Summary
Denne artikkelen beskriver hvordan du injiserer virale vektorer i musen frontal cortex å teste atferdsanalyser som krever GPCR heteromeric formasjon.
Introduction
Hallusinogener som LSD, psilocybin og meskalin forårsake betydelige endringer i menneskelig bevissthet, kognisjon og følelser 7-9. Inaktivering av serotonin 5-HT2A reseptoren signale enten genetisk eller farmakologiske tilnærminger forårsaker markert svekket atferdsmessige reaksjoner på hallusinogener i begge gnagermodeller 3,10 og mennesker 11. Selv om hallusinogener binde andre reseptorsubtyper 8, er 5-HT2A-reseptoren anses som nødvendig for den unike adferdsaktivitet av disse kjemikaliene.
Gruppe II metabotrope glutamat-reseptorer (ie., MGlu2 og mGlu3) har vært utsatt for betydelig oppmerksomhet om den molekylære mekanismen for hallusinogener og deres vesentlig rolle underliggende psykose 12. Tidligere er det blitt vist at mus uten ekspresjon av mGlu2 protein (mGlu2-KO mus) er ufølsom for de cellulære og atferdsmessige virkninger av hallucinogens 5. Det er også blitt foreslått at 5-HT 2A og mGlu2-reseptorer danner en bestemt heteromert kompleks gjennom hvilke serotonin og glutamat ligander modulere et mønster av G-proteinet kopling i levende celler 1,2.
Strukturelt, transmembrane (TM) domener 4 og 5 av mGlu2 spille en fundamental rolle i heteromert ferd med den 5-HT2A-reseptoren 5. I tillegg har videre undersøkelser vist at tre rester som ligger ved den intracellulære slutten av TM4 av mGlu2 er nødvendig for å danne den 5-HT2A-reseptoren -mGlu2 hetero i levende celler 6.
Basert på disse funnene observert i heterologe ekspresjonssystemer, her beskriver vi bruk av HSV-mediert uttrykk for villtype mGlu2 og mGlu2 / mGlu3 kimære konstruksjoner i frontal cortex av mGlu2-KO mus for å teste om hetedannelse mellom 5-HT 2A og mGlu2 er nødvendig forhead-rykk atferd fremkalt av hallusinogene 5-HT 2A reseptor agonister.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: Alle prosedyrer for husdyravl og bekymringer ble gjennomført i henhold til Institutional Animal Care og bruk Committee (IACUC) regulering av Icahn School of Medicine ved Mount Sinai. Pass på å bruke sterile hansker gjennom hele prosedyren.
1. Drug and Virus Forberedelse
- Drug Forberedelse
- Fremstille 15,0 ml ketamin / xylazin bedøvelse ved oppløsning av 1,35 ml 100 mg / ml ketamin og 0,75 ml av 20 mg / ml xylazin i 12,9 ml 0,9% saltoppløsning. Bland løsningen.
- virus Forberedelse
- Klone mGlu2 og mGlu2ΔTM4N konstruerer inn i en bicistronisk herpes simplex virus (HSV) vektor følgende standard protokoller tidligere beskrevet seks. Pakk de viruspartikler som tidligere beskrevet 6,13,14. Bytte av rester Ala-677 4,40, Ala-681 4.44 og Ala685 4,48 i mGlu2 for Ser686 4,40, Phe690 4,44 og Gly-694 4,48 i mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) er blitt beskrevet tidligere 6.
MERK: Det ble tidligere vist at kimære konstruksjon HA-mGlu2ΔTM4N uttrykkes i plasmamembranen med intakt G protein-avhengige signale 6. - Oppbevar virale vektorer i -80 ° C når de ikke er i bruk. Tine viral vektor på is, og deretter alikvot inn i 10 pl aliquoter. For den kirurgiske prosedyren, holde på is.
