Flash Freezing e Cryosectioning E12.5 cérebro de camundongo

Summary

Demonstrado neste vídeo são as técnicas de congelamento instantâneo e secção tecido cerebral embrionário de rato. Dicas úteis para usar o criostato são dadas, incluindo métodos de solução de problemas que podem ser usados ​​durante o corte para garantir que as seções resultantes tecidos estão livres de rachaduras e outras distorções.

Protocol

Fix tecido em paraformaldeído 4% em PBS para o tempo desejado. Tecido sacarose infundir (crioproteção) Fazer solução de sacarose 30% em PBS w / v em 2059 tubo. Enxaguar tecido em 3x PBS (~ 5 min com balanço). Tecido lugar em solução de sacarose 30%. Tecido não vai afundar. Coloque o tecido em 4 ° C durante a noite, ou até que tenha afundado. Tamanho da etiqueta apropriada cryomold com informação e orientação. Preencha cryomold com outubro (evi…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Tissue-Tek Cryomold		Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.		Ted Pella, Inc	27050
Sucrose solution				30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde				4% paraformaldehyde in PBS