تم تحسين ترنسفكأيشن الجينات التي electroporation حوالي مرتين عند تغيير اتجاه الحقل الكهربائي خلال تطبيق النبض ، بينما لا يتأثر بقاء الخلية. ويتسبب في زيادة ترنسفكأيشن الجينات التي تزيد من مساحة الغشاء الذي يتكون المختصة لإدخال الحمض النووي في الخلية.
الجينات هي طريقة electrotransfer الفعلية المستخدمة لتقديم الجينات إلى داخل الخلايا من خلال تطبيق نبضات كهربائية قصيرة ومكثفة ، والتي تتسبب في زعزعة الاستقرار في غشاء الخلية ، مما يجعلها قابلة للاختراق إلى جزيئات صغيرة ، وتتيح نقل الجزيئات الكبيرة مثل الحمض الريبي النووي. أنها تمثل بديلا للنواقل الفيروسية ، نظرا لكفاءته ، وسلامة وسهولة التطبيق. لجين electrotransfer تستخدم بروتوكولات مختلفة نبضة كهربائية من أجل تحقيق أقصى قدر من ترنسفكأيشن الجينات ، واحد منهم هو تغيير اتجاه الحقل الكهربائي والتوجه أثناء تسليم النبض. تغيير اتجاه الحقل الكهربائي والتوجه زيادة مساحة غشاء المختصة لإدخال الحمض النووي في الخلية. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح الاختلاف في الجينات electrotransfer فعالية عندما يتم تسليم جميع البقول في الاتجاه نفسه ، وعندما يتم تسليم الحبوب عن طريق تغيير اتجاه بدلا من الحقل الكهربائي والتوجه. لهذا الغرض مع طرف أقطاب متكاملة وعالية الجهد مولد النموذج ، والذي يسمح للتغيير الحقل الكهربائي في اتجاهات مختلفة خلال تطبيق النبضة الكهربائية ، واستخدمت. يتم تحديد الجين electrotransfer فعالية 24H بعد تطبيق نبضة على اعتبار أن عدد الخلايا التعبير عن بروتين الفلورية الخضراء مقسمة مع عدد جميع الخلايا. وأظهرت النتائج أن يتم زيادة ترنسفكأيشن الجين عند تغيير اتجاه الحقل الكهربائي أثناء الولادة نبض الكهربائية.
الجينات هي تقنية electrotransfer تنوعا التكنولوجيا الحيوية التي تمكن من نقل الحمض النووي في الخلايا عن طريق تطبيق قصيرة ، والبقول الكهربائية ذات الجهد العالي (3) وتمثل بديلا آمنا للناقلات فيروسية نظرا لكفاءته ، وسلامة وسهولة التطبيق. على الرغم من أن يستخدم على نطاق وا?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل وكالة أبحاث السلوفينية (مشروع J2 – 9770 ، البنية التحتية للملكية الفكرية ، 0510 مركز وبرنامج P2 – 0249). هذا الفيديو يمثل المواد التكميلية عن "تقنيات Electroporation القاعدة والعلاج" ورشة عمل علمية ودورة الدراسات العليا ، الذي نظمته كلية الهندسة الكهربائية في جامعة ليوبليانا ، سلوفينيا. الكتاب : نشكر أيضا Duša Hodžič لتوفير تتكرم DNA البلازميد.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
HAM-F12 | PAA | E15-016 | culture medium |
L-glutamine | Sigma-Aldrich | G7513 | |
fetal bovine serum | PAA | A15-151 | |
gentamicin | Sigma-Aldrich | G1397 | antibiotic |
crystacilin | Pliva | 625110 | antibiotic |
pEGFP-N1 | Clontech Laboratories | 6085-1 | plasmid DNA |
HiSpeed Plasmid Maxi Kit | Qiagen | 12662 | |
Na2HPO4 | Merck | F640786 933 | |
NaH2PO4 | TKI Hrastnik | 0795 | |
MgCl2 | Sigma-Aldrich | M-8266 | |
sucrose | Sigma-Aldrich | 16104 | |
trypsin/EDTA solution | Sigma-Aldrich | T4174 | |
pipette tip | Custom made | ||
electric pulse generator | Custom made | ||
6 well plate | TPP | 92406 | |
15 ml centrifuge tube | TPP | 91015 | |
75 cm2 culture flask | TPP | 90076 |