- Klone mGlu2 og mGlu2ΔTM4N konstruerer inn i en bicistronisk herpes simplex virus (HSV) vektor følgende standard protokoller tidligere beskrevet seks. Pakk de viruspartikler som tidligere beskrevet 6,13,14. Bytte av rester Ala-677 4,40, Ala-681 4.44 og Ala685 4,48 i mGlu2 for Ser686 4,40, Phe690 4,44 og Gly-694 4,48 i mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) er blitt beskrevet tidligere 6.
2. kirurgi
- kirurgi Forberedelse
- Vei mus og injisere mus med passende dose av ketamin / xylazin cocktail (for detaljer, se 1.1.1).
- Sjekk mus for å se om ordentlig bedøvet, presse foten og hale for smerterespons, hvis ikke kan lokke fram et svar, er musen riktig bedøvet.
- Barbere musa hodet fra bunnen av hodeskallen til tuppen av nesen ved hjelp Clippers. Påfør oftalmisk gel til muse afterward å hindre blindhet av musen.
- Last hver sprøyte på stereotaxic rammen. Deretter vipper vinkelrett parti av hver arm av stereotaksisk ramme, slik at de er 10 grader vekk fra normalen. Pass på at armene er skråstilt, slik at nålene står overfor hverandre.
- Rens hver sprøyte ved å fylle nålen med 70% etanol. Fyll nålen minst tre ganger for å sikre at sprøyten er ren.
- Når nålen er rengjort, skyll nålen ved å fylle nålen med dobbelt destillert H 2 O. Når spyles, fylle hver nål med 1,3 mL dobbelt destillert H 2 O. Vri stempelet på sprøyten for å frigjøre 0,3 mL av dobbelt destillert H 2 O. Hvis vannet perler på tuppen av nålen, nøye tørke bort vannet. Hvis ingenting kommer ut av sprøyten ved å skyve stempelet helt ned, og deretter gjenta rengjøring av sprøyte.
- Etter å ha fylt med vann, og deretter trekke opp sprøyten fylle sprøyten med0,5 mL av luft.
- Når luft og vann er i sprøyten, fylle sprøyten forsiktig med 1,3 mL av virus løsning. På dette punktet sikre at totalvolumet i sprøyten er 2,8 ul. Igjen vri tuppen av sprøyten for å frigjøre 0,3 mL av virus. Hvis flytende perler på tuppen av nålen, nøye tørke bort væske. Hvis ingenting kommer ut av sprøyten ved å skyve stempelet helt ned, og deretter gjenta rengjøring av sprøyte.
- Kirurgi
- Fest musen til stereotaxic ramme, og pass på å justere stereotaxic rammen slik at hodeskallen er nivå og flat. Påfør povodine-jod til utsatte hodebunnen. Ved hjelp av en skalpell, gjør en sagittal snitt langs midtlinjen av skallen innenfor den eksponerte barberte området. Deretter feste Buret klemmer til huden ved innsnitt området for å sørge for at hodeskallen forblir eksponert.
- Bruk H 2 O 2 for å oppløse bort periosteum å eksponere suturer avhodeskalle. Nå som bregma og sting er synlig, må du justere stereotaxic ramme for å være sikker på at hodeskallen er nivå.
- Juster nål tips av sprøyter med bregma og registrere koordinatene til bregma. Beregn koordinatene til hvor nålene skal settes inn.
- For Rostral-Cauldal (RC) fly, legge til 1,6 mm til de registrerte RC Bregma koordinater (+1,6 fra Bregma). For Dorsal-Ventral (DV) plan, trekker 2,4 mm fra de registrerte DV Bregma koordinater (-2.4 fra Bregma).
- Til slutt, for Medial Lateral (ML) plan, legge 2,6 mm til de registrerte ML Bregma koordinater (+2.6 fra Bregma). For alle koordinatene være sikker på å spille inn både venstre og høyre koordinater, da dette er en bilateral injeksjon.
- Ta med nåler til de ønskede koordinater. Markere steder hvor nålene skal settes inn, og med en drill, drill de merkede områdene.
- Med en bomulls tips applikator wipe bort overflødig blod eller bein fragment.
