarna är obetydlig (inom 10 N).
    5. Ta bort värdena med stora skillnader (maximi- och minimivärdena) och ta medelvärdet av de återstående tre värdena som mekanisk uttagströskel.
  3. Fördröjning av tassuttag (PWL)
    1. Placera råttorna i ett litet fack av genomskinligt härdat glas med en storlek på 20 cm x 10 cm x 20 cm. Täck den övre delen av facket med en genomskinlig glaskåpa med ventilationshål. Håll temperaturen på den genomskinliga glasplattan vid 28-30 °C, på vilken facket är placerat.
    2. Låt råttorna bosätta sig i denna miljö i minst 30 minuter för att acklimatisera sig innan varje formellt test börjar. Om råttor kissar eller bajsar i facket, rengör det med absorberande papper i tid för att undvika att påverka den efterföljande ljusstrålningens värmeöverföring.
    3. Fokusera strålkastaren på mitten av råttans fot och tryck på Start-knappen . Tryck på stoppknappen när råttan visar uppenbara beteenden som indragning av foten eller tassslickning och registrera tiden vid denna tidpunkt. Strålkastarbestrålningstiden bör inte överstiga 20 s för att undvika skador på råttans hud.
    4. Utför nästa bestrålning på samma råtta efter minst 10 minuter för att förhindra sensibilisering. Mät 5x på varje råtta.
    5. Ta bort värdena med stora skillnader (det högsta och det lägsta värdet). Ta medelvärdet av de återstående värdena som PWL.

