Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

جيل من نموذج الفئران من فشل الكبد الحاد عن طريق الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي و اسيتامينوفين

Published: November 27, 2019 doi: 10.3791/60146
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 2, 1, 1
1National Institute of Immunology, 2Center for Cellular and Molecular Biology

Summary

نموذج الحيوانية فشل الكبد الحاد وضعت في الدراسة الحالية يقدم بديلا ممكنا لدراسة العلاجات المحتملة. يستخدم النموذج الحالي التاثير المشترك للإصابات الكبدية الناجمة عن المخدرات والفيزيائية ويوفر نافذه زمنيه مناسبه لدراسة إمكانات العلاجات الجديدة.

Abstract

فشل الكبد الحاد (الفا) هو حاله سريريه تسببها مسببات مختلفه مما ادي إلى فقدان وظائف الأيض ، البيوكيميائية ، توليف ، ومزيل السموم من الكبد. في معظم حالات تلف الكبد التي لا رجعه فيها ، تظل عمليه زرع الكبد التقويمية هي العلاج الوحيد المتاح. ولدراسة الإمكانيات العلاجية لعلاج المؤسسة ، فان الاختبار السابق لها في نموذج حيواني لمؤسسه الفا هو أمر أساسي. في الدراسة الحالية ، تم تطوير نموذج الفا في الفئران من خلال الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي (PHx) وحقن اسيتامينوفين (APAP) التي توفر نافذه علاجيه من 48 h. تمت أزاله الفصوص الجانبية الوسطي واليسرى من الكبد إلى المكوس 70 ٪ من كتله الكبد وأعطيت APAP 24 ساعة بعد جراحيا لمده 2 أيام. تم العثور علي البقاء علي قيد الحياة في الحيوانية التي يسببها الف التي انخفضت بشده. وأكد تطوير الف من المستويات المصل المتغيرة من الانزيمات الأنين الامينيه المنقولة (ALT) ، اسبارتات الامينيه ترانسفيراز (AST) ، الفوسفاتيز القلوية (ALP) ؛ التغيرات في وقت البروز (PT); وتقييم المعدل الدولي الموحد (INR). كشفت دراسة عن التعبير الجيني من قبل qPCR زيادة في مستويات التعبير من الجينات المشاركة في موت الخلايا المبرمج, التهاب, وفي تطور أصابه الكبد. وقد لوحظ انحطاط منتشر من الخلايا الكبدية وتسلل للخلايا المناعية من قبل التقييم النسيجي. وقد تاكدت قابليه هذه المؤسسة للانعكاس من خلال استعاده مستويات البقاء والمصل لل ALT و AST و ALP بعد الزرع داخل الكلية لخلايا الكبد السليمة المتزامنة. ويقدم هذا النموذج بديلا موثوقا لنماذج الحيوانية المتاحة لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لمؤسسه الفا وكذلك لتقييم إمكانات العلاج الجديد لمؤسسه الفا. كما ان استخدام نهجين مختلفين يجعل من الممكن دراسة الأثر المشترك للاصابه بالكبد الناجم عن الإصابات الجسدية والدوائية. استنساخ وجدوى الاجراء الحالي هو فائده اضافيه من النموذج.

Introduction

يتم تعريف فشل الكبد الحاد (الف) من قبل الجمعية الامريكيه لدراسة امراض الكبد والتطور السريع للاصابه الكبدية الحاده دون اي علامات الضرر السابقة ويتميز بضعف شديد من الاصطناعية, الأيض, والوظائف المزيلة للسموم من الكبد1. الف يختلف عن فشل الكبد المزمن حيث يحدث الفشل نتيجة لأصابه الكبد الناجمة علي مدي فتره طويلة من الزمن ومن فشل الكبد المزمن الحاد (aclf), حيث يحدث تلف مفاجئ في الكبد نتيجة لامراض الكبد المزمنة2,3,4. العلاج الوحيد المتاح لمؤسسه الفا هو زرع الكبد التقويمي ، أو قد يحدث الموت. ونظرا لنقص المتبرعين بالكبد ، فان معدل الوفاات في المرضي الذين يعانون من المؤسسة مرتفع جدا.

ولدراسة إمكانيات النهج العلاجية البديلة ولفهم الفيزيولوجيا المرضية لمؤسسه الفا علي نحو أفضل ، هناك حاجه إلى نماذج حيوانيه يمكن ان تعكس المؤسسة التي تحدث في البشر. العديد من نماذج الحيوانية المتاحة أصلا لديها عده عيوب. اثار اسيتامينوفين (APAP) من الصعب ان تتكاثر ولكن لديها أوجه التشابه الأقرب من حيث الزمانيه, السريرية, البيوكيميائية, والمعلمات المرضية. نماذج الحيوانية المستحثة apap كثيرا ما تواجه مشاكل بسبب وجود ميتهيموغلوبينيه الناجمة عن أكسده الهيموغلوبين بواسطة apap ووسيطه5,6,7. وهناك مشكله أخرى تتمثل في عدم وجود استنساخ تنعكس في ردود الجرعات غير المتوقعة ووقت الوفاة. نماذج الحيوانية الف المنتجة باستخدام الكربون رباعي كلوريد (سي سي4) لديها الفقراء استنساخ8،9،10،11. Concavalin a (يخدع a) و ليبوبليساكاريد (lps)-التي يسببها الف نماذج الحيوانية لا تعكس النمط السريري للمرض البشري ، علي الرغم من ان لديهم مزايا في دراسة أليات الخلوية المشاركة في امراض الكبد المناعة الذاتية وفي دراسة الانتان علي التوالي12،13،14،15. المثل ، ثيواسيتاميد (التاء) يتطلب أيضا التحول الإحيائي إلى المستقلب النشط ثيواسيتاميد سولفوكسيد ويظهر الأنواع الاختلافات16،17،18،19. د-galactosamine (د-غال) تنتج بعض التغيرات البيوكيميائية والايضيه والفسيولوجية مماثله للف ولكنها ليست قادره علي التعبير عن الحالة المرضية الفا كامله20،21،22،23. وكانت هناك محاولات قليله جدا للجمع بين اثنين أو أكثر من هذه الأساليب لتطوير نموذج لمؤسسه التنمية التي يمكن ان تعكس متلازمة الفا بطريقه أفضل13. ولذلك ، هناك حاجه إلى مزيد من الدراسات لتطوير نموذج يمكن ان تعكس المعلمات المرض ، وأفضل استنساخ ، ويوفر الوقت الكافي لدراسة اثار التدخل العلاجي.