- Ta med nålene til skallen hvor tuppen av nålene berøre overflaten av hjernen. Senk nålene til de ønskede koordinater sakte senke dem.
- Når nålene er ved de ønskede koordinater, langsomt injisere innholdet i sprøyten ved å vri stempelet av nålen 0.1 mL per minutt i løpet av 5 min (totalt 0,5 mL).
- Etter at injeksjonen er blitt gjort forlater sprøyten i cortex i ytterligere 5 min.
- Lukke opp / Care
- Fjern nålene fra musen cortex jevnt og sakte. Ta deretter musen fra stereotaxic rammen.
- Påfør cyanoacrylate (dermal lim) til base flaps av huden fra snittet og deretter med pinsett grip flaps av hud og plassere dem sammen.
- La cyanoacrylate tørke. Plasser musen i bur over en varmepute (varmepute er valgfritt om kabinical suite holdes under RT på 37 ° C - ellers ikke nødvendig). Sørg for å plassere musen på et papirhåndkle for å være sikker på at sengetøy ikke overholder operasjonsstedet.
- Avhengig av lengden av den kirurgiske prosedyre, sørge for at mus er ute av anestesi i løpet av 30 - 60 min etter inngrepet. Etter operasjonen blir dyret plassert i et eget bur og overvåkes inntil det blir bevisst før du går tilbake til sin plass å komme seg. Ingen smertestillende brukes postoperativt, fordi de kan påvirke resultatet av våre eksperimenter ved å endre noen av hjernen biokjemiske mekanismer. Imidlertid er dyr fulgt til de seg etter anestesien på operasjonsdagen, og daglig etter operasjonen for tegn på infeksjon og evaluering av smerte / ubehag.
3. Leder Twitch Response Experiment
- Set-up
- Utføre alle atferds testing 10:00 til 02:00, 2 - 3 dager etter stereotactic injeksjon av viruspartikler.
- Oppløs (±) -1- (2,5-dimetoksy-4-jodfenyl) -2-aminopropan-hydroklorid (DOI) inn i en 0,9% saltløsning til 2,0 mg / kg. Også utarbeide en 0,9% saltløsning.
- Forbered et hjem bur (28 x 18 x 15 cm) uten sengetøy og bruker en tri-pod, justerer du et kamera, slik at visningen av videokameraet er direkte over hjemmeburet.
- Tilvenne musene til rommet i minst 4 timer før begynnelsen av eksperimentet.
- Sett opp et videokamera for å spille inn hodet rykk.
- Eksperiment
- Plasser kameraet slik at det er direkte over et hjem bur. Kalibrere kameraet slik at hele hjemmet buret er i synsfeltet.
- Vei mus og injisere mus intraperitonealt med passende dose med enten 0,9% saltvann eller DOI (0,01 ml / g). MERK: Hvis en mus veier 25 gram, administrere dose til et totalvolum på 0,25 ml.
- Plasser hver mus tilbake i sitt hjem buret for 10 min. Etter 10 min sted mus inn i sentrum av den tomme hjemmeburet og bekrefte at det ikke er blinde flekker i synsfeltet for kameraet. Trykk rekord på videokameraet. Forlat rommet.
MERK: musebevegelser og ulike atferdsmessige responser der (... Hodet har rykninger, øre scratch, etc Vennligst referer til supplerende datatabell 1 av Gonzalez-Maeso et al 2007 for full liste av atferdsmessige responser som induseres av DOI) 3, vil bli registrert for 30 min. Derfor er det viktig det er ingen blinde flekker i synsfeltet registrert. - Etter 30 minutter stopper du opptaket på videokameraet og sett mus i opprinnelig hjem buret. Gjenta denne prosessen for hver mus.
- omtale
- La hver dommer gjennomgang båndene blinde for de eksperimentelle betingelsene for mus (ie., Legemidler som brukes under hodet napp eksperiment eller virus brukes under intrakraniell injeksjon)). Manuelt opptak hvert hode napp througHout videoen.
