Оценка дефекты обструкции мочевыводящих путей Junction Метиленовый синий краситель инъекции
Summary
Метиленовый синий краситель инъекции в почечной лоханки облегчает оценку дефекты обструкции мочевыводящих путей соединения во время мыши эмбриональные мочевыводящих путей развития. Здесь описывается протокол для инъекций красителя метиленового синего в почечной лоханки.
Abstract
Дефекты обструкции мочевыводящих путей соединения являются врожденные аномалии, вызывая гидронефроз и hydroureter. Дефекты обструкции мышиных мочевыводящих путей перехода можно оценить по отслеживание потока красителя метиленового синего в мочевыделительной системы. Метиленового синего красителя инъецируется в почечной лоханки перинатальной эмбриональных почек и краска поток контролируется от почечной лоханки почки через Мочеточник и в просвете мочевого пузыря после применения гидростатического давления. Накопление краски будет видно в просвете мочевого пузыря нормальное перинатальной мочевыводящих путей, но будет ограничен между почечной лоханки и конечной точкой аномальные мочеточника, если встречаются препятствия мочевыводящих путей. Этот метод способствует подтверждение мочевыводящих путей перехода препятствий и визуализация гидронефроз и hydroureter. Эта рукопись описывает протокол для инъекций красителя метиленового синего в почечной лоханки для подтверждения мочевыводящих путей перехода препятствий.
Introduction
Мочевая система состоит из пары почек и мочеточников и общей мочевого пузыря и мочеиспускательного канала. Основная функция мочевой системы является поддержание гомеостаза организма путем управления водно-электролитного баланса крови. Почки фильтрации крови для контроля концентрации электролитного и кислотно щелочной баланс и производят моча выводят лишнюю воду и отходы, включая растворенных веществ и метаболитов. Затем моча транспортируется через Мочеточник от почечной лоханки почки к bladderin однонаправленный манере, где она хранится и в конечном счете ликвидирована через мочеиспускательный канал1.
Прямые трубы, происходящих из нефрической протока мочеточников. После бутонизации из нефрической протока на эмбриональных день 10.5 (E10.5) в мышь, стебель мочеточника удлиняется и отличает в многослойной структуре, называемой Уротелий, который является непроницаемой между мыши, E12.5 и E16.5. Мезенхимальные клетки, окружающие стебель мочеточника также дифференцированы на три слоя, состоящий из внутреннего стромальных клеток, промежуточные толстые гладких мышечных клеток и наружной adventitial фибробластов. Уретеральные перистальтические волны в почечной лоханки, распространяются через слой гладких мышц стенки мочеточника в мочевой пузырь для транспортировки мочи2,3, которая производится начиная E16.5 в мышь1.
Врожденные аномалии почек и мочевыводящих путей (CAKUT) относятся к числу наиболее частых генетических заболеваний, в около 1% человеческого плода1,4и состоит из целого ряда фенотипов, включая гидронефроз и hydroureter. Ненормальное накопление мочи в результатах почки и мочеточника в формирование почек и hydroureter hydronephrotic. Одной из причин формирования гидронефроз или hydroureter является обструкции мочевыводящих путей. Ureteropelvic перекрестка обструкции (UPJO) вызвано аномальным мочи потока из-за закупорки между проксимального отдела мочеточника и почечной лоханки, что привело к гидронефроз и проксимальный hydroureter сужение с углы или стойких складной5, 6. Кроме того внематочная вставки дистальной части мочеточника в стенке мочевого пузыря или репродуктивного тракта называется ureterovesical перекрестка обструкции (UVJO). UVJO можно также вызвать гидронефроз и hydromegaureter формирования7,,8. Дефект Джанкшен (UVJ) дополнительные ureterovesical-vesicoureteric рефлюкс (VUR). VUR характеризуется поток Ретроградная мочи из мочевого пузыря к почек на UVJ. По сравнению с UVJO, перинатальной эмбрионов с VUR не показывают отчетливо растянутый hydronephrotic почек или тяжелой hydroureter фенотип9.
Лабораторные мыши струя мочи может быть проверен инъекции красителя, например, метиленовый синий, в почечной лоханки9. Injectedmethylene синий решение будет проследить траекторию мочи от почечной лоханки через Мочеточник и в мочевой пузырь. Гидронефроз могут быть признаны расширение красителя в почках. UPJO могут быть обнаружены как блокирование потока красителя на проксимальной мочеточник с растянутый почечной лоханки5. Любое дилатация мочеточника, обозначается расширены диаметр демонстрирует пример hydroureter. Наконец накопление краски на стенку мочевого пузыря или на сайте репродуктивного тракта указывает UVJO с растянутый hydronephrotic почек и расширены hydromegaureter7,10. Чтобы обнаружить VUR, раствор красителя инъецируется в мочевого пузыря и последующих Ретроградная поток контролируется в почках9.
Здесь представлен протокол для инъекций красителя метиленового синего в почечной лоханки перинатальной эмбриона. Этот протокол позволяет трассировки потока мочи от почечной лоханки через Мочеточник и в мочевом пузыре и проверяет потенциальные мочевыводящих путей перехода препятствий, таких как UPJO или UVJO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Мыши почки начинают в E16.5 функциональных и тестирования внедрения краситель теоретически возможно с этого момента времени. Однако почки слишком малы, чтобы быть вводили раствор красителя и фенотипы гидронефроз и hydroureter не наблюдаются четко поскольку эти фенотипы вторичный эффект мочи…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Я благодарю д-р Алан O. Perantoni (CDBL/NCI/низ) для поддержки представления этой рукописи. Я также благодарю д-р Майкл Холл (CDBL/NCI/низ) и Nirmala Шарма (CDBL/NCI/низ) для редактирования этой рукописи. Я благодарен к Лай Тханг (SAIC) за его отличную мыши животноводства. Эта работа была поддержана национальных институтов здравоохранения, Национальный институт рака и центр для исследований рака.
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Riferimenti
- Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
- Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
- Bohnenpoll, T., Kispert, A. Ureter growth and differentiation. Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).
- Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT. Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).
- Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction. J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).
- Aoki, Y., et al. Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans. Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).
- Yun, K., Perantoni, A. O. Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection. Differentiation. 94, 1-7 (2017).
- Uetani, N., Bouchard, M. Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts. Clin Genet. 75, 307-317 (2009).
- Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction. Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).
- Weiss, A. C., et al. Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme. Development. 141, 3420-3430 (2014).