في الدراسة الحالية ، تم إنشاء نموذج بديل للفا في الفئران من خلال الجمع بين اثار استئصال الكبد الجزئي (PHx) والجرعات المنخفضة من كاشف سميه كبديه. Apap له دور راسخ في التسبب في أصابه الكبد5,24,25. وهو مسكن يستخدم علي نطاق واسع وهو سام للكبد في الجرعات العلاجية بتشكيل الأيض السامة. والمعهد هو سبب العديد من الوفاات في البلدان المتقدمة النمو. الاصابه الجسدية الناجمة عن استئصال الكبد الجزئي يبدا تفعيل العمليات المختلفة التي تنطوي علي التهاب وكذلك تجديد الكبد. حقن العامل الكبدي APAP يسبب بيئة عدائيه في الكبد, منع انتشار الخلايا الكبدية. وهذا يقلل من فتره الإجهاد علي الحيوانية ، والتي عندما يقترن مع جرعات صغيره من السمية الكبدية ، يؤدي إلى استنساخ أفضل من الاجراء. لذلك ، باستخدام هذا النموذج ، تمت دراسة تاثير توافقي لنوعين من إصابات الكبد. وقد تمت دراسة المعلمات الفسيولوجية والبيوكيميائية لتوصيف النموذج الحيواني المطور لمؤسسه الفا. وقد تاكدت القابلية الناجحة لعمليه التحقق من الصحة من خلال زرع خلايا كبد الفئران الصحية المتزامنة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

وقد تمت الموافقة علي الاجراء الموصوف أدناه من قبل لجنه الأخلاقيات الحيوانية المؤسسية للمعهد الوطني لعلم المناعة ، نيودلهي. الرقم المرجعي التسلسلي للموافقة هو IAEC # 355/14.

1-الاعداد

  1. التحضير للإجراءات الجراحية كما هو موضح سابقا من قبل Das B وآخرون26.
  2. استخدام 6-8 أسابيع من العمر الفئران Wistar الفطرية مع وزن الجسم من 200-250 غرام.
  3. منزل الماشية تحت شروط الرعاية الحيوانية القياسية وإطعامهم مع الفئران تشاو و حسب قبل وبعد الاجراء.
  4. عند أداء 70% PHx ، استخدم مزيج كوكتيل قياسي من هيدروكلوريد الكيتامين (100 ملغم/كغ من وزن الجسم) و اكسيليازين (10 ملغم/كغم من وزن الجسم) ، والذي يتم حقنه داخل الصفاق.
    ملاحظه: يمكن ان يكون نوع التخدير المستخدمة اثار ما بعد الجراحة علي الوفاات والاعتلال.
  5. اثناء عمليه زرع الخلايا ، استخدم ايزوفلوران التخدير (2-كلورو-2-(ديفلوميثوكسي)-1 ، 1 ، 1-تريفلورو-إيثان) لتقليل وقت استعاده الحيوانية بعد عمليه الزرع.
  6. الحث علي التخدير المستنشق والحفاظ عليه باستخدام نظام تخدير مخصص. الحفاظ علي تدفق الأكسجين في 4 لتر/دقيقه. للاستخدام التعريفي ايزوفلوذان في 4 ٪ ولاستخدام الصيانة 2-3 ٪ خلال العملية الجراحية.

2-إجراءات ما قبل الجراحة

  1. تخدير الجرذ عن طريق حقن خليط الكيتامين-اكسيليازين الموصوفة في الخطوة 3.1 داخل الصفاق. تاكيد التخدير الكامل عن طريق معسر اصبع القدم من الحيوانية. ويتم إجراءات أخرى فقط عندما لا يكون هناك منعكس دواسة.
  2. للوقاية من جفاف القرنية ، ضعي قطره العين التي تعتمد علي الكربوكسي ميثيل السليلوز علي كلتا العينين.
  3. تقييد الحيوانية تخدير إلى مجلس الجراحية باستخدام الشريط الأبيض. وضع الحيوانية مع الجانب البطني في مواجهه ، وضمان الفم علي الجانب البعيد من الشخص الذي يقوم بالعملية.
  4. أزاله الشعر من المنطقة العلوية اليمني الجراحية البطن باستخدام المقص الكهربائية.
  5. تطهير الموقع الجراحي من قبل ثلاثه الدعك بالتناوب من اليود البوفيدون و 70 ٪ الايثانول باستخدام منصات القطن المعقم في حركه دائريه.

3. استئصال الكبد الجزئي (PHx) لأزاله 70 ٪ من كتله الكبد

ملاحظه: اجراء العملية الجراحية بأكملها تحت بيئة معقمه في غطاء التيار الرقائقي. استخدام الاداات الجراحية العقيمة فقط للتقليل من خطر العدوى بعد الجراحة. أزاله 70 ٪ من كتله الكبد ، واسمه 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي (70 ٪ PHx) ، تم تنفيذها علي النحو الموصوف من قبل c. ميتشل و h. Willenbring ، 200827.