5. Beredning av prover

  1. Utför eutanasi på musen enligt beskrivningen i 2.3.2.1.
  2. Beredning av synovialmembran
    1. Fixera råttan i ryggläge med en sprutnål på en skumskiva med höger bakben böjd i bortförandet och utåtrotationen. Nyp upp huden runt knäleden med en kirurgisk sax och exponera musklerna runt knäleden på råttor genom att skära i huden och sedan klippa av den subkutana fascian.
    2. Ta patellarligamentet som ett landmärke för att ta bort muskelgrupperna ovanför patellarligamentet. Snitta försiktigt slutet på patellaligamentet (vid tibial tuberosity) och hitta ledhinnan när ligamentet kläms uppåt underifrån.
    3. Klipp försiktigt av ledvävnaden med en ögonsax och skölj bort blodet och ledvätskan med förkyld koksaltlösning. Fixera ledhinnan i 4 % paraformaldehyd i minst 48 timmar efter att vatten absorberats från vävnadsytan med ren gasväv.
    4. Bered provet på samma sätt som i punkterna 2.3.2.5–2.3.2.6. Utför poängsättning enligt steg 2.3.2.7.
  3. Utföra hematoxylin- och eosinfärgning
    1. Avvaxa till vatten med xylen i 20 minuter, ersätt med ytterligare en omgång färsk xylen i 20 minuter, därefter behandla med vattenfri etanol i 5 minuter, ersätt med ytterligare en omgång färsk vattenfri etanol i 5 minuter, tillsätt sedan 90 volymprocent etanol i 5 minuter, 80 volymprocent etanol i 5 minuter, 70 volymprocent etanol i 5 minuter. och slutligen destillerat vatten i 5 min.
    2. Sänk ner objektglaset i hematoxylinfärgningslösning i 3-8 minuter. Ta bort objektglaset och skölj bort fläcken med destillerat vatten. Flytta den till differentieringsvätskan (1 % saltsyraalkohol) i nästan 30 s, så att objektglaset bleknar till ljusblått. Skölj den med destillerat vatten och lägg i eosinfärgningslösning i 1-3 min.
    3. Torka objektglaset med 95 % etanolvolymfraktion i 5 minuter, ersätt med en ny omgång färsk 95 % etanol i 5 minuter, följt av vattenfri etanol i 5 minuter, ersätt med en ny omgång färsk vattenfri etanol i 5 minuter.
    4. Gör objektglaset genomskinligt genom att tillsätta xylen i 5 minuter, ersätt det med en ny omgång färsk xylen i 5 minuter och försegla det sedan med neutralt harts.
  4. Terminal-deoxinukleotidyltransferasmedierad nickendmärkning (TUNEL) på brosk
    1. Torka broskprovet i vattenfri etanol, 90 % etanol, 85 % etanol och 75 % etanol tills avvaxningshydratiseringen är klar. Blötlägg i PBS i 5 min. Tillsätt 3% H 2O2 droppvis i 10 min.
    2. Tillsätt proteinas K arbetslösning droppvis och smält vid 37 °C i 10 minuter. Tillsätt 20 μL märkningsbuffert per skiva för att hålla den fuktig och skaka av överflödig vätska efter beredning av arbetslösningen. Tillsätt 20 μl arbetslösning till varje objektglas och inkubera i 2 timmar vid 37 °C i en våt låda.
    3. Tillsätt 50 μl av förslutningslösningen droppe för droppe och stäng i 30 minuter. Tillsätt sedan 50 μl utspädd biotinylerad anti-digoxinantikropp (1:100 spädning) droppvis och inkubera vid 37 °C i 2 timmar i en våt låda. Tillsätt 10 μl spädningsvätska med SABC-antikroppar (spädning 1:100) droppvis och inkubera vid 37 °C i 2 timmar i en våt dosa.
    4. Tillsätt DAB-färgframkallningslösning (50 μL vardera av reagenser A, B och C i 1000 μL destillerat vatten) droppvis i 10-15 min. Färgutvecklingen fullbordas när den är brungul granulär.
    5. Färga om med hematoxylin i 3 s. Efter gradienttorkning och transparent behandling, torka i rumstemperatur och försegla objektglaset försiktigt med neutralt gummi. Var uppmärksam på att undvika att lämna bubblor och överflödigt lim.
  5. Immunhistokemisk analys av IL-1β och TNF-α
    1. Avvaxa objektglasen rutinmässigt i xylen och återfukta dem i gradientalkohol. Inaktivera det endogena peroxidaset i sektionerna med 3 %H2O2. Placera objektglashållaren i 95 °C citratbuffert (pH 6,0) och inkubera i ett vattenbad över 95 °C i över 20 minuter. Ta ut inkubationslådan och låt den stå i rumstemperatur i minst 20 minuter.
    2. Inkubera 5 % normalt getserum med PBS i 10 minuter vid 37 °C och skaka av överflödig vätska. Tillsätt 150 μL antikropp droppe för droppe och låt stå vid 37 °C i 1 timme, förvara sedan över natten vid 4 °C. Värm upp igen vid 37 °C i 45 minuter nästa dag.
    3. Tvätta 3 gånger med PBS i 5 min vardera. Täck vävnaden på objektglaset med 3 % BSA och försegla den vid 37 °C i 30 minuter. Tillsätt 150 μl antikropp II droppe för droppe och låt stå i rumstemperatur i 1 timme. Tvätta 3 gånger med PBS i 5 minuter vardera och tillsätt 150 pL DAB-färgutvecklingsvätska droppvis. Observera graden av färgning under mikroskopet tills provet blir brungult även för blotta ögat.
    4. Skölj omedelbart med PBS i 10 min. Färga igen med hematoxylin, torka i gradientalkohol, gör objektglasen genomskinliga i xylen och försegla med neutralt tuggummi.
  6. Statistisk analys
    1. Immunohistokemiskt färgade snitt med positivt uttryck av det associerade proteinet är gula eller brungula. Poängsätt intensiteten av positivt uttryck med Image J-programvara för varje grupp av immunhistokemiska sektioner och använd utvärderingskriterierna för genomsnittlig optisk densitet (AOD), beräknad med IOD dividerat med area.
    2. Använd analysprogram för statistisk analys. Använd t-test om data överensstämde med normalfördelning och chi-två, och använd icke-parametriskt test om de inte överensstämde med normalfördelning. Analysera upprepade mätdata genom generaliserade estimeringsekvationer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Tester av smärtbeteende
MWT-resultaten visade att MWT för höger bakben efter modellering var signifikant lägre än tidigare (p<0,05). Jämfört med kontrollgruppen var MWT hos råttor signifikant förhöjt efter Tuina (p<0,05; Figur 5 och tabell 2).