MERK: Leder-trekning er definert som en rask risting hodebevegelser utført av en mus (supplerende video). - For hver mus, gjennomsnittlig slutt HTR respons fra de tre summer for blinde dommere. Da gruppen disse verdiene av eksperimentell tilstand og utføre statistisk analyse (ie., T-test eller ANOVA).
- La hver dommer gjennomgang båndene blinde for de eksperimentelle betingelsene for mus (ie., Legemidler som brukes under hodet napp eksperiment eller virus brukes under intrakraniell injeksjon)). Manuelt opptak hvert hode napp througHout videoen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tidligere funn viser at hodet rykk muse atferdsrespons er pålitelig og robust utløst av hallusinogener, og det er fraværende i 5-HT 2A -KO mus 3. Videre har det blitt vist at hode-twitch respons utløst av hallusinogene 5-HT2A-agonister DOI og LSD ble signifikant redusert på mGlu2-KO mus 5. Imidlertid, selv om tidligere funn overbevisende måte viser at 5-HT 2A og mGlu2 er samlet som et heteromert kompleks in vitro i transfekterte celler 1,2,15, om dette konstruksjonsmessige arrangement oppfører seg som sådan i levende mus forble uløst. For å fullt ut forstå rollen av 5-HT 2A -mGlu2 reseptoren hetero i de psyko-lignende effekter indusert av hallusinogene 5-HT 2A reseptoragonister, uttrykk av enten mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N i frontal cortex av mGlu2-KO mus for å undersøke om dette manipgler regulerer atferd.
Mus fikk intra-frontal kortikale injeksjoner av bicistronisk HSV uttrykker grønt fluorescerende protein (GFP) og enten mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N, eller GFP alene. Først ble det bekreftet at viruset over-uttrykker mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N i mus frontal cortex (figur 1A og 1B). Som tidligere demonstrert 5, head-rykk atferd fremkalt av DOI var fraværende i mGlu2-KO mus injisert med tom vektor HSV-GFP. Spesielt ble head-twitch respons indusert av hallusinogene 5-HT 2A agonist DOI reddet i mGlu2-KO mus over-uttrykker mGlu2, men ikke mGlu2ΔTM4N, i frontal cortex i forhold til det man ser hos dyr uttrykker GFP (figur 1C). Sammen disse funnene tyder på at 5-HT 2A -mGlu2 reseptor kompleks i frontal cortex er avgjørende for å regulere psykoselignende tilstander.
Figur 1. Expression of mGlu2 som Receptor hetero. Uttrykk for mGlu2 som en reseptor med 5-HT 2A er nødvendig for psykoselignende oppførsel indusert av hallusinogene stoffer. (A) Representative bilde av HSV-mediert transgene uttrykk i frontal cortex. HSV-mGlu2, som også uttrykker GFP ble injisert i frontal cortex, og GFP uttrykk ble avslørt av immunocytokjemi, skala bar, 200-um. (B) HSV-mediert transgen ekspresjon i mus frontal cortex av mGlu2-KO mus, og anti-mGlu2 reaktivitet ble målt ved Western blotting. Spesifisitet av det primære antistoff mot mGlu2-reseptoren har tidligere blitt bekreftet i knockout mus seks. Metabotrope glutamatreseptorer er GPCRs som danner kovalent bundet homodimerer. Vi målte immunreaktiviteten av mGlu2 som en monomer (100 kDa) 6. (C et al (2012) 6. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Supplemental Video 1. Leder Twitch Response. (Høyreklikk for å laste ned). CD-en WT mus ble injisert med 2,0 mg / kg DOI og plassert i et bur (vegg mørklagt mellom de to merdene) for å lokke fram head-trekning respons (atferd utløses etter *).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sammen med tidligere funn på mGlu2-KO mus 5, resultatene med mGlu2 og mGlu2 / mGlu3 chimeriske konstruksjoner som ikke danner en 5-HT 2A -mGlu2 reseptor-komplekset i dyrkede celler tyder på at 5-HT 2A -mGlu2 heteromert reseptor-komplekset i mus frontal cortex er nødvendig for å indusere head-rykk atferd ved LSD-lignende hallusinogene 5-HT 2A reseptor agonister. En begrensning ved denne metode er at den ikke måle tett nærhet molekyl ved et subcellulære nivå i naturlig vev. I tillegg er det ulike kritiske punkter for å bli bemerket. På grunn av at mus injiseres med en HSV viral vektor, den tidsramme som forsøkene som skal utføres er 2 - 4 dager etter injeksjonen. Plasseringen og ekspresjon av de virale vektorer bør verifiseres med immunfluorescens farging av kåret hjernen ikke mer enn 4 dager etter den første injeksjonen. Mus der koordinatene ikke stemmer overens eller ikke uttrykker den virale vektoren børutelukkes fra de eksperimentelle data som de ikke uttrykker mGlu2 eller mGlu2ΔTM4N. Care etter stereotactic kirurgi er også viktig, som feilaktig lukking av hodeskadene kan føre til infeksjon som kan føre til problemer i både in vivo eksperimenter og immunfluorescens farging. Til slutt, etter å ha stereotaktisk injeksjon enhver atferds paradigmet (. Åpent felt, vekslende t-test, etc) kan anvendes så lenge det er innenfor det 2 - 4 etter injeksjon av virale partikler. Igjen, bør koordinater og uttrykk bekreftes av immunfluorescens.
Konseptet som GPCR-funksjon som homo- og / eller heteromers i levende celler er nå godt etablert 16-18. Imidlertid, til tross for en viss fremgang, er flere studier er nødvendig for å definere den nøyaktige rolle (r) av GPCR-heteromere komplekser i hele dyremodeller 19. Tilnærminger som BRET og / eller FRET bildebehandling for å undersøke protein-protein fysisk nærhet innen dype vev av små dyrmodeller kan gi midler til å forbedre forståelsen av den funksjonelle rollen GPCR heteromers i levende individer 20. Ved hjelp av HSV-mediert ekspresjon av GPCR enten nativt eller med modifiserte transmembranproteiner, tilveiebringe en in vivo modell for å evaluere funksjon og interaksjonen av GPCR.
Videre studier i gnagermodeller er også nødvendig å undersøke stabilitet og livstid (dannelse og dissosiasjon) av GPCR heteromers 21-23, strukturelle rearrangements mellom deres komponenter 24, og potensialet G protein kobling etter reseptor intern 25,26. Med den grunnleggende rolle GPCR i cellesignalisering og funksjon, virker det sannsynlig at dette området kan føre til interessante basis og translasjonelle studier.
Selv om videre undersøkelser er nødvendig for å kvantitativt karakterisere ultra samlokalisering av begge reseptorer i mennesker og mus CNS, sammen med tidligere studør som overbevisende demonstrere elektro, mobilnettet, og atferdsmessige reaksjoner indusert av hallusinogener i musemodeller er iboende til 5-HT2A-reseptor-uttrykk kortikale pyramidale nevroner 3,27,28, funnene som oppnås ved bruk av HSV-mediert uttrykk tilnærming er beskrevet her foreslår som heteromert dannelse mellom 5-HT 2A og mGlu2-reseptorer i mus frontal cortex er nødvendig for at hode-rykk psykoselignende oppførsel indusert av hallusinogene 5-HT 2A-reseptoragonist DOI.
HSV-mediert uttrykk for mGlu2, men ikke mGlu2ΔTM4N, i frontal kortikale nevroner av mGlu2-KO mus redder head-trekning oppførsel indusert av hallusinogene 5-HT2A reseptoren agonist DOI. Dette translasjonsforskning verktøy kan være en fordel for prekliniske studier for å evaluere atferds fenotyper av GPCR heteromers.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
NIH R01MH084894 deltatt i finansieringen av denne studien. Vi vil gjerne takke legene. Yasmin Hurd og Scott Russo ved Mount Sinai School of Medicine for donasjon av mus og bruken av deres kirurgi og atferd anlegg under filmingen av dette arbeidet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| mGlu2 bicitronic herpes simplex virus (HSV) vector | MIT Core | mGlu2 and mGlu2DTM4N were subcloned into the bicistronic HSV-GFP virus vector p1005+ HSV expressing GFP under the control of the CMV promoter. Viral particles were produced by the Viral Core Facility at the McGovern Institute (MIT). For more information, please contact the director, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu) | |
| mGlu2ΔTM4N bicitronic herpes simplex virus (HSV) vector | MIT Core | mGlu2 and mGlu2DTM4N were subcloned into the bicistronic HSV-GFP virus vector p1005+ HSV expressing GFP under the control of the CMV promoter. Viral particles were produced by the Viral Core Facility at the McGovern Institute (MIT). For more information, please contact the director, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu) | |
| GFP bicitronic herpes simplex virus (HSV) vector | MIT Core | mGlu2 and mGlu2DTM4N were subcloned into the bicistronic HSV-GFP virus vector p1005+ HSV expressing GFP under the control of the CMV promoter. Viral particles were produced by the Viral Core Facility at the McGovern Institute (MIT). For more information, please contact the director, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu) | |
| Xylazine | Lloyd | List no. 4811-20ml, NADA #139-236, NDC Code(s): 61311-481-10 | 1.35 ml of ketamine (100 mg/ml) + 0.75 ml of xylazine (20 mg/ml) are diluted in 12.0 ml of 0.9% saline solution |
| Ketamine | Vedco | KetaVed-10ml, NADA #200-029, NDC Code(s): 50989-161-06 | 1.35 ml of ketamine (100 mg/ml) + 0.75 ml of xylazine (20 mg/ml) are diluted in 12.0 ml of 0.9% saline solution |
| Ophthalmic gel | Fisher Scientific | NC0550805 | |
| Burret clips | Fisher Scientific | NC9268369 | |
| Feather surgical blade | Fisher Scientific | NC9032736 | |
| Hydrogen Peroxide | Fisher Scientific | 19-898-919 | |
| Hamilton syringe | Fisher Scientific | 14815203 | |
| Hamilton™ Small Hub Removable Needles (33 Ga) | Fisher Scientific | 14816206 | |
| Cordless Micro Drill | Fisher Scientific | NC9089241 | |
| Dermabond Dermal Adhesive | Fisher Scientific | NC0690470 | |
| (±)-1-(2,5-Dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropane hydrochloride (DOI) | Sigma-Aldrich | 42203-78-1 | Dissolved in 0.9% saline solution to the concentration of 2.0 mg/kg |
References
- Fribourg, M., et al. Decoding the Signaling of a GPCR Heteromeric Complex Reveals a Unifying Mechanism of Action of Antipsychotic Drugs. Cell. 147 (5), 1011-1023 (2011).
- Gonzalez-Maeso, J., et al. Identification of a serotonin/glutamate receptor complex implicated in psychosis. Nature. 452 (7183), 93-97 (2008).
- Gonzalez-Maeso, J., et al. Hallucinogens Recruit Specific Cortical 5-HT(2A) Receptor-Mediated Signaling Pathways to Affect Behavior. Neuron. 53 (3), 439-452 (2007).
- Gonzalez-Maeso, J., et al. Transcriptome fingerprints distinguish hallucinogenic and nonhallucinogenic 5-hydroxytryptamine 2A receptor agonist effects in mouse somatosensory cortex. J Neurosci. 23 (26), 8836-8843 (2003).
- Moreno, J. L., Holloway, T., Albizu, L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Metabotropic glutamate mGlu2 receptor is necessary for the pharmacological and behavioral effects induced by hallucinogenic 5-HT2A receptor agonists. Neurosci Lett. 493 (3), 76-79 (2011).
- Moreno, J. L., et al. Identification of Three Residues Essential for 5-HT2A-mGlu2 Receptor Heteromerization and its Psychoactive Behavioral Function. J Biol Chem. 287, 44301-44319 (2012).
- Geyer, M. A., Vollenweider, F. X. Serotonin research: contributions to understanding psychoses. Trends Pharmacol Sci. 29 (9), 445-453 (2008).
- Nichols, D. E.
- Hanks, J. B., Gonzalez-Maeso, J.
- Fiorella, D., Rabin, R. A., Winter, J. C. Role of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in the stimulus effects of hallucinogenic drugs. II: Reassessment of LSD false positives. Psychopharmacology (Berl). 121 (3), 357-363 (1995).
- Vollenweider, F. X., Vollenweider-Scherpenhuyzen, M. F., Babler, A., Vogel, H., Hell, D. Psilocybin induces schizophrenia-like psychosis in humans via a serotonin-2 agonist action. Neuroreport. 9 (17), 3897-3902 (1998).
- Moreno, J. L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Group II metabotropic glutamate receptors and schizophrenia. Cell Mol Life Sci. 66 (23), 3777-3785 (2009).
- Kurita, M., et al. HDAC2 regulates atypical antipsychotic responses through the modulation of mGlu2 promoter activity. Nat Neurosci. 15 (9), 1245-1254 (2012).
- Kurita, M., et al. Repressive Epigenetic Changes at the mGlu2 Promoter in Frontal Cortex of 5-HT2A Knockout Mice. Mol Pharmacol. 83 (6), 1166-1175 (2013).
- Rives, M. L., et al. Crosstalk between GABAB and mGlu1a receptors reveals new insight into GPCR signal integration. Embo J. 28 (15), 2195-2208 (2009).
- Milligan, G. The Prevalence, Maintenance and Relevance of GPCR Oligomerization. Mol Pharmacol. (84), Epub ahead of print 158-169 (2013).
- Ferre, S., et al. G protein-coupled receptor oligomerization revisited: functional and pharmacological perspectives. Pharmacol Rev. 66 (2), 413-434 (2014).
- Gonzalez-Maeso, J. GPCR oligomers in pharmacology and signaling. Mol Brain. 4 (1), 20 (2011).
- Gonzalez-Maeso, J. Family a GPCR heteromers in animal models. Front Pharmacol. 5, 226 (2014).
- Dragulescu-Andrasi, A., Chan, C. T., De, A., Massoud, T. F., Gambhir, S. S. Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) imaging of protein-protein interactions within deep tissues of living subjects. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (29), 12060-12065 (2011).
- Calebiro, D., et al. Single-molecule analysis of fluorescently labeled G-protein-coupled receptors reveals complexes with distinct dynamics and organization. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (2), 743-748 (2013).
- Fonseca, J. M., Lambert, N. A. Instability of a class a G protein-coupled receptor oligomer interface. Mol Pharmacol. 75 (6), 1296-1299 (2009).
- Hern, J. A., et al. Formation and dissociation of M1 muscarinic receptor dimers seen by total internal reflection fluorescence imaging of single molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (6), 2693-2698 (2010).
- Hlavackova, V., et al. Sequential inter- and intrasubunit rearrangements during activation of dimeric metabotropic glutamate receptor 1. Sci Signal. 5 (237), 59 (2012).
- Irannejad, R., et al. Conformational biosensors reveal GPCR signalling from endosomes. Nature. 495 (7442), 534-538 (2013).
- Calebiro, D., Nikolaev, V. O., Persani, L., Lohse, M. J. Signaling by internalized G-protein-coupled receptors. Trends Pharmacol Sci. 31 (5), 221-228 (2010).
- Celada, P., Puig, M. V., Diaz-Mataix, L., Artigas, F. The hallucinogen DOI reduces low-frequency oscillations in rat prefrontal cortex: reversal by antipsychotic drugs. Biol Psychiatry. 64 (5), 392-400 (2008).
- Béïque, J. -C., Imad, M., Mladenovic, L., Gingrich, J. A., Andrade, R. Mechanism of the 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated facilitation of synaptic activity in prefrontal cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (23), 9870-9875 (2007).