  1. قبل بدء العملية الجراحية ، تاكد من تخدير كامل للحيوان عن طريق معسر أخمص قدميه. ويتم إجراءات أخرى فقط عندما لا يكون هناك منعكس دواسة.
  2. وضع علامة علي الجلد ليتم قطع تحت القص فقط ، عمودي علي xiphoid ، وموازيه لقفص الصدرية.
  3. وضع ورقه ثني معقمه وجود فتح حوالي 3 سم × 1 سم علي الجلد ملحوظ.
  4. اجراء شق عرضي من حوالي 2-3 سم علي طول خط ملحوظ مع مشرط. استخدام شفره الجراحية رقم 22. قم بازاله مرفق الجلد برفق إلى طبقه العضلات الاساسيه في المنطقة المجاورة للمنطقة المحفورة باستخدام نصائح قطنية مبلله معقمه.
  5. بعد ذلك ، اجراء شق عرضيه من خلال طبقه البريتوني فقط تحت عمليه الخنجري.
  6. مع مساعده من اثنين من القطن المالحة مبلله نصائح ، وفضح الفص الأيسر من الكبد عن طريق تطبيق ضغط لطيف علي الصدر. ضع طرفا واحدا من القطن علي المنطقة الحجاب الحاجز من الجزء المنقوش والطرف القطني الآخر أسفل المنطقة المحفورة لرفع فص الكبد.
  7. زلة 8-10 سم طويلة الخيوط النايلون العقيمة حلقه (حجم 4-0 ، 0.15 مم قطرها) حول الفص الكبد المكشوفة. خذ الحلقة إلى قاعده الفص بالقرب من الهلالي بمساعده ملقط التشريح المجهري أو براعم القطن المبللة.
  8. بمساعده حامل ابره الجراحة المجهرية والملقط المجهري ، اربط طرفي الحلقة ، ووضع العقدة علي مقربه من قاعده الفص قدر الإمكان لعزل الاوعيه الدموية وتقليل النزيف بعد أزاله فص الكبد. اربط عقدتين إضافيتين علي الجانب الآخر
  9. اتخاذ الاحتياطات اللازمة لعدم ربط عقده قريبه جدا من الاوعيه الدموية القريبة ، والتي قد تسبب خلاف ذلك انسداد وريدي (تضيق).
  10. استخدم مقص الجراحة المجهرية لقطع الفص المربوط فوق العقدة مباشره ، والذي يترك كتله مشوه من الانسجه تسمي الجذع الدماغي بدلا من الفص.
    ملاحظه: يتم تقسيم الكبد الفئران ، مثل تلك الفئران ، إلى أربعه فصوص متميزة: الفص المتوسط ، الفص الجانبي الأيمن ، الفص الجانبي الأيسر ، وفص العين ، الذي يمثل حوالي 40 ٪ ، 20 ٪ ، 30 ٪ ، و 7 ٪ من إجمالي كتله الكبد ، علي التوالي. يمكن أزاله اي مزيج من هذه الفصوص إلى المكوس 70 ٪ كتله الكبد. في الدراسة الحالية ، تمت أزاله الفص الوسطي والفصوص الجانبية اليسرى.
  11. حدد موقع الفص الوسيط بعناية دون اتلاف الجذع المتبقي من الفص الجانبي الأيسر. اسحبه برفق للخروج من تجويف البطن ، وعند قاعده الفص ، اربط خيط نايلون طوله 8 – 10 سم (الحجم 4 – 0) عقده كما ذكر سابقا. اربط عقدتين إضافيتين علي الجانب الآخر المكوس بعناية وأزاله الفص الوسيط المربوط مع اتخاذ جميع الاحتياطات المذكورة.
  12. بعد أزاله الفصوص ، يمكنك خياطه الصفاق باستخدام خيط قابل للامتصاص من الكروم 4 – 0 مع غرز مستمرة تليها خياطه الجلد بالخيط المتقطع.
  13. تطبيق اليود البوفيدون علي الجلد المحيطة الغرز لمنع العدوى.
  14. أزاله ورقه ثني وأزاله الحيوانية من مجلس الجراحة.

4. الرعاية بعد الجراحة في الحيوانية

  1. داخل الصفاق حقن الحيوانية مع جرعه من 12 ملغ سيفوتوكسيم المضادات الحيوية في 1 مل من محلول الجلوكوز 5 ٪ مع حقنه 1 مل لحمايته من خطر العدوى بعد الجراحة.
  2. أداره حقن تحت الجلد من ميلوكسيكام مسكن (1 مغ/كغ وزن الجسم) لتخفيف الم بعد الجراحة ومتابعته من قبل اثنين من جرعات أخرى, الحفاظ علي نظام جرعه واحده يوميا.
  3. منزل الكائنات التي تعمل تحت ظروف قياسيه من 12 ح ضوء/دوره الظلام ورصد علي فترات منتظمة.

5. حقن المخدرات في الكائنات الكبدية جزئيا للحث علي فشل الكبد

  1. بعد 24 ساعة بعد الجراحة ، عندما الكائنات قد تعافي بنجاح من 70 ٪ PHx ، قياس وزن الجسم من الحيوانية تليها الحقن.
  2. حقن 750 ملغ/كغ من وزن الجسم من APAP داخل الخلايا الكبدية جزئيا 24 ح بعد 70% PHx بعد الشفاء الناجح للحيوانات من العملية الجراحية. كرر الجرعة مره أخرى بعد 24 ساعة.
    ملاحظه: يتم إعطاء جرعتين من APAP داخل الصفاق إلى الحيوانية (اي ، 24 h و 48 h آخر الاجراء 70% PHx ، علي التوالي).
  3. في كل نقطه زمنيه بعد حقن APAP ، قياس وزن الجسم من الحيوانية يتعافى.
    ملاحظه: يتم حقن APAP (بيوتيمول) في الحيوانية باعتبارها 150 ملغ/مل محلول في 2 ٪ البنزيل الكحول.

6. زرع خلايا الكبد الصحية في نماذج الحيوانية الف

ملاحظه: لدراسة القابلية للانعكاس من الف في الفئران ، زرع الخلايا الكبدية الفئران الصحية السليمة بشكل كلي في الحيوانية التي يسببها الف معالجرعة الاولي من apap. في الدراسة الحالية ، لتوفير الوقت الكافي للخلايا المزروعة لتوجيه والتطعيم ، وقد تم زرع فقط بعد إعطاءالجرعة الاولي من apap. يتم عزل خلايا الكبد الفئران بواسطة بروتوكول نشرت لأول مره من قبل بيري والأصدقاء وآخرون28 وتكييفها في وقت لاحق في مختلف الدراسات الأخرى29,30,31 مع بعض التعديلات. لزرع الخلايا داخل النموذج الحيواني لمؤسسه الفا ، اتبع الخطوات المذكورة أدناه.

  1. وضع الفئران في بولي (ميثيل ميثاكريلات) غرفه لتحريض التخدير مع 4 ٪ ايزوفلونان و 4 لتر/دقيقه تدفق الأكسجين لجرذ من 250-350 ز وزن الجسم. التحقق من عمق التخدير بسبب عدم وجود ردود فعل دواسة عندما معسر اصبع القدم من الحيوانية.
  2. ضع الجرذ التخدير علي اللوحة الجراحية بحيث يواجه الجزء الجانبي الأيسر. الحفاظ علي التخدير عند 2 – 3% من استنشاق الايزوفلواني من خلال فم مناسب.
  3. حلق الجلد علي المنطقة الجانبية اليسرى وتعقيمها بمحلول اليود البوفيدون.
  4. اجراء شق عرضي علي المنطقة حليق من الجلد.
  5. جعل 1-2 سنتيمتر قطع في طبقه البريتوني لفضح الطحال.
  6. اخرج برفق الطحال من التجويف البريتوني ورفعه بمساعده اثنين من نصائح القطن مبلل.
  7. الحفاظ علي الخلايا (عاده 107 لكل الحيوانية) ليتم زرعها معلقه في 50 ΜL imdm الوسائط في حقنه الانسولين 1 مل مع ابره 29 G.
  8. يخترق الابره برفق في قشره الطحال ويطلق تعليق الخلية في الطحال في غضون 2 – 3 دقائق.
  9. بعد الانتهاء من زرع الخلايا ، بعناية إخراج الابره والداب منطقه ثقب ابره مع طرف القطن مبلله لتجنب تسرب من تعليق الخلية من الموقع.
  10. اغلق الصفاق والجلد بواسطة خياطه قابله للامتصاص بمقدار 4 – 0 مع الغرز المستمرة والمتقطعة علي التوالي.
  11. تطبيق محلول اليود البوفيدون علي الجلد في مكان الغرز لمنع العدوى في موقع تشغيلها.
  12. حقن داخل 1 مل حجم من 12 ملغ/مل من المضادات الحيوية (علي سبيل المثال ، سيفاوتوسيم) حل وجلد حقن مسكن (علي سبيل المثال ، meloxicam) 1 مغ/كغ وزن الجسم للحيوان كجزء من الرعاية بعد الجراحة. نقل الحيوانية إلى قفص يتعافى الدافئة.
  13. الحفاظ علي الحيوانية تعمل في عزله في ظل الظروف العادية من 12 ح الضوء/دوره الظلام حتى تلتئم الجروح الجراحية تماما. قد يستغرق هذا 3-4 أيام.

7-توصيف تنميه المؤسسة

  1. موت ببطء الحيوانية بجرعة زائده من محلول الكيتامين-اكسيليازين 2 ح بعد الجرعةالثانية من apap العلاج وجمع عينات الدم والانسجه.
  2. جمع المصل من الدم للدراسات البيوكيميائية32.
  3. عمليه عينات انسجه الكبد للدراسات النسيجية والجينات التعبير33،34،35.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

نسبه البقاء علي قيد الحياة في نماذج الحيوانية من الف
وقد تم توحيد الجرعة المثلي من APAP لتسبب الفا في تركيبه مع 70 ٪ PHx كما 750 مغ/كغ من وزن الجسم. بدا نظام العلاج 24 ساعة بعد 70 ٪ PHx ، عندما كانت الماشية قد تعافي تماما من الجراحة ، وتتكون من جرعتين APAP في فترات 24 ساعة. ولوحظت وفيات بمعدل 80 في المائة بعد أداره الجرعة الثانية من APAP ، 48 h بعد الجراحة. وقد حللت نسبه البقاء علي قيد الحياة ورسمت عن طريق كابلان-ماير (الشكل 1). استنساخ في وقت الوفاة والفترة الزمنيه التي يوفرها هذا النموذج يجعلها مرشحا مناسبا لدراسة التدخل العلاجي ضد الف.

تم النظر في أربع مجموعات من الماشية للدراسة: المجموعة 1 (مجموعه التحكم ، العلاج الملحي فقط) ، المجموعة 2 (APAP فقط في 750 ملغ/كغ من وزن الجسم) ، المجموعة 3 (المعالجة الملحية مع 70 ٪ PHx) والمجموعة 4 (APAP في 750 ملغ/كغ من وزن الجسم مع 70 ٪ PHx). وقد تم ادراج ثلاثه من الماشية في كل المجموعات ، وأدرجت صورتان تمثيليه من كل مجموعه. كانت الماشية من جميع المجموعات الأربع رحيم 2 ح بعد أدارهالجرعة 2 من العلاج المعني. وأظهرت عينات الكبد الماخوذه من جميع المجموعات الاربعه تشكلا متميزا عن بعضها البعض. وأظهرت المجموعة 1 المورفولوجية البني المحمر للكبد القوارض صحية. وأظهرت عينات الكبد من المجموعة 2 اي علامات واضحة للضرر علي المستوي المورفولوجية وأظهرت مظهر مماثل للكبد صحية من المجموعة 1. ولم تظهر عينات الكبد الماخوذه من المجموعتين 3 و 4 بصحة جيده وكان لها تلون ومظهر غير مكتمل. اللون يماثل إلى الإتلاف في الكبد نسيج وكان أكثر واضحة في مجموعه 4. وترد البيانات التمثيلية في الشكل 2.

تم تحديد مدي أصابه الكبد عن طريق التحقق من مستويات المصل من ALT, AST, والانزيمات ألب36,37,38. وأظهرت مستويات ALT و AST و ALP اختلافات ملحوظة بين المجموعات الأربع المقابلة لمدي تلف الكبد. وأظهرت المجموعة الرابعة زيادة كبيره في مستويات AST و ALP مقارنه بالمجموعة 1 (الشكل 3).

لمقارنه التشكيل الجانبي للتعبير الجيني في السيطرة والجماعات التي يسببها الف ، تم اجراء تحليل q-PCR للجينات المشاركة في موت الخلايا (Bax2 ، Caspase3 ، Fas) في عينات انسجه الكبد35،39. وتبين ان هذه المجموعات كانت في المجموعة 3 بالمقارنة بالفريق الأول ، في حين لم يظهر اي فرق في المجموعة 2 والمجموعة 4. الجينات التي من المعروف ان يبالغ في الاستجابة لإصابات الكبد (Mcp1 و Mmp2)33،وجدت40 ان تكون اوبريجولاتيد في جميع المجموعات الثلاث بالمقارنة مع مجموعه السيطرة 1. Mmp9 كان [اوبريغلتد] في مجموعه 3 و 4 حيث ان مجموعه 2 يبدي ما من فرق ملحوظة من تحكم مجموعه 1. وتبين ان مستويات التعبير Timp1 و Timp234 اعلي في المجموعة 3 ولكنها لم تظهر تعبيرا مفرطا ملحوظا في المجموعة 4 (الشكل 4).

الجينات المتورطة في التهاب الكبد (tnfa ، IL1a ، Tgfbr1 ، و IL1b)41،42،43،44 وجدت ان يبالغ في المجموعة 3 بالمقارنة مع مجموعه التحكم 1 ولكن تم تقليل مستوي التعبير في المجموعة 4. يتم الإفراط في التعبير عنه في انسجه الكبد بعد التحريض علي أصابه الكبد. الشلالات المصب من هذا الجين تساعد في تجديد الكبد. RIP1 البروتين ضروري في سميه APAP المستحثة. وقد تبين ان الفريقين 2 و 3 RIP1ان بالمقارنة مع المجموعة الاولي ، بينما تظل مستوياتهما متشابهة أو اقل في المجموعة 4. الفا العضلاتالملساء الاكتين (اسما) ، وهو علامة علي ترسب الإفراط في أداره المحتوي التي تؤدي إلى مزيد من التليف ، وجدت ان اوبريجولاتيد في المجموعة 3 و 4 بالمقارنة مع السيطرة علي المجموعة 1 (الشكل 4). تشير بيانات التعبير الجيني إلى ان المؤشرات الحيوية المذكورة أعلاه للالتهاب وموت الخلايا المعروفة بأنها مفرطة التعبير اثناء أصابه الكبد هي اوبريجولاتيد في عينات انسجه الكبد من الكائنات التي كانت مؤسسه الفا-مستحثه بطريقه مقترحه ، مما يؤكد حدوث إصابات في الكبد علي المستوي الجزيئي

الهيوسين واليوزين (H & E) تلطيخ
وقد تم تلطيخ الهييوكسيلين و ايوسين (H & E) لتقييم شده أصابه الكبد من خلال مراقبه مدي انحطاط الخلايا الكبدية. وخضعت أقسام انسجه الكبد الملطخة بالساعة & E لتحليل اعمي من قبل طرف ثالث. في 70% الجزئية استئصال الكبد ولوحظ انحطاط الدهنية الشحمية وفي مجموعه اسيتامينوفين التهاب والنخر وكان ينظر إلى جنب مع التوسع الحلقي الخفيف. ولوحظ الانحطاط الدهني الحويصلي في الغالب في مجموعه الفا (الشكل 5).

مستويات الجلوكوز في الدم والوقت البروبين
الوقت بروثيوم (PT) هو المعلمة التي تعتمد علي نشاط الكبد-توليفها الانسجه الخثاري ويستخدم لتوصيف كفاءه اليه تخثر الدم45. عموما ، لوحظت زيادة في PT في ظروف الامراض المرتبطة بالكبد. تم العثور علي PT ان تكون اعلي بكثير في المجموعة التي يسببها الف بالمقارنة مع مجموعه التحكم. ووجد أيضا ان النسبة الدولية الموحدة (INR)45 اعلي ، مما يمثل عيبا في اليه تخثر الدم نتيجة لعدم كفاءه فسيولوجية الكبد (الشكل 6).

تقييم البقاء علي قيد الحياة بعد خليه صحية الفئران زرع الخلايا الكبدية
ومن المعايير الهامه لنموذج مؤسسه البيانات الطبية هو القابلية العكسية لفشل الكبد في وجود تدخل علاجي. في الدراسة الحالية ، تم زرع 10,000,000 الخلايا الكبدية الفئران الصحية بشكل غير متناسق لمراقبه تاثير العلاج بزراعه الخلايا علي فشل الكبد. تم تحديد العدد المناسب من الخلايا التي سيتم زرعها من خلال مراقبه انعكاس فشل الكبد بعد زرع أرقام الخلايا المختلفة (البيانات غير معروضه). وزرعت الخلايا بعد تناولالجرعة الاولي من apap ، ووجد ان البقاء علي قيد الحياة قد استعيد في الماشية بعد زرع الخلايا (الشكل 7). تم العثور علي مستويات المصل من الانزيمات ALT ، AST ، و ALP ان تطبيع بعد 10 يوما من زرع الخلايا (الشكل 8).

Figure 1
الشكل 1: نسبه البقاء علي قيد الحياة في المجموعة التي يسببها الف. كابلان-ماير البقاء علي قيد الحياة المنحني تظهر نسبه البقاء علي قيد الحياة من الحيوانية بعد التعريفي من الف مع مزيج من 70 ٪ PHx و APAP الجرعة (750 مغ/كغ وزن الجسم). الوقت 0 h يدل علي الوقت من 70 ٪ PHx. وكانتالجرعات الاولي والثانية من apap تدار 24 و 48 h بعد جراحيا (ن = 12, مجموع الحيوانية). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Figure 2
الشكل 2: صور تمثيليه لمورفولوجية الكبد في المجموعات الأربع المختلفة المدرجة في الدراسة. تظهر لوحات الصور A – D تشكل الكبد من مجموعات مختلفه بعد ان رحيم 2 ح بعد الجرعة 2الثانية من العلاج المعني. (ا) شكل الكبد للسيطرة علي المجموعة 1 التي أعطيت فقط المالحة. (ب) تشكل الكبد من المجموعة 2 التي أعطيت فقط apap في جرعه 750 ملغ/كغ من وزن الجسم. (ج) تشكل الكبد في المجموعة 3 التي أعطيت المحلول الملحي بعد 70 ٪ phx. (د) تشكل الكبد في المجموعة 4 التي أعطيت apap بعد 70 ٪ phx في جرعه مماثله للمجموعة 3 (ن = 3 الحيوانية لكل مجموعه). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Figure 3
الشكل 3: مقارنه للتشكيل البيوكيميائي لمصل الدم في المجموعات المختلفة. تمثل الرسوم البيانية الشريطية القيمة المتوسطة ل ALT و AST و ALP في عينات المصل من المجموعات الاربعه المضمنة في الدراسة. تم جمع المصل2 ساعة بعد الجرعة 2 من العلاج المعني. أشرطه الخطا = s. .M; = p < 0.001 ؛ * = p < 0.05 ؛ n = 3. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Figure 4
الشكل 4: ملف التعبير الجيني لعينات انسجه الكبد. تمثل الرسوم البيانية الشريطية الكمية النسبية لتعبير mRNA عن الجينات المختلفة المتورطة في التهاب وموت الخلايا في المجموعات الأربع التي تعرضت لعلاجات مختلفه. تم تطبيع جميع الجينات ضد التعبير عن السيطرة علي الفجوة. شريط الخطا = متوسط الخطا القياسي للعينات الثلاثة المختلفة (n = 3). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Figure 5
الشكل 5: دراسة نسيجيه لعينات انسجه الكبد. ممثل الدموية والصور تلطيخ يوزين من عينات انسجه الكبد من المجموعات الأربع المدرجة في الدراسة ، كما لوحظ تحت التكبير 200x في المجهر الميداني مشرق. كانت هناك في الغالب خلايا الكبد العادية في السيطرة علي المجموعة 1 مع تسلل حول خفيفه (الأسهم الخضراء). في المجموعة 3 (70 ٪ استئصال الكبد الجزئي) لوحظ انحطاط الدهنية فوق الترقوة (السهام البيضاء) وفي المجموعة اسيتامينوفين 2 التهاب حول (السهام الحمراء) وكان ينظر إلى نخر جنبا إلى جنب مع التوسع الحلقي المعتدل (السهام الصفراء). لوحظ الانحطاط الدهني الكلي في الغالب في مجموعه الفا 4 (الأسهم البرتقالية). شريط مقياس = 50 μm. الرجاء النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Figure 6
الشكل 6: مقارنه الوقت المحدد (PT) والنسبة الدولية المعدلة (INR). (ا) مقارنه PT بين مجموعه التحكم 1 (المحلول الملحي الحقن آخر 70 ٪ phx) والف المستحثة المجموعة 4 (apap حقن آخر 70 ٪ phx). تم جمع الدم 2 ح بعد الجرعةالثانية من العلاج المعني والوقت (بالثواني) المطلوبة لتشكيل تجلط الليبين يظهر علي محور Y (* * * * = p < 0.0001 ، n = 5). (ب) الروبية الهندية في المجموعة 4 التي تسببت فيها المؤسسة مقارنه بالمجموعة الاولي من الرقابة. تم العثور علي القيمة المتوسطة لINR في المجموعة 4 لتكون 2.28 ، والتي تقع في تاثير التخثر المضادة وارفارين (ن = 5). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Figure 7
الشكل 7: نسبه البقاء علي قيد الحياة في المجموعة المستحثة بالف بعد زرع الخلايا. منحني بقاء كابلان-ماير الذي يظهر نسبه البقاء علي قيد الحياة بعد زرع الخلايا الكبدية الصحية في المجموعة 4 بسبب الفا بالمقارنة مع السيطرة علي المجموعة 1 (ن = 5). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Figure 8
الشكل 8: المصل البيوكيميائي للحيوانات التي يسببها الفا بعد زرع الخلايا. مستويات المصل من الانزيمات ALT, AST, و ALP 10 أيام بعد زرع الخلايا بالمقارنة مع مستويات المصل من الحيوانية التي يسببها الف رحيمبعد جرعه 2 من apap الاداره. خطا شريط = خطا القياسية من متوسط خمس عينات مختلفه; = p < 0.0001 ؛ * * = p > 0.01 ؛ n = 5. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

تطوير نموذج الحيوانية المناسبة لمؤسسه الفا هو أمر بالغ الاهميه لفهم أفضل لتولد المرض وتطور الف. كما يوفر نموذج الحيوانية المميز لمؤسسه الفا فرصه لتطوير ومحاكمه النهج العلاجية الجديدة ضد مؤسسه المؤسسة. وقد بذلت محاولات كثيره لتطوير نموذج ذي صله سريريا من الف6،12،21،23،46،47،48. معظم هذه الدراسات اما استخدام الإجراءات الجراحية أو الحث علي أصابه الكبد بواسطة المواد الكيميائية سميه كبديه.

فمن الصعب إنشاء نموذج الفا من قبل PHx وحدها لان PHx لن تعكس علم الامراض من الف بسبب عدم وجود التهاب الناجمة عن الانسجه الميتة وموت الخلايا. في الجرعات العلاجية ، يتم استقلاب APAP تماما من خلال عمليات جلوبورون والكبريتية. عند الجرعات العالية ، عندما تكون هذه المسارات مشبعه ، يتم استقلاب APAP بواسطة انزيمات سيتوكروم p450 التي يتم توليفها في المقام الأول من قبل خلايا الكبد ، مما يؤدي إلى تشكيل متوسط سام ، نابتشي (ن-اسيتيل-ف-البنبنكينون ايمين). في ظل الظروف العادية يتم تحييد napqi من قبل الاحتياطيات الجلوتاثيون (gsh) من الخلايا ، في حين ان الجرعات العلاجية في supratherapeutic يسبب الإجهاد التاكسدي في خلايا الكبد ، مما ادي إلى وفاه خلايا الكبد4،24،25،46. التالي ، من خلال الجمع بين الآثار الفسيولوجية من 70 ٪ PHx وإصابات الكبد الناجمة عن APAP ، تم إنشاء نموذج الفئران الفا في الدراسة الحالية. اطار علاجي أصغر يقلل من فتره الإجهاد علي الحيوانية. عندما يقترن مع جرعات صغيره من APAP ، وهذا يؤدي إلى استنساخ أفضل من الاجراء.

تم اختيار جرعه APAP لتوفير نافذه علاجيه مناسبه يمكن خلالها إعطاء تدخل علاجي للحيوان (اي ، في غضون 48 ساعة منالجرعة الاولي و 24 ساعة من الجرعةالثانية ). في غضون 24 ساعة بعد الجرعةالثانية من apap ، لوحظت نسبه الوفاات 100 ٪. ومع ذلك ، كان وقت الوفاة خلال هذه الفترة متغيرا لكل الحيوانية. التالي ، لغرض دراسة تطوير الف ، وكانت الرحيم الحيوانية في نقطه زمنيه قياسيهمن 2 ساعة بعد الجرعة 2 من apap.

ويمكن ان يتقرر وقت التدخل العلاجي اعتمادا علي الدراسة الفردية ونوع العلاج الذي يجري دراسته ، والتي في الدراسة الحالية كانت زرع خلايا الكبد الفئران المتزامنة فقطبعد جرعه 1 من apap ، مما يسمح للخلايا ما يكفي من الوقت للمنزل والطعم. في النموذج الحالي, زرع ما لا يقل عن 10,000,000 خلايا مطلوبه لإنقاذ ناجحه من الف.

لضمان نجاح العملية الجراحية ، ينبغي النظر في عدد قليل من النقاط الهامه. من المستحسن استخدام أنواع مختلفه من التخدير في العمليات الجراحية المختلفة. لاجراء استئصال الكبد الجزئي ، يجب استخدام كوكتيل من الكيتامين-اكسيليازين في الجرعات الموصي بها لأنه يعطي متسعا من الوقت لإكمال العملية الجراحية. اثناء زراعه الخلايا ، يجب استخدام ايزوفلونان التخدير المستنشق لأنه يقلل من الضغط البدني علي الحيوانية التي يسببها الف.

وفي الختام ، وبسبب معدل الوفاات الموحد والنافذة العلاجية المناسبة ، تم استخدام نموذج APAP و 70% PHx مجتمعه لدراسة القابلية العكسية للفا عن طريق زرع الخلايا. ولتقييم قابليه هذه المؤسسة للانعكاس ، تم زرع 10,000,000 من خلايا الكبد السليمة وراثيا في الماشية التي يسببها الفا. بعد الزرع ، تم العثور علي نسبه البقاء علي قيد الحياة لزيادة في الحيوانية التي يسببها الف. ولوحظ أيضا تحسن في مستويات مصل ALT ، AST ، و ALP في الماشية بعد زرع الخلايا ، مما يوحي باستعادة استقلاب الكبد. يقدم هذا النموذج الحيواني لمؤسسه الفا بديلا لتقييم الإمكانات العلاجية للخلايا التي تسد الفجوة بين الفشل الكبدي الحاد وزرع الكبد. كما يوفر الفرصة لدراسة تلف الكبد الناجم عن الاصابه الجسدية وعامل سميه كبديه.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

Acknowledgments

وكان هذا العمل مدعوما بالمنحة الاساسيه التي تلقتها من أداره التكنولوجيا الحيوية ، حكومة الهند ، إلى المعهد الوطني للمناعة في نيودلهي.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetaminophen (Biocetamol) EG Pharmaceuticals No specific Catalog Number (Local Procurement)
Alkaline Phosphatase Kit (DEA) Coral Clinical System, India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Automated analyser Tulip, Alto Santracruz, India Screen Maaster 3000 Biochemical analyser for liver functional test
Betadine (Povidon-Iodine Solution) Win-Medicare; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Biological safety cabinet (Class I) Kartos international; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Bright Field Microscope Olympus, Japan LX51
Cefotaxime (Taxim®) AlKem; India cefotaxime sodium injection, No specific Catalog Number (Local Procurement)
Cell Strainer Sigma; US CLS431752
Collagenase Type I Gibco by Life Technologies 17100-017
Cotton Buds Pure Swabs Pvt Ltd; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Drape Sheet JSD Surgicals, Delhi, India No specific Catalog Number (Local Procurement)
DPX Mountant Sigma; US 6522
Eosin Y solution, alcoholic Sigma; US HT110132
Forceps Major Surgicals; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Gas Anesthesia System Ugo Basile; Italy 211000
Glucose Himedia, India GRM077
Hair removing cream (Veet®) Reckitt Benckiser, India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Hematoxylin Solution, Mayer's Sigma; US MHS16
Heparin sodium salt Himedia; India RM554
Hyaluronidase From Sheep Testes Sigma; US H6254
I.V. Cannula (Plusflon) Mediplus, India Ref 1732411420
Insulin Syringes BD; US REF 303060
Isoflurane (Forane®) Asecia Queenborough No B506 Inhalation Anaesthetic
Ketamine (Ketamax®) Troikaa Pharmaceuticals Ltd. Ketamine hydrochloride IP, No specific Catalog Number (Local Procurement)
Meloxicam (Melonex®) Intas Pharmaceuticals Ltd; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Micro needle holders straight &
curved		 Mercian; England BS-13-8
Micro needle holders straight &
curved		 Mercian; England BS-13-8
Microtome Histo-Line Laboratories, Italy MRS3500
Nylon Thread Mighty; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Paraformaldehyde Himedia; India GRM 3660
Percoll® GE Healthcare 17-0891-01
Refresh Tears/Eyemist Gel Allergan India Private Limited/Sun Pharma, India P3060 No specific Catalog Number
RPMI Himedia; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Scalpel Major Surgicals; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Scissors Major Surgicals; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
SGOT (ASAT) KIT Coral Clinical System, India No specific Catalog Number (Local Procurement)
SGPT (ALAT) KIT Coral Clinical System, India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Shandon Cryotome E Cryostat Thermo Electron Corporation; US No specific Catalog Number
Sucrose Sigma; US S0389
Surgical Blade No. 22 La Medcare, India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Surgical Board Locally made No specific Catalog Number (Local Procurement)
Surgical White Tape 3M India; India 1530-1 Micropore Surgical Tape
Sutures Ethicon, Johnson & Johnson, India NW 5047
Syringes (1ml, 26 G) Dispo Van; India No specific Catalog Number (Local Procurement)
Trimmer (Clipper) Philips NL9206AD-4 DRACHTEN QT9005
Weighing Machine Braun No specific Catalog Number (Local Procurement)
William's E Media Himedia; India AT125
Xylazine (Xylaxin®) Indian Immunologicals Limited Sedative, Pre-Anaesthetic, Analgesic and muscle relaxant

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Polson, J., Lee, W. M. AASLD position paper: the management of acute liver failure. Hepatology. 41, 1179-1197 (2005).
  2. Chung, R. T., et al. Pathogenesis of liver injury in acute liver failure. Gastroenterology. 143, 1-7 (2012).
  3. Fyfe, B., Zaldana, F., Liu, C. The Pathology of Acute Liver Failure. Clinical Liver Disease. 22, 257-268 (2018).
  4. Lefkowitch, J. H. The Pathology of Acute Liver Failure. Advances in Anatomic Pathology. 23, 144-158 (2016).
  5. Mitchell, J. R., et al. Acetaminophen-induced hepatic necrosis. I. Role of drug metabolism. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 187, 185-194 (1973).
  6. Rahman, T. M., Hodgson, H. J. Animal models of acute hepatic failure. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 81, 145-157 (2000).
  7. Rahman, T. M., Selden, A. C., Hodgson, H. J. A novel model of acetaminophen-induced acute hepatic failure in rabbits. Journal of Surgical Research. 106, 264-272 (2002).
  8. Dashti, H., et al. Thioacetamide- and carbon tetrachloride-induced liver cirrhosis. European Surgical Research. 21, 83-91 (1989).
  9. Demirdag, K., et al. Role of L-carnitine in the prevention of acute liver damage-induced by carbon tetrachloride in rats. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 19, 333-338 (2004).
  10. Sheweita, S. A., Abd El-Gabar, M., Bastawy, M. Carbon tetrachloride-induced changes in the activity of phase II drug-metabolizing enzyme in the liver of male rats: role of antioxidants. Toxicology. 165, 217-224 (2001).
  11. Sinicrope, R. A., Gordon, J. A., Little, J. R., Schoolwerth, A. C. Carbon tetrachloride nephrotoxicity: a reassessment of pathophysiology based upon the urinary diagnostic indices. American Journal of Kidney Diseases. 3, 362-365 (1984).
  12. Takada, Y., Ishiguro, S., Fukunaga, K. Large-animal models of fulminant hepatic failure. Journal of Artificial Organs. 6, 9-13 (2003).
  13. Takada, Y., et al. Increased intracranial pressure in a porcine model of fulminant hepatic failure using amatoxin and endotoxin. Journal of Hepatology. 34, 825-831 (2001).
  14. Leist, M., Wendel, A. A novel mechanism of murine hepatocyte death inducible by concanavalin A. Journal of Hepatology. 25, 948-959 (1996).
  15. Mizuhara, H., et al. Strain difference in the induction of T-cell activation-associated, interferon gamma-dependent hepatic injury in mice. Hepatology. 27, 513-519 (1998).
  16. Bruck, R., et al. Hypothyroidism minimizes liver damage and improves survival in rats with thioacetamide-induced fulminant hepatic failure. Hepatology. 27, 1013-1020 (1998).
  17. Chieli, E., Malvaldi, G. Role of the microsomal FAD-containing monooxygenase in the liver toxicity of thioacetamide S-oxide. Toxicology. 31, 41-52 (1984).
  18. Fontana, L., et al. Serum amino acid changes in rats with thioacetamide-induced liver cirrhosis. Toxicology. 106, 197-206 (1996).
  19. Peeling, J., et al. Cerebral metabolic and histological effects of thioacetamide-induced liver failure. American Journal of Physiology. 265, 572-578 (1993).
  20. Blitzer, B. L., et al. A model of fulminant hepatic failure in the rabbit. Gastroenterology. 74, 664-671 (1978).
  21. Diaz-Buxo, J. A., Blumenthal, S., Hayes, D., Gores, P., Gordon, B. Galactosamine-induced fulminant hepatic necrosis in unanesthetized canines. Hepatology. 25, 950-957 (1997).
  22. Maezono, K., Mawatari, K., Kajiwara, K., Shinkai, A., Maki, T. Effect of alanine on D-galactosamine-induced acute liver failure in rats. Hepatology. 24, 1211-1216 (1996).
  23. Patzer, J. F., et al. D-galactosamine based canine acute liver failure model. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 1, 354-367 (2002).
  24. Newsome, P. N., Plevris, J. N., Nelson, L. J., Hayes, P. C. Animal models of fulminant hepatic failure: a critical evaluation. Liver Transplantation. 6, 21-31 (2000).
  25. Yoon, E., Babar, A., Choudhary, M., Kutner, M., Pyrsopoulos, N. Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity: a Comprehensive Update. Journal of Clinical and Translational Hepatology. 4, 131-142 (2016).
  26. Das, B., et al. Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
  27. Mitchell, C., Willenbring, H. A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice. Nature Protocols. 3, 1167-1170 (2008).
  28. Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study. Journal of Cell Biology. 43, 506-520 (1969).
  29. Fry, J. R., Jones, C. A., Wiebkin, P., Bellemann, P., Bridges, J. W. The enzymic isolation of adult rat hepatocytes in a functional and viable state. Analytical Biochemistry. 71, 341-350 (1976).
  30. Green, C. J., et al. The isolation of primary hepatocytes from human tissue: optimising the use of small non-encapsulated liver resection surplus. Cell Tissue Bank. 18, 597-604 (2017).
  31. Ismail, T., et al. Growth of normal human hepatocytes in primary culture: effect of hormones and growth factors on DNA synthesis. Hepatology. 14, 1076-1082 (1991).
  32. Greenfield, E. A. Sampling and Preparation of Mouse and Rat Serum. Cold Spring Harbor Protocols. 11, (2017).
  33. Walsh, K. M., Timms, P., Campbell, S., MacSween, R. N., Morris, A. J. Plasma levels of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitors of metalloproteinases -1 and -2 (TIMP-1 and TIMP-2) as noninvasive markers of liver disease in chronic hepatitis C: comparison using ROC analysis. Digestive Diseases and Sciences. 44, 624-630 (1999).
  34. Thiele, N. D., et al. TIMP-1 is upregulated, but not essential in hepatic fibrogenesis and carcinogenesis in mice. Scientific Reports. 7, 714 (2017).
  35. Li, C. P., Li, J. H., He, S. Y., Li, P., Zhong, X. L. Roles of Fas/Fasl, Bcl-2/Bax, and Caspase-8 in rat nonalcoholic fatty liver disease pathogenesis. Genetics and Molecular Research. 13, 3991-3999 (2014).
  36. Kim, W. R., Flamm, S. L., Di Bisceglie, A. M., Bodenheimer, H. C. Serum activity of alanine aminotransferase (ALT) as an indicator of health and disease. Hepatology. 47, 1363-1370 (2008).
  37. Henry, L. Serum transaminase levels in liver disease. Journal of Clinical Pathology. 12, 131-137 (1959).
  38. Giannini, E. G., Testa, R., Savarino, V. Liver enzyme alteration: a guide for clinicians. Canadian Medical Association Journal. 172, 367-379 (2005).
  39. Hammam, O., et al. The role of fas/fas ligand system in the pathogenesis of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Hepatitis Monthly. 12, 6132 (2012).
  40. Prystupa, A., et al. Activity of MMP-2, MMP-8 and MMP-9 in serum as a marker of progression of alcoholic liver disease in people from Lublin Region, eastern Poland. The Annals of Agricultural and Environmental Medicine. 22, 325-328 (2015).
  41. Sekiyama, K. D., Yoshiba, M., Thomson, A. W. Circulating proinflammatory cytokines (IL-1 beta, TNF-alpha, and IL-6) and IL-1 receptor antagonist (IL-1Ra) in fulminant hepatic failure and acute hepatitis. Clinical and Experimental Immunology. 98, 71-77 (1994).
  42. Schwabe, R. F., Brenner, D. A. Mechanisms of Liver Injury. I. TNF-alpha-induced liver injury: role of IKK, JNK, and ROS pathways. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 290, 583-589 (2006).
  43. Ataseven, H., et al. The levels of ghrelin, leptin, TNF-alpha, and IL-6 in liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma due to HBV and HDV infection. Mediators of Inflammation. 2006, 78380 (2006).
  44. Ambrosino, G., et al. Cytokines and liver failure: modification of TNF- and IL-6 in patients with acute on chronic liver decompensation treated with Molecular Adsorbent Recycling System (MARS). Acta Bio Medica Atenei Parmensis. 74, Suppl 2 7-9 (2003).
  45. Robert, A., Chazouilleres, O. Prothrombin time in liver failure: time, ratio, activity percentage, or international normalized ratio. Hepatology. 24, 1392-1394 (1996).
  46. Francavilla, A., et al. A dog model for acetaminophen-induced fulminant hepatic failure. Gastroenterology. 96, 470-478 (1989).
  47. Terblanche, J., Hickman, R. Animal models of fulminant hepatic failure. Digestive Diseases and Sciences. 36, 770-774 (1991).
  48. Tunon, M. J., et al. Rabbit hemorrhagic viral disease: characterization of a new animal model of fulminant liver failure. Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 141, 272-278 (2003).

Tags

الطب الإصدار 153 نموذج فشل الكبد الحاد الف استئصال الكبد الجزئي اسيتامينوفين APAP زرع داخل الصفاق الفئران Wistar زرع الخلايا الكبدية
جيل من نموذج الفئران من فشل الكبد الحاد عن طريق الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي و اسيتامينوفين
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sahay, P., Jain, K., Sinha, P., Das, … More

Sahay, P., Jain, K., Sinha, P., Das, B., Mishra, A., Kesarwani, A., Sahu, P., Mohan, K. V., Kumar, M. J. M., Nagarajan, P., Upadhyay, P. Generation of a Rat Model of Acute Liver Failure by Combining 70% Partial Hepatectomy and Acetaminophen. J. Vis. Exp. (153), e60146, doi:10.3791/60146 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter