Flash de congélation et Cryosectioning E12.5 cerveau de souris

Summary

Démonstration dans cette vidéo sont les techniques pour flash de congélation et de sectionnement des tissus cérébraux embryonnaires à partir de la souris. Conseils utiles pour l'utilisation du cryostat sont donnés, y compris les méthodes de dépannage qui peut être utilisé pendant la coupe pour s'assurer que les sections résultante tissus sont exempts de fissures et d'autres distorsions.

Protocol

Fixer le tissu dans du paraformaldéhyde 4% dans du PBS pendant le temps désiré. Saccharose infuser tissus (cryoprotection) Faire solution de saccharose à 30% dans le PBS p / v en 2059 tube. Rincez le tissu 3x dans du PBS (~ 5 min avec bascule). Tissulaire lieu en solution de saccharose à 30%. Tissus ne va pas couler. Placez le tissu dans 4 ° C pendant la nuit, ou jusqu'à ce qu'il ait coulé. Taille de l'étiquette appropriée cryomold d'informat…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Tissue-Tek Cryomold		Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.		Ted Pella, Inc	27050
Sucrose solution				30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde				4% paraformaldehyde in PBS