Figure 5
Figur 5. Resultat av provning av mekanisk uttagströskel (Equation 1, Newton). Det fanns 5 råttor vardera i Tuina-gruppen och kontrollgruppen. Råttornas MWT vid olika tidpunkter visas i figuren. Efter modelleringen minskade råttornas MWT signifikant, vilket tyder på att råttornas smärta förvärrades, och KOA-modellen förbereddes framgångsrikt. Därefter förbättrades MWT gradvis, vilket tyder på smärtlindring. Den generaliserade estimeringsekvationen användes för statistisk beräkning. Skillnaden i MWT mellan Tuina-gruppen och kontrollgruppen var statistiskt signifikant vid dag 21 jämfört med den efter modellering. Jämförelsen mellan de två grupperna var statistiskt signifikant vid D7, D14 och D21, *p<0,05. Dessutom har råttor i Tuina-gruppen högre MWT än i kontrollgruppen. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Tabell 2. Mekanisk uttagströskel ( Equation 1, N). Jämförelse före och efter modellering, #p<0.05. Jämförelse mellan Tuina-gruppen och kontrollgruppen, *p<0,05. Klicka här för att ladda ner denna tabell.

PWL-resultaten visade att PWL för höger bakben efter modellering var signifikant kortare än tidigare (p<0,05). Jämfört med kontrollgruppen förlängdes MWT hos råttor signifikant efter Tuina (p<0,001; Figur 6 och tabell 3).

Figure 6
Figur 6. Resultat av testet av fördröjning av tassuttag (Equation 1, sekund). Det fanns 5 råttor vardera i Tuina-gruppen och kontrollgruppen. Råttornas PWL vid olika tidpunkter visas i figuren. Efter modelleringen minskade PWL hos råttorna signifikant, vilket tyder på att råttornas smärta förvärrades, och KOA-modellen förbereddes framgångsrikt. Till en början var förbättringen av PWT i Tuina-gruppen långsammare än i kontrollgruppen. Efter D7 förbättrades råttorna i Tuina-gruppen snabbt och överträffade kontrollgruppen vid D21. Den generaliserade estimeringsekvationen användes för statistisk beräkning. Skillnaden i MWT mellan Tuina-gruppen och kontrollgruppen var statistiskt signifikant vid dag 21 jämfört med den efter modellering. Jämförelsen mellan de två grupperna var statistiskt signifikant vid D7, D14 och D21, ***p<0,001. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Tabell 3. Latens för uttag av tassar (Equation 1, s). Jämförelse före och efter modellering, #p<0.05. Jämförelse mellan Tuina-gruppen och kontrollgruppen, ***p<0,001. Klicka här för att ladda ner denna tabell.

Histomorfologisk analys
Vid analys av synovialmembranet i kontrollgruppen sågs inflammatorisk cellinfiltration och fibrös vävnadshyperplasi i synovialvävnad. Synovialcellerna var oorganiserade och en liten mängd kapillär hyperplasi sågs runt ledvävnaden (Figur 7).

Figure 7
Figur 7. Mikroskopisk observation av ledvävnaden. A) Synovialvävnad i kontrollgruppen. Det oorganiserade arrangemanget av synovialceller ses i figuren. De prolifererande kärlen är markerade med röda pilar och inflammatoriska celler är markerade med svarta pilar. (B) Synovialvävnad i Tuina-gruppen. Synovialcellerna var mer prydligt ordnade. Inflammatoriska celler är huvudsakligen fördelade i kanterna snarare än att infiltrera inåt. De prolifererande kärlen är markerade med röda pilar och inflammatoriska celler är markerade med svarta pilar. Klicka här för att se en större version av denna figur.

I Tuina-gruppen var synovialcellerna prydligt ordnade, med en liten mängd inflammatorisk cellinfiltration, fibrös vävnadshyperplasi och en liten mängd kapillär hyperplasi synlig vid vävnadskanterna.

Vid analys av brosket såg man att det positiva området för TUNEL-färgning i Tuina-gruppen var signifikant mindre än i kontrollgruppen, vilket tyder på att det fanns färre apoptotiska kondrocyter i Tuina-gruppen (Figur 8).

Figure 8
Figur 8. TUNEL-färgning av brosket. A) Brosk i kontrollgruppen. Den röda delen av figuren är det positiva området för TUNEL-färgning. (B) Brosk i Tuina-gruppen. Den röda delen av figuren är det positiva området för TUNEL-färgning. Det positiva området i Tuina-gruppen är betydligt mindre än i kontrollgruppen. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Immunhistokemi
För TNF-α fanns det en signifikant skillnad i synovialt TNF-α-uttryck mellan de två grupperna, och uttrycket i Tuina-gruppen var signifikant lägre än i kontrollgruppen (tabell 4).

Tabell 4. TNF-α-uttryck i synovium (Equation 1, *10-2). Två oberoende t-test användes för statistisk analys, *p<0.05. Klicka här för att ladda ner denna tabell.

För IL-1β fanns det ingen signifikant skillnad i mängden synovialt IL-1β-uttryck mellan de två grupperna, mätt med statistiken i bild J. Medelvärdet för Tuina-gruppen var dock något lägre, vilket tyder på mindre uttryck (tabell 5).

Tabell 5. IL-β-uttryck i synovium (Equation 1, *10-2). Två oberoende t-test användes för statistisk analys. Klicka här för att ladda ner denna tabell.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denna studie ger ett protokoll för Tuina-manipulation på KOA-råttor. Genom smärtbeteendetester och histomorfologiska fynd föreslog den att en sådan serie av Tuina-manipulation applicerad på KOA-råttor kunde minska synovialinflammation och broskapoptos, vilket skulle kunna vara en referens till Tuina-manipulation på djurmodeller av KOA.

Det finns flera kritiska procedurer under protokollet. För det första är det viktigt att välja en lämplig metod för att inducera KOA-modellen. Det finns olika metoder för att inducera KOA-modellen, inklusive injektion av ledhålan25, intraartikulär kirurgi 26,27, ledbromsningsmetod28,29, etc. Eftersom KOA-modeller inducerade med invasiva metoder skulle lämna sår nära lederna, vilket kan störa effekten av Tuina-manipulation, valde vi den icke-invasiva metoden för ledimmobilisering. Ledimmobiliseringsmetoden kan delas in i hyperextension och hyperflexionsfixering. Shang et al. jämförde effekterna av dessa två fixeringsmetoder och fann att det var liten skillnad i effekten av broskapoptos23. Deras försökspersoner var dock kaniner, som är större i storlek och relativt lätta att fixa jämfört med råttor. Fast gips i böjningsläge är mer benägna att falla av under råttors gnagande. Därför valde vi immobiliseringsmetoden för hyperextensionsfixering för att inducera KOA. Vi hänvisade till He et al. och använde gipsbandaget med en tungdepressor som fixeringsanordning30. Råttornas gnagförmåga var dock starkare än väntat, och apparaten kunde inte fungera som fixering. Senare hittade vi ett slags protesbasmaterial, som kan bilda ett formbart men hårt skal på utsidan av gipset, och effektivt minska slitaget på fixeringsanordningen av råttor som gnager. En tät fixering skulle påverka blodcirkulationen i de nedre extremiteterna, medan en alltför lös fixering skulle vara lätt att falla av. Därför bör cirkulationen i råttornas nedre extremiteter observeras dagligen under de 3 veckorna av modelleringen. Fixeringen ska släppas när de nedre extremiteterna blir svullna och lila. Sätt tillbaka fixeringen när den är lös och råttorna kan böja knäna. Under denna studie var råttorna inte begränsade från att umgås under modelleringen, men det visade sig att de tuggade på varandras fixering för att hjälpa varandra att bryta sig loss. Kanske hade det resulterat i bättre modellering om råttorna hade isolerats. Isolering kan dock bidra till råttornas depression och stereotypa beteende.

Vi anser att den viktigaste punkten i Tuina-manipulation är att hålla intensiteten och frekvensen konsekvent. Tidigare forskning har kommit fram till att den optimala intensiteten för Tuina bör vara 80 % av dess maximalt tolerabla intensitet31. Vid denna tidpunkt bör råttorna visa tecken på att få mekanisk stimulering, men utan tecken på smärta eller indragning av tassen. Vi testade den maximalt tolerabla intensiteten hos råttor, som är cirka 5-8 N. Så vi ställer in tryckintensiteten till 3-5 N, vilket kan leda till bättre effektivitet. Manipulationsfrekvensen är 2 Hz, enligt Tuinas lärobok. Tidigare studier har inte satt en standardisering för Tuina-manipulation, och intensiteten och frekvensen kan variera efter att ha använt olika akupunkter och ändrat vänster och höger hand under experimentet, vilket kan påverka resultatens noggrannhet. Fingertrycksinspelningarna som används i detta experiment ger realtidsobservation av intensiteten och frekvensen av manipulationen under experimentet, vilket kan hålla manipulationen konsekvent. Vissa forskare använder maskiner för att simulera Tuina-manipulation och tillämpa den på djur, vilket har fördelen att manipulationen är standardiserad.

För urvalet av akupunkter hänvisade vi till studien av Wang och Liu och valde fem akupunkter runt knäleden för att underlätta manipulation33,34. Vi valde den gipsimmobiliserade metoden för att inducera KOA, som oftast slutar med muskelatrofi och ledstelhet35. ST34 och ST35 tillhör fotens Yangming-magmeridian, som är avgörande vid behandling av atrofi (mestadels manifesterad som svaghet och muskelatrofi) i traditionell kinesisk medicinteori och har god anpassningsförmåga för KOA inducerad av den gipsimmobiliserade metoden. EX-LE4 är en vanlig akupunkt för klinisk behandling av KOA, som oftast används tillsammans med ST35. fann att akupunktur och moxibustion på ST35, ST36 och EX-LE4 kunde minska uttrycket av inflammatoriska faktorer i synovialmembranet36. SP10 och BL40 är kärnan i klinisk Tuina-behandling för KOA 37,38, och SP10 används oftast vid Tuina-recept för KOA39.

En svår del av Tuina-manipulationen är fixeringen av råttor. Råttor kan kämpa eller undvika manipulation, vilket ökar svårigheten att utföra experimentet. Även om startspärrar för råttor kan immobilisera råttor och exponera deras bakben, begränsar utvecklingen av KOA böjning och förlängning av bakbenen. Att sätta råttor med startspärrar kan därför leda till smärta och ofullständig exponering av bakbenen, vilket kan påverka manipulationen av Tuina. Vi designade en tygpåse med en utgång baserat på råttans preferens för mörka miljöer och dess tendens att gräva. Stäng tygpåsen när råttan kommer in, det vill säga att huvudet och frambenen ligger i påsen och bakbenen är exponerade utanför. Denna metod kan effektivt minska råttornas kamp och hålla dem tysta under Tuina.

Resultaten av förexperimentet tyder på att Tuina-manipulation kan minska den inflammatoriska responsen i ledvävnad och minska apoptos av kondrocyter, vilket fungerar som en behandling för KOA. Det behövs dock fler studier för att verifiera detta.

Det finns flera brister i detta protokoll. För det första gör råttornas lilla storlek det svårt att lokalisera akupunkterna exakt. Operatörens fingrar är för stora jämfört med akupunkterna på råttor, vilket kan påverka effekten av Tuina-manipulation. Vi hade övervägt att lägga till en gummipartikel på ca 2 mm i diameter på fingertoppen för att öka noggrannheten i att stimulera akupunkter. Men partiklarna kan leda till högre tryckintensitet och öka svårigheten att kontrollera konsistensen. Dessutom var det mer sannolikt att det skadade fingertrycksregistreringarna, så vi valde inte den här metoden. För det andra ignorerade vår studie förändringen av inflammatoriska faktorer i ledvätskan och kondrocytapoptosen, vilket kan försvaga studiens trovärdighet. Vi kommer att intensifiera forskningen inom detta område framöver. För det tredje är press- och knådningsmanipulation en av Tuina-manipulationerna, och kan inte omfatta effekterna av Tuina vid behandling av KOA. Andra Tuina-manipulationer som implementerats på djur måste undersökas ytterligare, inklusive manipulation av ledrörelser och gnidning. Dessutom skulle positiv kontroll bättre visa effektiviteten av manipulationen, men den var inte utformad i denna studie, och vi kommer att lägga till detta i en uppföljningsstudie.

Sammantaget ger denna studie ett standardiserat protokoll för Tuina-manipulation på KOA-råttor, och effektiviteten av manipulationen har verifierats genom smärtbeteendetester och mikroskopiska fynd. Protokollet visar preliminärt att de terapeutiska effekterna av Tuina kan vara relaterade till att minska ledinflammation och fördröjd kondrocytapoptos. Mer forskning behövs för att utforska mekanismen för Tuina för KOA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna förklarar att de inte har några motstridiga intressen.

Acknowledgments

Detta arbete stöddes av Shanghai Critical Clinical Specialties Construction Project (anslagsnummer: Shslczdzk04001); seglingsprogrammet för Shanghai Science and Technology Commission (bidragsnummer: 22YF1444300); Projekt inom budgeten för Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (anslagsnummer: 2021LK091).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
absolute ethanol Supelco PHR1070 For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus ahlborn 2450-1 For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody Sigma-Aldrich SAB4200669 For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta abcam ab283818 For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit Solarbio DA1010 For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials Shanghai New Century 20000356 For model making
eosin bioswamp  PAB180016  For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings Suzhou Changxian Optoelectronic Technology CX1003w For Tuina manipulation
formic acid solution Sigma-Aldrich 695076 For decalcification
H2O2 Sigma-Aldrich 386790-M For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin bioswamp  PAB180015 For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company S10010533 For gas anesthesia
neutral resins bioswamp  PAB180017 For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution Sigma-Aldrich 100496 For histology
PBS Sigma-Aldrich P3813 For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus IITC Life Science / For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage WANDE 20150023 For model making
Proteinase K Sigma-Aldrich 124568 For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody Proteintech 60291-1-Ig For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL  Servicebio GDP1042 For HE stain IHC or TUNEL
Wax Sigma-Aldrich 327204 For making specimen
xylene Shanghai Sinopharm Group 100092 For making specimen

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Joint Surgery Group of Chinese Orthopaedic Association, Chinese Association of Orthopaedic Surgeons, National Clinical Research Center for Geriatric Diseases, Chinese Journal of Orthopaedics. Chinese Osteoarthritis Treatment Guidelines (2021 Edition). Chinese Journal of Orthopaedics. 41 (18), 24 (2021).
  2. David, S., et al. Epidemiology of knee osteoarthritis in general practice: a registry-based study. BMJ Open. 10 (1), 031734 (2020).
  3. Callahan, L. F., Cleveland, R. J., Allen, K. D., Golightly, Y. Racial/Ethnic, Socioeconomic, and Geographic Disparities in the Epidemiology of Knee and Hip Osteoarthritis. Rheumatic Disease Clinics of North America. 47 (1), 1-20 (2021).
  4. Wang, K., Dong, X., Lin, J. H. Investigation of Medical Costs of Disease In Patients With Osteoarthritis of the Knee Joint. National Medical Journal of China. 97 (1), 4 (2017).
  5. Perlman, A., et al. Efficacy and Safety of Massage for Osteoarthritis of the Knee: a Randomized Clinical Trial. Journal of General Internal Medicine. 34 (3), 379-386 (2019).
  6. Xing, H., et al. Therapeutic massage for knee osteoarthritis: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Journal of Acupuncture and Tuina Science. 19 (5), 354-363 (2021).
  7. Seo, B. R., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science translational medicine. 13 (614), (2021).
  8. Wu, J. H., Zhang, C., Dong, S. J., Yin, H. Effects of Massage with #34;Relaxing Tendons" Technique on the Interleukin-1B and 5-hydroxytryptamine Levels in the Joint Fluid of a Rabbit Knee Osteoarthritis Model. Chinese General Practice. 21 (6), 688-693 (2018).
  9. Luo, R. The effects of IL-1B,IL-6,IL-13,IL-26,TNF-a by patellar manipulations on rabbit knee osteoarthritis model. Guangxi University of Traditional Chinese Medicine. , (2017).
  10. Qiu, F., Li, C., Wu, X., Liu, Y., Zhang, X. Effect of Massage on the Function of Foot-Yangming Meridian-Muscle in Patients with Knee Osteoarthritis. Acta Chinese Medicine. 36 (3), 649-655 (2021).
  11. Yang, B., Li, S. Research Progress of Massage in Improving Biomechanical Indexes of Knee Osteoarthritis. Acta Chinese Medicine. 37 (12), 2571-2576 (2022).
  12. Li, C., Qiu, F., Ding, J., Hu, G., Zhang, X. Curative Observation of Retaining of Heated Needle at Trigger Points Combined with Manipulation for Muscles along Meridians in Treating Knee Osteoarthritis. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 37 (11), 2157-2162 (2020).
  13. Ding, X., Zhang, X., Hou, Y., Zhao, Z., Ye, X. Effect of massage manipulation on joint stiffness of knee osteoarthritis patients based on "spine-pelvis-knee" holistic diagnosis and treatment pattern. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine. 55 (08), 54-57 (2021).
  14. Fu, Y., Gong, L., Li, Y. The clinical studies of Rolling combined with Pulling Manipulation on Early and Middle-term. Jilin Journal of Chinese Medicine. 40 (07), 958-962 (2020).
  15. Jiang, J., Hu, X., Tang, R., Qiu, F., Huang, L. Change of lower limb force line in treating knee osteoarthritis with manipulation. Journal of Changchun University of Chinese Medicine. 34 (01), 129-132 (2018).
  16. Liang, Y., et al. Some issues on animal experiments standardization of acupuncture and moxibustion. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 25 (09), 2299-2300 (2014).
  17. Guo, Y., Liu, Y., Liu, Q., Chen, Z., Zhao, X. Basic System of Chinese Acupuncture Standard. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 31 (6), 549-550 (2011).
  18. YAN, X., Yan, J. Study on the Standardization of Classification of Tuina Manipulation. Acta Chinese Medicine. 32 (5), 875-878 (2017).
  19. Aikebaier, G., Lu, X., Liu, J., Liu, l, Wang, S. Analysis on Manipulation and Acupoint Selection Laws of Massage for Treatment of Knee Osteoarthritis Based on Data Mining Technology. Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine. 29 (5), 23-29 (2022).
  20. Gong, L., Wuquan, S., Zhang, H., Chen, Z. Research of Yan Juntao's Academic Experiences of Differential Treatment and Manipulation for Treating of Knee Osteoarthritis. Chinese Journal of Traditional Medical Traumatology & Orthopedics. 24 (7), 16-19 (2016).
  21. Qian, J., Xing, X., Liang, J. Two Methods to Establish Rat Model of Osteoarthritis of the Knee. Research and Exploration in Laboratory. 33 (11), 23-27 (2014).
  22. Liu, J., et al. Experimental study of a modified Videman method for replicating knee osteoarthritis on rabbit. Rehabilitation Medicine. 30 (03), 212-219 (2020).
  23. Moskowitz, R. W. Osteoarthritis cartilage histopathology: grading and staging. Osteoarthritis and Cartilage. 14 (1), 1-2 (2005).
  24. Shen, M., Li, Z., Shen, J. Preliminary Exploration of Experiment Teaching on Experiment Acupuncture Science. Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 7 (02), 130-131 (2009).
  25. Jeong, J., et al. Anti-osteoarthritic effects of ChondroT in a rat model of collagenase-induced osteoarthritis. BMC complementary and alternative medicine. 18 (1), 131 (2018).
  26. Hulth, A., Lindberg, L., Telhag, H. Experimental osteoarthritis in rabbits. Preliminary report. Acta orthopaedica Scandinavica. 41 (5), 522-530 (1970).
  27. Tawonsawatruk, T., Sriwatananukulkit, O., Himakhun, W., Hemstapat, W. Comparison of pain behaviour and osteoarthritis progression between anterior cruciate ligament transection and osteochondral injury in rat models. Bone & Joint Research. 7 (3), 244-251 (2018).
  28. Zhou, Q., et al. Cartilage matrix changes in contralateral mobile knees in a rabbit model of osteoarthritis induced by immobilization. BMC musculoskeletal disorders. 16, 224 (2015).
  29. Zeng, J., et al. Establishment and identification of experimental rabbit model of knee osteoarthritis. Chinese Journal of Clinical Research. 29 (5), 679-682 (2016).
  30. Shang, P., et al. Comparison with two kind osteoarthritis animal models reduced by plaster immobilization in extend excessive position and bend excessive position respectively. Orthopaedic Biomechanics Materials and Clinical Study. (1), 11-14 (2006).
  31. He, Y., et al. Evaluation of the effect of improved cast immobilization method on rabbit knee osteoarthritis model. Chinese Imaging Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 18 (2), 198-219 (2020).
  32. Pengfei, S., et al. Possible mechanism underlying analgesic effect of Tuina in rats may involve piezo mechanosensitive channels within dorsal root ganglia axon. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (6), 834-841 (2018).
  33. Wang, Y. Mechanisms of Massage Mediating Chondrocyte Apoptosis in Knee Osteoarthritis Through Piezo 1/JAK2 Signaling Pathway. Shandong University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  34. Liu, J. Effect of Massage on TLR4/MyD88 Signal Transduction Pathway in Rat Knee Osteoarthritis Model. Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  35. Yu, S., Zhou, J., Pang, X. Advances in induced animal models of knee osteoarthritis. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 25 (5), 50-55 (2022).
  36. Tan, Q., et al. Acupuncture combined with moxibustion regulates the expression of circadian clock protein in the synovium of rats with osteoarthritis. Chinese Journal of Tissue Engineering Research. 26 (11), 1714-1719 (2022).
  37. Zhang, Z., et al. A Review of Massage Therapy for Knee Osteoarthritis. Henan Traditional Chinese Medicine. 39 (1), 146-149 (2019).
  38. Gong, L., Sun, W., Zhang, H., Chen, Z. Research of Yan Juntao's Academic Experiences of Differential Treatment and Manipulation for Treating of Knee Osteoarthritis. Chinese Journal of Traditional Medical Traumatology & Orthopedics. 24 (7), 16-19 (2016).
  39. Chen, C., Zhang, H. Research on the rules of acupoint selection for the treatment of knee osteoarthritis with massage based on data mining. Hainan Medical Journal. 29 (18), 2617-2619 (2018).

Tags

Medicin nummer 196
Tuina manipulation för att minska inflammation och broskförlust hos knä artros råttor
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Su, X., Song, P., Meng, F., Xu, W.,… More

Su, X., Song, P., Meng, F., Xu, W., Xing, H., Zhang, H. Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats. J. Vis. Exp. (196), e65451, doi:10.3791/65451 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter