Fette di cuore ventricolare dell&#39;asse corto dell&#39;urina per gli studi elettrofisiologici

Gabriel Peinkofer; Juergen Hescheler; Marcel Halbach

doi:10.3791/55725

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Articolo metodologico

Fette di cuore ventricolare dell'asse corto dell'urina per gli studi elettrofisiologici

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DOI:

10.3791/55725

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4 giugno 2017

Gabriel Peinkofer¹^,² , Juergen Hescheler² , Marcel Halbach¹

¹Department of Internal Medicine III, University of Cologne, ²Institute for Neurophysiology, University of Cologne

In questo articolo

Sommario

Qui descriviamo la preparazione di fette ventricolari vitali da topi adulti e il loro utilizzo per registrazioni potenziali di azione elettrodo. Queste preparazioni multicellulari forniscono una struttura tissutale conservata in vivo , che li rende un prezioso modello per studi elettrofisiologici e farmacologici in vitro .

Abstract

Cardiomiociti murini sono stati ampiamente utilizzati per studi in vitro di fisiologia cardiaca e nuove strategie terapeutiche. Tuttavia, le preparazioni multicellulari di cardiomiociti dissociati non rappresentano la struttura complessa in vivo di cardiomiociti, non miociti e matrice extracellulare, che influenza sia le proprietà meccaniche che elettrofisiologiche del cuore. Qui descriviamo una tecnica per preparare fette ventricolari vitali di cuori adulti con un tessuto tissutale in vivo e dimostrare la loro idoneità alle registrazioni elettrofisiologiche. Dopo l'escissione del cuore, i ventricoli vengono separati dall'atria, perfezionati con soluzione Ca ²⁺ -libera contenente 2,3-butanedione monoxime e incorporati in un blocco agarosio a basso contenuto di fusione al 4%. Il blocco è posto su un microtomo con una lama vibrante, e fettine di tessuto con uno spessore di 150-400 μm sono preparate mantenendo la vibrazione freDella lama a 60-70 Hz e spostare la lama in avanti in modo più lento possibile. La spessore delle fette dipende dall'ulteriore applicazione. Le fette vengono conservate in soluzione di Tyrode ghiacciata con 0,9 mM Ca ²⁺ e 2,3-butanedione monoxime (BDM) per 30 minuti. Successivamente, le fette vengono trasferite a 37 ° C di DMEM per 30 minuti per lavare il BDM. Le fette possono essere utilizzate per studi elettrofisiologici con elettrodi taglienti o matrici di microelettrodi, per misurare le forze per analizzare la funzione contrattile o per indagare l'interazione tra i cardiomiociti derivanti dalle cellule staminali trapiantati e il tessuto ospite. Per registrazioni di elettrodo nitide, una fetta viene posta in un piatto di coltura da 3 cm sulla piastra riscaldante di un microscopio invertito. La fetta è stimolata con un elettrodo unipolare e potenziali d'azione intracellulari di cardiomiociti all'interno della fetta sono registrati con un elettrodo di vetro nitido.

Introduzione

Le fette di tessuto sottile sono state utilizzate frequentemente nella scienza di base poiché Yamamot e Mcllwain hanno mostrato nel 1966 che l'attività elettrica delle fette del cervello è mantenuta in vitro ¹ . Da allora, studi elettrofisiologici e farmacologici sono stati condotti su fette da cervello ² , fegato ³ , polmone ⁴ e tessuto miocardico ⁵ ^, ⁶ ^, ⁷ . Le prime registrazioni di patch-clamp in fette ventricolari da cuori di ratto neonatale sono state descritte ....