Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

الإجهاد المزمن يتحول سلوك الاختيار ذات الصلة بالجهد في مهمة حاجز Y-Maze في الفئران

Published: August 13, 2020 doi: 10.3791/61548
Automatic Translation
1,2, 1, 1,2
1Department of Psychology, Behavioral and Systems Neuroscience Area, The State University of New Jersey, 2Graduate Program in Neuroscience, Rutgers, The State University of New Jersey

Summary

مهمة حاجز Y-maze هي اختبار سلوك يفحص الدافع لبذل الجهد من أجل المكافأة. هنا، نناقش اختبار العديد من الضغوطات المزمنة التي تم التحقق من صحتها بشكل جيد بما في ذلك الكورتيكوستيرون المزمن والإجهاد الهزيمة الاجتماعية مع هذا السلوك، فضلا عن الرواية المزمنة غير التمييزية الإجهاد الهزيمة الاجتماعية (CNSDS)، والتي هي فعالة في الإناث.

Abstract

اضطرابات المزاج, بما في ذلك اضطراب الاكتئاب الرئيسية, يمكن أن تكون قد عجلت من الإجهاد المزمن. مهمة حاجز Y-maze هي اختبار اختيار مرتبط بالجهد يقيس الدافع لبذل الجهد والحصول على المكافأة. في الفئران، يؤثر التعرض للإجهاد المزمن بشكل كبير على الدافع للعمل للحصول على مكافأة ذات قيمة أعلى عندما تكون مكافأة القيمة الأقل متاحة مجانًا مقارنة بالفئران غير المجهدة. هنا نصف نموذج إدارة الكورتيكوستيرون المزمن ، الذي ينتج تحولًا في الاستجابة الجهود في مهمة حاجز Y-maze. في مهمة Y-المتاهة، ذراع واحدة تحتوي على 4 حبيبات الطعام، في حين أن الذراع الأخرى تحتوي على 2 الكريات فقط. بعد الفئران تعلم اختيار الذراع مكافأة عالية، ثم يتم إدخال الحواجز مع ارتفاع متزايد تدريجيا في ذراع مكافأة عالية على مدى جلسات اختبار متعددة. لسوء الحظ، تم تطوير معظم نماذج الإجهاد المزمن (بما في ذلك الكورتيكوستيرون والهزيمة الاجتماعية) في الفئران الذكور وأقل فعالية في الفئران الإناث. لذلك، نناقش أيضًا الإجهاد المزمن غير التمييزي للهزيمة الاجتماعية (CNSDS)، وهو نموذج الإجهاد الذي طورناه وفعال في الفئران الذكور والإناث على حد سواء. تكرار النتائج مع العديد من الضغوطات المزمنة المتميزة في الفئران الذكور والإناث جنبا إلى جنب مع زيادة استخدام المهام السلوكية ذات الصلة ترجمة سوف تساعد على تعزيز فهم كيف يمكن أن يعجل الإجهاد المزمن اضطرابات المزاج.

Introduction

اضطرابات المزاج مثل الاكتئاب والقلق هي منتشرة بشكل كبير في مجتمع اليوم. وقد بحثت عقود من العمل باستمرار عن تحسين العلاجات ونماذج القوارض ذات الصلة لدراسة هذه الاضطرابات المعقدة1. الإجهاد المزمن هو عامل مساهم في اضطرابات المزاج مثل الاكتئاب2. لذلك، تم تطوير نماذج الإجهاد المزمن مثل الإجهاد المزمن للهزيمة الاجتماعية (SDS) والإدارة الكورتيكوستيرون المزمنة (CORT) في الفئران الذكور وتستخدم الآن على نطاق واسع لتقييم الآثار العصبية البيولوجية والسلوكية للتعرض للإجهاد المزمن. وتشمل الاختبارات السلوكية الأكثر استخداماً لتقييم آثار الإجهاد المزمن المهام المرتبطة بسلوك التجنب، مثل المتاهة المرتفعة، والمجال المفتوح، والتغذية المقمّعة بالجدة، أو مع فعالية مضادة للاكتئاب، مثل اختبار السباحة القسري. ومع ذلك ، يمكن القول إن هذه السلوكيات في القوارض تفتقر إلى الوجه ، والأهم من ذلك ، الصلاحية التنبؤية والصلة الانتقالية للاضطرابات البشرية مثل الاكتئاب.

نموذج الإجهاد المزمن شعبية, الإجهاد المزمن لا يمكن التنبؤ بها خفيفة (CUMS), وقد تم التحقق من صحة على نطاق واسع باستخدام سلوكيات مثل تفضيل السكروز3. CUMS يقلل من تفضيل حل السكروز 1٪ مقارنة مع المياه ويتم تفسيرها تاريخيا على أنها السلوك ذات الصلة anhedonia4,5. ومع ذلك، لا يلاحظ هذا الانخفاض في تفضيل السكروز في البشر مع اضطراب الاكتئاب الكبرى6،7. بالإضافة إلى ذلك، لا يسمح تفضيل السكروز لدراسة الدافع مكافأة جهد.

في الآونة الأخيرة، تحولت بعض البحوث التركيز على السلوكيات الأخرى المرتبطة الدافع ومكافأة8،9. هذه المهام لها قيمة ترجمة واعدة لأنه يمكن إجراء تقييمات سلوكية مماثلة نسبيًا في كل من البشر والقوارض. هنا، نحن وصف النماذج CORT و SDS وآثارها في مهمة سلوكية حاجز Y-maze التي تقيس الدافع لبذل الجهد من أجل المكافأة. ثم نناقش نموذج جديد للإجهاد المزمن الذي طورناه ، الإجهاد المزمن غير التمييزي للهزيمة الاجتماعية (CNSDS) ، والذي يكون فعالًا في الفئران الذكور والإناث على حد سواء.

إدارة الكورتيكوستيرون المزمنة (CORT) هو نموذج مصمم لمحاكاة الإجهاد المزمن دون التعرض للإجهاد الفعلي. تفعيل محور تحت المهاد النخامية-الكظرية نتيجة الإجهاد في الافراج عن الستيرويد الغدي الكورتيزول في البشر10,11,12 و corticosterone في الفئران13,14. تسليم الكورتيكوستيرون من خلال مياه الشرب من الفئران الذكور البالغين لمدة 4 أسابيع على الأقل النتائج في الاستجابات السلوكية غير المثبطة في تجنب المهام مثل مجال مفتوح، مرتفعة بالإضافة إلى متاهة، والجدة قمع التغذية10،,11،,12،,13،,14،,15،,16. ومن المثير للاهتمام، يؤثر CORT أيضا على معالجة المكافأة في المهام الآلية16،17،18،19. ينتج نموذج CORT الموصوف هنا تركيزًا ثابتًا في المصل أقل من 100 نانوغرام/مل كورت ، وهو أقل بخمس مرات من ذلك الذي ينتجه عامل إجهاد حاد مثل السباحة القسرية15. ولذلك، من غير المرجح أن يسبب إدارة CORT المزمنة فرط الكوليسوليم. في حين أن CORT المزمنة فعالة فقط في الفئران الذكور20، فقد أثبتنا مؤخرًا أنه ينتج تحولًا قويًا في الاستجابة للجهود في مهمة حاجز Y-maze21. على حد علمنا، كانت هذه واحدة من الدراسات الأولى لدراسة آثار الإجهاد المزمن على سلوك خيار ذات الصلة بالجهد في الفئران الذكور21. أظهرت إحدى الدراسات السابقة لأول مرة تأثير الإجهاد الحاد على ضبط النفس على صنع القرار القائم على الجهد فيالفئران 22. في سلوكيات الاختيار المرتبطة بالجهد ، يختار الحيوان إما بذل الجهد للحصول على مكافأة عالية القيمة أو قبول مكافأة أقل قيمة متاحة بحرية أكبر. في البشر، والجهد والنفقات لمهمة المكافآت (EEfRT)، هي لعبة كمبيوتر وضعت لتكون مماثلة للمهام ذات الصلة بالجهد الاختيار في الفئران23. الاكتئاب يؤدي إلى استجابات غير مُتَفَسَّة في EEfRT (انخفاض احتمال اختيار المهام الصعبة للحصول على مكافآت عالية القيمة). لذلك ، مهام الاختيار ذات الصلة بالجهد في القوارض مثيرة للاهتمام بشكل خاص بسبب أهميتها الترجمية.

الإجهاد المزمن الهزيمة الاجتماعية (SDS) هي واحدة من أكثر تستخدم على نطاق واسع نماذج الإجهاد قبل الكلينيكي في الفئران الذكور. وهو بروتوكول لمدة 10 أيام حيث كبيرة، العدوانية متقاعد مربي CD-1 الذكور مهاجمة الفئران التجريبية، وعادة C57BL/6J، في 5 دقائق جلسات يومية24. وهذا ينتج نمط ظاهري سلوكي غير فعال قوي في مجموعة فرعية من الفئران التجريبية. يتم استخدام اختبار التفاعل الاجتماعي لتقسيم الفئران إلى مجموعات مرنة أو عرضة للإجهاد الهزيمة، وقد استخدمت العديد من الدراسات هذه الخاصية الفريدة من SDS للتحقيق في آليات الدائرة الجزيئية وال العصبية الكامنة تحت الاعتماد على الإجهاد والقابلية. هنا نحن وصف تفاصيل نموذج CORT وتنفيذه للمهمة السلوكية حاجز Y-maze. نناقش أيضا آثار SDS في المهمة حاجز Y-متاهة. وتستند المهمة حاجز Y-المتاهة على مهمة حاجز T-المتاهة، والتي تستخدم في المقام الأول في الفئران لقياس الدافع لإنفاق الجهد لمكافآت عالية أو منخفضة موجودة في ذراعي المتاهة8و9و25. وقد تم تنفيذ هذه المهمة أيضا لدراسة الاستجابة جهد في الفئران تدار الكافيين أو مضادات الدوبامين في الفئران26. يمكن القوارض إما إنفاق جهد أكبر من خلال تسلق الحواجز من ارتفاع متزايد تدريجيا في ذراع واحدة من المتاهة لقيمة مكافأة أعلى، وعادة 4 الكريات مكافأة، أو تنفق جهدا أقل بكثير في الذراع الأخرى من المتاهة لتلقي فقط 2 الكريات مكافأة9. 10 يوما نماذج الهزيمة الاجتماعية تنتج نمط ظاهري غير مُعَد قوي في الفئران المعرضة التي تستمر ما يقرب من 30 يوما، لذلك قمنا بتعديل مهمة حاجز Y-متاهة لتدريب الحيوانات واختبارها بسرعة أكبر من أجل إكمال جميع التجارب ضمن هذا الإطار الزمني30 يوما 24. لذلك ، هنا نحن أيضا بالتفصيل Y-متاهة بروتوكول المهمة السلوكية التي تحتوي على دورات تدريبية مكثفة وجلسات اختبار حاجز واحد لقياس الدافع لبذل الجهد من أجل مكافأة في الفئران المزمنة المعرضة للإجهاد.

لسوء الحظ، تم تطوير كل من الكورتيكوستيرون المزمن والإجهاد المزمن الهزيمة الاجتماعية في الفئران الذكور وأقل فعالية في الفئران الإناث. هذا هو إشكالية للغاية كما النساء أكثر عرضة من الرجال ليتم تشخيص اضطرابات المزاج مثل الاكتئاب1. وقد سمحت التعديلات ذكية لSDS الاستخدام في الفئران الإناث ولكن تتطلب عمليات جراحية صعبة أو جمع البول مملة26,27. وقد وصفنا مؤخراً تعديلاً بسيطاً على نموذج التنمية الاجتماعية، يسمى الإجهاد المزمن غير التمييزي للهزيمة الاجتماعية(CNSDS). CNSDS يسمح الطبقات عرضة ومرنة لكل من الفئران التجريبية الذكور والإناث28. تظهر الفئران المعرضة للإناث والذكور المعرضين لـ CNSDS زيادة تجنب الذراعين المفتوحين في متاهة مرتفعة بالإضافة إلى المركز في مجال مفتوح وزيادة الكمون في تناول الطعام في التغذية المثبطة للجدة. كما أن المركز الوطني للدفاع عن المرأة أكثر كفاءة من التعديلات الأخرى التي أدخلت على نظام الـ SDS، حيث يتم الجمع بين الجنسين في جلسات الهزيمة. وهذا يؤدي إلى زيادة في العائد من الفئران التجريبية دون زيادة مرتبطة في الوقت والجهد المطلوب لإكمال البروتوكول. لذلك، نختم هذه المخطوطة بعرض متعمق لهذا النموذج الإجهاد المزمن الذي تم تطويره مؤخرًا.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

وقد أجريت هذه التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية للعناية بالحيوان في المختبرات الوطنية للصحة ووافقت عليها لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للحيوانات في جامعة روتجرز.

1. الكورتيكوستيرون المزمن (CORT)

  1. تعيين الفئران عشوائيا لمجموعات العلاج. تقسيم عشوائيا الكبار الذكور C57BL/6J الفئران في المركبات وكورتيكوستيرون (CORT) المجموعات.
    1. منزل الفئران السيارة في أقفاص متميزة، وفئران CORT في الآخرين، كما يتم تسليم علاجها عن طريق زجاجة مياه القفص.
    2. تسمية بطاقات المياه الخاصة لوضعها في القفص الذي يخطر موظفي رعاية الحيوان أن زجاجات المياه تحتوي على حلول ضرورية للتجربة.
  2. جعل حل السيارة عن طريق حل 3.375 غرام من بيتا-cyclodextrin في 750 مل من ماء الصنبور في حجم 1 لتر برغي أعلى حاوية الزجاج.
    1. ملء زجاجة مياه قفص السيارة مع هذا الحل. تأكد من أن الزجاجة لا تسرب لقياس استهلاك السائل.
    2. تسمية الحاوية وتخزينها في درجة حرارة الغرفة على الرف في المختبر. استخدام حل السيارة لملء زجاجات قفص لمدة 1 أسبوع تقريبا.
    3. عبوات السيارات على مدار الأسبوع. زجاجات قفص إعادة تعبئة 1x-2x خلال الأسبوع حسب الضرورة. تغيير إلى زجاجة جديدة 1x في الأسبوع إما في بداية أو نهاية الأسبوع.
      ملاحظة: بعد أسبوع واحد، سوف تبدأ بيتا-cyclodextrin لمعطف داخل زجاجة المياه ويجعل الحل غائم.
    4. رصد كمية السائل المستهلكة مرتين في الأسبوع وسجل. تزن كل زجاجة من كل منها وسجل، والحرص على عدم تسرب أي سائل. إعادة ملء وإعادة كل زجاجة.
      ملاحظة: سوف قفص من 5 الفئران شرب 80-120 مل من السائل في 3-4 أيام.
  3. جعل حل CORT عن طريق أولا حل 3.375 غرام من بيتا-cyclodextrin في 750 مل من ماء الصنبور في حجم 1 L برغي أعلى حاوية الزجاج. ثم إضافة 26.25 ملغ من كورتيكوستيرون.
    1. سونيكات كورت الحل إلى حل CORT في الماء. وضع الحاوية في حمام المياه أنظف بالموجات فوق الصوتية. سونيكات في 40 كيلوهرتز لمدة 30 دقيقة تقريبا أو حتى يذوب كورتيكوستيرون والسائل يبدو واضحا.
      ملاحظة: المجانسات بالموجات فوق الصوتية (على غرار طرف) هي أيضا فعالة لحل CORT.
    2. ملء زجاجات المياه لجميع أقفاص CORT مع الحل. حاوية التسمية وتخزينها في درجة حرارة الغرفة على الرف في المختبر. يمكن استخدام حل CORT لملء زجاجات القفص لمدة أسبوع تقريبا.
      ملاحظة: استخدم زجاجات المياه الزجاجية أو الزجاجات البلاستيكية المبهمة، حيث أن CORT حساس للضوء.
    3. مراقبة كمية السائل المستهلكة مرتين في الأسبوع وسجل. تزن جميع المركبات و فئران CORT أسبوعيا لمقارنة السائل المستهلكة لوزن الفئران داخل كل قفص.
    4. لتحديد حجم السائل المستهلك (مل/ غرام/ يوم)، استخدم المعادلة التالية:
      (حجم القفص شرب في الماضي 3-4 أيام) / (متوسط وزن الجسم من الفئران في القفص) X عدد الأيام منذ السيارة أو زجاجة CORT قد تم إعادة ملء)
      ملاحظة: سوف تستهلك متوسط قفص من n = 5 ذكور بالغ C57BL/6J الفئران في المتوسط 0.25 - 0.30 ملغ / غرام / يوم, والتي عادة ما تبقى متسقة من خلال الإعلان libitum والغذاء المحرومين من الفترات الزمنية. هذه التركيزات تؤدي إلى جرعات تقريبية من 24 ملغ/ كغ/يوم بيتا-سيكلوديكسترين، و 9.5 ملغ/كغ/يوم كورت15،,16.
  4. الإجهاد الهزيمة الاجتماعية (SDS)
    1. استخدام معيار بروتوكولات الإجهاد الهزيمة الاجتماعية كما هو موضح في العمق في مكان آخر24,29.
  5. Y-المتاهة مهمة حاجز
    1. الحرمان من الطعام للمهمة حاجز Y-maze
      1. في اليوم التالي لإكمال اختبار التفاعل الاجتماعي ، تزن جميع الفئران التحكم والتجريبية. سيكون هذا وزن الجسم بالتغذية المجانية.
        ملاحظة: هنا، نستخدم "التحكم" و "التجريبية" للإشارة إلى كل من SDS التحكم وشاشات SDS التجريبية، وكذلك إلى المركبات والفئران التي تديرها CORT في نماذج SDS و CORT المعنية.
      2. للغذاء يحرم الفئران، فقط إزالة تشاو المختبر من الجانب C57BL/6J من كل قفص.
      3. تزن جميع الفئران، فضلا عن كمية من تشاو المختبر التي سيتم إعطاء يوميا، من أجل الحفاظ على وزن الجسم بشكل صحيح في حوالي 90٪ من الوزن المجاني التغذية خلال الاختبار.
        ملاحظة: كمية الطعام التي يتم تسليمها في القفص المنزلي لكل فأر أو فئران تعتمد على تقلب وزن الجسم وكمية الكريات الثواب المستهلكة في كل يوم من التدريب أو الاختبار في Y-المتاهة.
      4. إنشاء الألفة مع الكريات مكافأة. تفريغ مغرفة صغيرة من 20 ملغ من الحبوب القائمة على الحبوب الغذائية الكريات (بيو سيرف) في القفص المنزلي. وهذا سوف يؤسس بشكل مألوف مع الكريات ويحفز الفئران على استهلاكها في Y-المتاهة في دورات التدريب المعتادة والابتدائية.
  6. جهاز Y-متاهة
    1. بناء هيكل Y-المتاهة من الأبيض المبهم 3/16 "عرض Plexiglas، مع ثلاثة أذرع قياس 26 سم في الطول، 20 سم في الارتفاع، و 7 سم في العرض.
    2. استخدم المقسمات التي تنزلق بين الفتحات في متاهة Y للسماح للباحث بإغلاق مربع البداية حيث يتم وضع الفئران في البداية ، أو لاحتواء الماوس في الذراعين بمجرد اختيارهم ودخول الذراعين الأيسر أو الأيمن من Y-maze.
    3. إنشاء حواجز متعددة 10 و 15 و 20 سم طويل القامة Y-المتاهة من شبكة سلكية للجانب الرأسي، ومع Plexiglas في زاوية 45 درجة تقريبا على الجانب الزاوية الخلفية. وهذا يسمح للفئران C57BL/6J بالسيطرة على جانب شبكة الأسلاك العمودية لكل حاجز وتسلقه، ثم اجتياز جانب Plexiglas ذو الزاوية من الحاجز.
      1. أضف خطوات رقيقة على الجانب الزاوية للسماح بزيادة الجر.
  7. Y-المتاهة التعود
    1. يعتاد جميع أجهزة التحكم والفئران التجريبية إلى جهاز Y-المتاهة.
      1. في اليوم التالي للحرمان من الطعام، ضع عددًا كبيرًا من 20 ملغ من كريات الطعام القائمة على الحبوب (مثل Bio-Serv) في غطاء أنبوب طرد مركزي 50 مل ومكان عند أطراف كل ذراع من متاهة Y. هذه القبعات بمثابة أوعية غذائية صغيرة للفئران، والفئران سوف تتعلم بسهولة أكل الكريات الغذائية.
      2. ضع كل فأرة في مربع البداية في Y-maze مع مقسم مربع البداية في المكان.
      3. بعد بضع ثوان، وإزالة المقسم، مما يسمح لكل فأر لاستكشاف Y-المتاهة لمدة 15 دقيقة. هذا القدر من الوقت يسمح للماوس لاستكشاف كاف جميع الأسلحة من المتاهة، وإقامة الألفة مع الجهاز.
        ملاحظة: قد لا تستهلك بعض الفئران أي حبيبات الطعام في هذا اليوم الأول من التعود.
    2. في اليوم التالي، إكمال الثانية 15 دقيقة Y-المتاهة التعود باستخدام إجراء مماثل.
      1. لاحظ أي الفئران التي لم تؤكل أي الكريات. بالنسبة لهذه الفئران، تخلص من مغرفة صغيرة أخرى من الكريات في أقفاصها المنزلية.
  8. Y-المتاهة تدريب الاضطرار الاختيار
    1. قم بتعيين ذراع المكافأة العالية (HR) والمكافأة المنخفضة (LR) لكل فأرة.
      1. تعيين عشوائيا الفئران في كل من مجموعات التحكم والتجريبي الذراع اليسرى كذراع المكافأة العالية (HR) والذراع اليمنى كذراع المكافأة المنخفضة (LR)، أو العكس بالعكس. وهكذا، سوف تكون 4 الكريات المتاحة في كل محاكمة في اليسار، و ذراع الموارد البشرية، والكريات 2 المتاحة في الذراع الأيمن، LR، أو العكس.
      2. موازنة هذه الأسلحة LR و الموارد البشرية المعينة في كل من مجموعة التحكم والتجريب بحيث كان ما يقرب من نصف كل مجموعة الذراع اليسرى كذراع الموارد البشرية، ونصف الذراع الأيمن كذراع الموارد البشرية.
    2. محاكمات الاختيار القسري
      1. بعد 2 أيام من التعود Y-المتاهة، والفئران تبدأ 3 أيام من 10 تجارب من التدريب على الاختيار القسري.
      2. لكل محاكمة الاختيار القسري، ضع الماوس في مربع البداية، ثم قم بإزالة المقسم، مما يسمح للماوس 60 s بإدخال الذراع الأيسر أو الأيمن واستهلاك الكريات المتوفرة. لكل كتلة محاكمة الاختيار القسري قبالة الذراع المعاكس مع المقسم، مما اضطر الماوس لتحديد الذراع الأخرى. لمحاكمة اختيار الموارد البشرية القسري، منع الوصول إلى ذراع LR، أو العكس بالعكس.
      3. إزالة الماوس بعد المحاكمة وتجديد الكريات ذات الصلة التي تم تناولها.
      4. تجارب الاختيار القسري البديل لكل فأرة عبر كل يوم تدريب، بحيث تكمل الفئران 5 HR و 5 LR تجارب الاختيار القسري.
        ملاحظة: تجارب الاختيار القسري تدريب الفئران لربط ذراع واحدة مع مكافأة أعلى والآخر مع مكافأة أقل.
      5. وضع الماوس مرة أخرى في قفصها المنزل ومن ثم تشغيل ما لا يزيد عن 3-5 الفئران اللاحقة من أجل الحفاظ على فاصل 5 دقائق بينية لكل فأرة.
  9. Y-متاهة التدريب الاختيار الحر
    1. تجارب الاختيار الحر
      1. ابدأ كل جلسة اختيار حر مع جهازي HR وLR القسري الاختيار. وهكذا، سيكون الفئران قد شهدت إجبارهم على كل ذراع قبل البدء في 10 تجارب الاختيار الحر.
      2. ضع كل فأرة في مربع البداية وأزل المقسم. مرة واحدة وقد اختار الماوس ذراع واجتازها حتى النهاية حيث يقع الكأس التي تحتوي على الكريات، ووضع مفرق الذراع في مكان على هذا الجانب، وتأمين في الماوس حتى أنها قد استهلكت الكريات.
      3. إزالة الماوس مرة أخرى إلى قفص المنزل وتشغيل الفئران 3-5 اللاحقة المستخدمة في تلك الدورة للسماح فاصل بين 5 دقائق بين المحاكمات.
    2. تسجيل البيانات التالية: الكمون لاختيار ذراع، واختيار الذراع، والكمون للوصول إلى بيليه كوب.
      1. سجل الذي الذراع يدخل الماوس واجتياز كامل إلى الكأس بيليه. أيضا تسجيل الكمون لتحديد هذا الذراع والوصول إلى كوب بيليه.
      2. النظر في أي محاكمة حيث فشل الماوس لتحديد ذراع أو لا تستهلك جميع الكريات 4 أو 2 كتجربة حذف.
    3. 70% معيار الاختيار الحر
      1. سجل الذراع الذي يتم تحديده لجميع التجارب 10 الاختيار الحر يوميا.
      2. مرة واحدة وقد اختار الماوس ذراع الموارد البشرية على 7 من أصل 10 تجارب في يوم التدريب الاختيار الحر (معيار 70٪) ، تحريك الماوس على لجلسات اختبار الحاجز.
        ملاحظة: مواصلة التدريب الحر الاختيار حتى جميع الفئران تصل إلى 70% HR ذراع معيار لضمان كل من التمييز الكافي من الأسلحة الموارد البشرية وLR وأن الفئران تظهر تفضيل متساو لذراع الموارد البشرية.
  10. اختبار حاجز Y-maze
    1. 10 سم حاجز اختبار الدورة
      1. ضع حاجز 10 سم في منتصف الطريق أسفل ذراع الموارد البشرية في Y-المتاهة.
      2. ابدأ بالعديد من التجارب القسرية لكلا الذراعين. يمكن أن تتم مطالبة الفئران المقاومة لتسلق الحاجز بقطعة Plexiglas طويلة ورقيقة.
        ملاحظة: من خلال التجربة، نوصي بتجربتين على الأقل للاختيار القسري لكل من أذرع الموارد البشرية وHR في بداية كل جلسة على ارتفاع حاجز جديد. نوصي بتسجيل التجارب حيث يكون من الضروري مطالبة الماوس بتسلق الحاجز إذا كان ذلك ضروريًا. الفئران عموما تعلم تسلق أكثر من حاجز 10 سم، والتي ليست عالية جدا أنها لا تستطيع الوقوف ونرى أكثر من ذلك، في غضون 1-2 التجارب. يجب وضع الحاجز على الجانب الآخر للفئران ذات الذراع المتعارضة كذراع الموارد البشرية المعينة.
      3. ضع كل فأرة في مربع البداية، وقم بإزالة المقسم، واسمح للماوس باجتياز المتاهة وتحديد ذراع لـ 10 تجارب اختيار حر تحتوي على حاجز 10 سم في ذراع الموارد البشرية.
      4. إذا اختار الماوس الجانب الموارد البشرية، فإنه سوف يصعد فوق الحاجز من أجل الحصول على مكافأة أكبر، والكريات 4. خلاف ذلك، فإنه سيتم تحديد الذراع LR وببساطة اجتياز أرضية المتاهة للحصول على مكافأة أقل، 2 الكريات.
      5. سجل الذراع المختارة، والكمون لتحديد ذراع والوصول إلى كوب بيليه لجميع التجارب. وبالمثل تناوب 4-6 مجموع الفئران في كل دورة، للحفاظ على فاصل بين المحاكمات 5 دقائق.
        ملاحظة: رش 70٪ الإيثانول في Y-المتاهة ومسح الجافة باستمرار وبين كل فأرة.
    2. جلسة اختبار حاجز 15 سم
      1. في اليوم التالي أكمل جميع الخطوات المذكورة أعلاه (الخطوة 1.10.1)، ولكن مع حاجز 15 سم طويل القامة في ذراع الموارد البشرية.
    3. 20 سم حاجز اختبار الدورة
      1. في اليوم التالي أكمل جميع الخطوات المذكورة أعلاه (الخطوة 1.10.1)، ولكن مع حاجز طوله 20 سم في ذراع الموارد البشرية.
        ملاحظة: من التجربة، من خلال ارتفاع حاجز 20 سم فإن غالبية فئران SDS المعرضة للإصابة أو ماوس اختباري CORT (وحتى عدة فئران تحكم) ستحول استجاباتها إلى ذراع LR، حيث أنها غير متحمسة بما يكفي لتسلق حاجز طوله 20 سم. أيضا، قد تحتاج محولات Plexiglas إلى أن تستخدم من أجل منع الفئران من التسلق من أعلى هذا الحاجز على حواف الجدران Y-المتاهة. لا نوصي ببناء متاهة Y أطول ، حيث يصبح من الصعب على المجرب إعادة ملء الكريات في كل كوب وإزالة الفئران بعد كل تجربة.
    4. مكافأة جلسة اختبار التمييز
      1. لضمان كل من أجهزة التحكم والفئران التجريبية عرض كافية ومماثلة لرؤوس التمييز مكافأة، وإجراء جلسة اختبار التمييز.
      2. اتبع الخطوات المذكورة أعلاه (الخطوة 1.10.1) ولكن ضع حاجزًا 10 سم في ذراع LR. الآن، كلا الذراعين تحتوي على 10 سم الحواجز، وسوف الفئران بحاجة إلى تسلق إما للحصول على مكافأة بيليه 4 أو 2.
      3. تسجيل زمن الوصول واختيار الذراع لجميع التجارب العشر.
        ملاحظة: كما الفئران سوف تضطر إلى إنفاق نفس الجهد للحصول على أي مكافأة، يجب على الفئران تحديد ذراع الموارد البشرية في معظم التجارب. لفحص التأخّر لتحديد ذراع HR وLR، احسب زمن استجابة ذراع الموارد البشرية المتوسط و الكمون المتوسط لذراع LR لكل ماوس فردي. ثم قارن الكمون لتحديد كلا الذراعين باستخدام ANOVA مختلطة في اتجاهين ، مع SDS (التحكم ، SDS - المعرضة ، SDS - مرنة) كعامل بين الموضوعات ، والذراع (ذراع الموارد البشرية ، ذراع LR) كعامل داخل الموضوعات.

2- إجهاد الهزيمة الاجتماعية المزمن غير التمييزي

  1. شاشة للسلوك العدواني في فئران CD-1
    1. ضع أحد الذكور وأنثى واحدة الماوس C57BL/6J في قفص المنزل من كل CD-1 ل180 ق أو حتى 1 CD-1 يهاجم كلا الفئران. هذه الفئران C57BL6/J لا تحتاج إلى أن تكون ساذجة، ولن تستخدم في أي تجارب أخرى. خلال هذه المرحلة فحص المعتدي، لا cohouse C57BL/6J الفئران مع فئران CD-1.
      1. سجل زمن الوصول لمهاجمة كل من الفئران C57BL/6J لكل CD-1.
      2. حدد جميع المعتدين CD-1 التي تهاجم الفئران C57BL/6J الذكور والإناث في غضون 60 ثانية على دورات متتالية من مجموع 3 جلسات فحص. ويمكن استخدام البعض الآخر للإسكان المشترك في أقفاص المنزل.
        ملاحظة: هناك تحذير مهم من الهزيمة الاجتماعية هو وجود جرح نتيجة للاعتداء الجسدي. وينبغي فحص كل فأر في مراحل الفحص والتجريبي بحثا عن الجروح ومعالجته بمطهرات الكلورو-الهيكسين إذا كانت الآفات الجلدية الصغيرة موجودة. وينبغي إزالة أي فأرة بها جرح أكبر من 1 سم من التجربة.
  2. تعيين الفئران للسيطرة والمجموعات التجريبية.
    1. جمع جميع السذاجة الكبار الذكور والإناث C57BL/6J الفئران، فضلا عن فحص المتقاعدين الذكور CD-1 مربي، فضلا عن CD-1 الذكور لاستخدامها في السكن المشترك.
      1. تعيين عشوائيا الكبار الذكور والإناث C57BL/6J الفئران للسيطرة أو الظروف التجريبية. سيتم إقران كل ذكر وأنثى لجميع جلسات الهزيمة الاجتماعية في المجموعة التجريبية CNSDS. سيتناوب الذكور والإناث في مجموعة التحكم في الجهاز المركزي للإيدز كل يوم.
      2. تعيين CD-1 الذكور لاستخدامها في جلسات الهزيمة الاجتماعية أو أن يكون في مكان الإقامة المشترك مع الذكور والإناث التجريبية بعد كل دورة، والتي سوف تتناوب يوميا لكل زوج من C57BL/6J الفئران الذكور والإناث.
  3. الإجهاد المزمن غير التمييزي للهزيمة الاجتماعية (CNSDS)
    1. جلب جميع الفئران إلى غرفة هزيمة اجتماعية مخصصة، بما في ذلك جميع الذكور CD-1، CNSDS التحكم الذكور والإناث C57BL/6J الفئران، و CNSDS التجريبية الذكور والإناث C57BL/6J الفئران.
      1. محاذاة 4-6 أقفاص من الذكور CD-1 مع C57BL/6J الذكور والإناث مع أقفاص CD-1 في الجبهة وC57BL/6J أقفاص وراء.
      2. تشير مع علامات هوية قفص الذي يتم مهاجمة الماوس ومن ثم شارك في الإقامة مع التي CD-1 لضمان تنظيم جميع الفئران.
        ملاحظة: بعد تهيئة التجارب في اليوم الأول، يمكن تدوير الفئران لجلسات الهزيمة المتبقية 9 بحيث يتم تدوير كل زوج C57BL/6J من الذكور والإناث قفص واحد إلى اليسار لكل جلسة. وهذا يسمح لتفاعل جديد مع رواية CD-1s في كل دورة.
    2. إجراء المجموعة التجريبية CNSDS
      1. مكان واحد بالغ الذكور واحد بالغ أنثى الماوس C57BL/6J في قفص المنزل من كل ذكر المعتدي CD-1 لجلسة هزيمة اجتماعية 5 دقائق.
      2. سجل زمن الاستجابة وتواتر الهجوم لكل من الذكور والإناث الفئران C57BL/6J التجريبية.
      3. بعد 5 دقائق، إزالة الذكور C57BL/6J الماوس ووضع في قفص من مشترك في اسكن CD-1 ذكر، مفصولة واضحة، حاجز Plexiglas مثقبة. منفصلة مهاجمة CD-1 وأنثى C57BL/6J الماوس مع حاجز Plexiglas واضح مماثل ومثقوب. بديل ما إذا كان الذكور أو الإناث C57BL/6J الماوس هو موجود مع المعتدي CD-1 كل يوم.
        ملاحظة: بعد كل تفاعل يومي لمدة 5 دقائق سيتم تقييم كل فأرة للإصابات والجروح المعالجة إذا كان أقل من 1 سم. أي جرح أكبر من 1 سم سوف يؤدي إلى إزالة والقتل الرحيم الفوري للماوس. وهكذا، يتم إيواء الفئران التجريبية الذكور والإناث معا مع المعتدي CD-1 لمدة 5 أيام ومع رواية CD-1 لا تستخدم في دورة الهجوم لمدة 5 أيام المتبقية. تمنع حواجز Plexiglas الواضحة والمثقوبة التفاعل الجسدي ولكنها تسمح بالاتصال الحسي مع المعتدي CD-1 في الـ 24 ساعة بين الجلسات. يمكن إجراء مراحيض المهبل على جميع الفئران الإناث ما يقرب من 30 دقيقة بعد الهزيمة كل يوم كما هو موضح سابقا28.
    3. إجراء مجموعة التحكم في CNSDS
      1. وضع أنثى واحدة التحكم في قفص المنزل من واحد مراقبة الذكور C57BL/6J الماوس.
      2. بعد 5 دقائق ، منفصلة الفئران ووضع واضح ، مثقب Plexiglas المقسم بين الفئران.
      3. عودة الفئران إلى غرفة مستعمرة ومكان على رف منفصل كما CNSDS أقفاص تجريبية. في غرفة المستعمرة قمنا بتعيين رفوف حيث يتم إيواء الفئران المجهدة بشكل منفصل عن الفئران الأخرى في غرفة المستعمرة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن ينظر إلى آثار في الفئران غير وشدد إذا شهدوا العدوان يحدث، كما هو الحال في نماذج الهزيمة الاجتماعية بالوكالة30
      4. لاحظ أي هجوم أو سلوك متزايد أثناء كل تفاعل التحكم.
    4. سيتم إدخال الفئران السيطرة على الذكور والإناث إلى كونسفيك جديدة في الأيام اللاحقة كما هو الحال في مجموعات التقليدية الاجتماعية السيطرة على الإجهاد الهزيمة. إكمال 10 أيام متتالية من التحكم في CNSDS والجلسات التجريبية.
      1. بعد الانتهاء من 10و 10 النهائي التحكم أو دورة CNSDS التجريبية، شارك في منزل جميع الفئران والحفاظ على هذا السكن المشترك في جميع أنحاء جميع الاختبارات السلوكية. كل قفص سوف تتكون من 2 الفئران التي يتم فصلها على جانبي مقسم زجاج شبكي للسماح التعرض الحسي. يتم إيواء الفئران التحكم مع الفئران الأخرى السيطرة على الجنس الآخر، في حين أن الفئران التجريبية هي في مكان الإقامة المشترك مع الفئران التجريبية الجنس الآخر.
      2. كل أنثى التحكم C57BL/6J هو في مكان مشترك مع الذكور C57BL/6J التحكمth أنها تفاعلت مع في الدورة 10، مع واضحة، مقسم زجاج شبكي وضعت في القفص لفصل الفئران اثنين.
      3. ما يقرب من 24 ساعة بعد انتهاء الدورة الهزيمة النهائية تشغيل معيار اختبار التفاعل الاجتماعي لتحديد ما إذا كان CNSDS يقلل من السلوك الاجتماعي مع رواية CD-1 الماوس مقارنة مع السيطرة، وطبقة الفئران "مرنة" أو "عرضة" للإجهاد24،29.
    5. اختبار التحكم CNSDS والفئران التجريبية الذكور والإناث في السلوكيات الأخرى، بما في ذلك مهمة حاجز Y-متاهة، ووضعية مجموعة CNSDS في CNSDS مرنة و CNSDS-المجموعات المعرضة.
  4. اختبار التفاعل الاجتماعي
    1. الإعداد الأولي لاختبار التفاعل الاجتماعي
      1. بعد 24 ساعة من الدورة النهائية لهزيمة CNSDS ، إجراء اختبار التفاعل الاجتماعي.
      2. اتخاذ جميع الزوج يضم التحكم والفئران التجريبية، فضلا عن رواية CD-1 الذكور لا تستخدم في نموذج CNSDS، إلى غرفة سلوكية منفصلة لتشغيل اختبار التفاعل الاجتماعي.
      3. قم بإعداد غرفة ميدانية مفتوحة قياسية (75 سم × 75 سم) تحت كاميرا تسجيل متصلة ببرامج تتبع سلوكية (مثل EthoVision) تعمل على جهاز كمبيوتر مخصص.
      4. إعداد تجربة جديدة مع منطقة تفاعل اجتماعي 24 سم × 24 سم تحيط حاوية تفاعل (حاوية Plexiglas صغيرة مثقوبة قياس حوالي 10 سم × 10 سم × 10 سم) من شأنها أن تضم الرواية CD-1 على طول جدار واحد من الحقل المفتوح، في الثانية من 2 تجارب متتالية 2.5 دقيقة. وهكذا، منطقة التفاعل 7 سم تحيط الحاوية السكن رواية الماوس CD-1.
    2. تشغيل الماوس في اختبار التفاعل الاجتماعي
      1. ضع كل فأرة في زاوية بعيدة من الحقل المفتوح لتجربة 2.5 دقيقة مع عدم وجود CD-1 وبدء برنامج التسجيل.
        ملاحظة: ضع في الاعتبار أن حاوية التفاعل يجب أن توضع في وسط جدار واحد من الحقل المفتوح وتحتوي على ماوس CD-1 من أجل هذه التجربة الأولى.
      2. بعد 2.5 دقيقة، إزالة الماوس مرة أخرى إلى قفص المنزل. تنظيف الحقل المفتوح مع الإيثانول 70٪.
      3. وضع رواية CD-1 الذكور في مكعب Plexiglas مثقبة ثانية على طول منتصف جدار واحد من الحقل المفتوح.
      4. مرة أخرى، ضع الماوس في زاوية حقل مفتوح لتجربة ثانية 2.5 دقيقة، الآن مع القرص المضغوط-1 الحالي، وبدء برنامج تسجيل.
      5. إزالة الماوس ووضعها مرة أخرى في قفص المنزل. قم بإزالة القرص المضغوط-1 وضعه مرة أخرى في قفص المنزل. تنظيف الحقل المفتوح مع الإيثانول 70٪.
    3. تشغيل المتبقية CNSDS التحكم والفئران التجريبية وحساب نسبة التفاعل.
      1. كرر هذا الإجراء مع جميع الفئران الأخرى من أجل تحديد الوقت الذي يقضيه في منطقة التفاعل في كل من التجربة 1 و 2 التجريبية لكل تحكم CNSDS والماوس التجريبي.
      2. لحساب نسبة التفاعل، قارن الوقت الذي يقضيه في منطقة التفاعل الاجتماعي في التجربة 2 (CD-1 الحالي) مقابل في التجربة 1 (CD-1 غائبة)، باستخدام المعادلة التالية:
        نسبة التفاعل = (الوقت في منطقة التفاعل في التجربة 2)/(الوقت في منطقة التفاعل في التجربة 1)
    4. فئران طبقات بأنها "CNSDS مرنة" أو "CNSDS-عرضة". لدى الفئران المرنة نسبة تفاعل تبلغ > 1.0، في حين أن الفئران المعرضة للإصابة لديها نسبة تفاعل تبلغ <=1.0.
      1. في التدابير السلوكية اللاحقة مثل مهمة حاجز Y-maze أو اختبارات السلوك الأخرى ، تقسيم الباطن CNSDS الفئران التجريبية في هذه الأنماط الظاهرية مرنة CNSDS و CNSDS- عرضة.
      2. وهكذا، بالنسبة للإناث، يمكن إجراء AS في اتجاه واحد بين التحكم في الجهاز المركزي للرقابة، و CNSDS التجريبية- المرونة، و CNSDS المجموعات المعرضة للتجريبي، مع مقارنات ما بعد المخصصة لتحديد الاختلافات بين المجموعات عند الاقتضاء.
      3. بالنسبة لمقارنات الفرق بين الجنسين، إجراء ANOVAs في الاتجاهين مع الجهاز العصبي المركزي (التحكم، المرونة، التأثر) والجنس (ذكر، أنثى) كعوامل بين الموضوعات. استخدام مقارنات ما بعد المخصصة عند الاقتضاء.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تدار كورت المزمنة لمدة 4 أسابيع تليها Y-متاهة تدريب الحاجز والاختبار(الشكل 1A). في فوج منفصل، كان نموذج SDS لمدة 10 أيام يتبع بالمثل التدريب والاختبار في مهمة حاجز Y-maze(الشكل 1C)لتحديد تأثير نماذج الإجهاد المزمن هذه على سلوك الاختيار المرتبط بالجهد في الفئران الذكور. وDDS المزمنة على حد سواء انخفاض متوسط وزن الجسم مقارنة مع الفئران مركبة وشاشات التحكم SDS كما يحددها t-tests(الجدول 1). هذه الفئران تستهلك أيضا أقل يعني الرئيسية قفص تشاو مختبر طوال الاختبار(الجدول 1).

في مجموعة CORT ، ANOVA مختلطة مع CORT كعامل بين الموضوعات وأسبوع كما يشير عامل داخل الموضوعات إلى السيارة والفئران التي تديرها CORT تستهلك حجمًا مماثلًا من السائل عبر 4 أسابيع من العلاج بالإضافة إلى 3 أسابيع من اختبار السلوك (7 أسابيع المجموع) (الشكل 1B). في مجموعة SDS ، أكملت الذكور التحكم والتجريبية 10 أيام من بروتوكول SDS ، وتم تقييمها لقابلية لبروتوكول SDS باستخدام اختبار التفاعل الاجتماعي حيث تم مقارنة الوقت الذي يقضيه التفاعل مع رواية CD-1 ذكر بالوقت في منطقة التفاعل دون CD-1 الحالي24. وأشارت ANOVA ذات الاتجاه الواحد إلى أن SDS تنتج نمطًا ظاهريًا غير مُعَد في الفئران المعرضة (60٪) مقارنةً بفئران مرنة (40%) أو فئران التحكم غير المعرضة ل SDS (الشكل 1D). على وجه التحديد، تعرض الفئران القابلة للتأثر بـ SDS انخفاضًا في الوقت الذي يقضيه في منطقة التفاعل التي تحتوي على ماوس CD-1 جديد، بالمقارنة مع فئران الأقراص المرنة والمتحكمة في SDS.

ثم، قمنا بتدريب كل من CORT (فئران تجريبية وتحكم) و SDS (عرضة وتحكم) في مهمة حاجز Y-maze(الشكل 2A). قمنا بقياس عدد التجارب التي كانت تستهلكها الفئران التجريبية والتحكم في تسلق حاجز للحصول على مكافأة 4 بيليه ، مقابل اختيار الذراع الأخرى من Y-maze التي تحتوي على 2 كريات فقط ولكنها لم تظهر أي حاجز لتسلقه. بالنسبة لـ SDS ، ANOVA مختلطة في اتجاهين ، مع SDS (Control ، SDS -2 ، SDS -مرنة) كعامل بين الموضوعات ، والذراع (ذراع الموارد البشرية ، ذراع LR) حيث تم استخدام عامل داخل الموضوعات لفحص الاستجابة جهد في Y-maze. لـ CORT المزمن ، ANOVA المختلطة في اتجاهين ، مع إدارة CORT (السيارة ، CORT) كعامل بين الموضوعات ، والذراع (HR ، الذراع ، ذراع LR) كعامل داخل الموضوعات. وقد أنتج كل من CORT المزمن وSDS تحولاً في الاستجابة بجهد عندما ارتفع ارتفاع الحاجز إلى 15 سم وإلى 20 سم(الشكل 2B والشكل 2C). ولم يتغير أي منهما في الاستجابة عندما كان حاجز 10 سم فقط في ذراع الموارد البشرية. وعلاوة على ذلك، في جلسة تمييز مكافأة بعد الاختبار، استجابت جميع الفئران بالمثل لذراع الموارد البشرية عندما تم وضع حاجز 10 سم في كل من الأسلحة الموارد البشرية وLR. وأخيرا، ANOVAs في اتجاهين مع CORT أو SDS كعامل بين الموضوعات وHR أو LR الذراع كما داخل المواضيع عامل تكشف أن الموارد البشرية وLR ذراع الكمون مع حاجز 15 سم لم تتأثر إدارة CORT، وكان مشابها لكلا المجموعتين مع كل من LR وHR الأسلحة(الشكل 3). وهكذا، فإن CORT المزمن وDDS تحول بقوة الاستجابة جهد في مهمة حاجز Y-متاهة في الفئران الذكور.

الأهم من ذلك، إذا كانت CORT أو SDS المزمنة تضعف التعلم من مهمة حاجز Y-maze(الشكل 4)،فقد تفشل هذه الفئران في الوصول إلى معيار في دورات التدريب على الاختيار الحر، مما يؤثر على التفسير اللاحق لنتائج الحاجز. ولذلك، فإننا تظهر نتائج تمثيلية سلبية محتملة عرض هذا الاختلاف، وتقييمها باستخدام عينات منفصلة مستقلة t-الاختبارات (الشكل 4).

الإجراء CNSDS تنتج نمط ظاهري غير فعال قوي في كل من الذكور والإناث C57BL/6J الفئران عرضة(الشكل 5A). يتم استخدام مهمة التفاعل الاجتماعي لتقسيم الفئران إلى مرونة (38.3٪) وتأثر (61.7%) السكان(الشكل 5B)،والتي يمكن تقسيمها بشكل فرعي على الجنس (الذكور: 43.3٪ مرن، 56.7٪ عرضة؛ الإناث: 36.7٪ مرن، 63.3٪ عرضة)، باستخدام انوفا في اتجاه واحد بين التحكم في CNSDS، CNSDS التجريبية- مرنة، و CNSDS المجموعات المعرضة للتجريبي. في حين أن هذا النموذج المعدلة تنتج تأثيرات غير مشابهة غير مطبقة مثل SDS في السلوكيات تجنب28، فإنه لم يتم تنفيذه بعد في تركيبة مع المكافأة ذات الصلة الترجمية ، والتحفيز ذات الصلة الاختبارات السلوكية مثل المهمة حاجز Y-متاهة. من الضروري للدراسات المستقبلية لتقييم آثار الضغوطات مثل CNSDS على السلوكيات ذات الصلة ترجمة مثل مهمة حاجز Y-متاهة في كل من الذكور والإناث.

CORT المزمن مجموعه وزن الجسم (ز)   الغذاء اليومي المقدم (ز)  
    يعني Sem يعني Sem
السياره 26.3 0.75 2.8 0.086
كورت 22.4 0.58 2.4 0.065
الإجهاد الهزيمة الاجتماعية
التحكم 27.5 0.67 2.9 0.088
الحزب الديمقراطي الصربي 23.8 0.66 2.5 0.074

الجدول 1: وزن الجسم وكمية الأغذية المقدمة يومياً. تم وزن فئران المركبات والفئران التي تديرها CORT ، وكذلك فئران التحكم وSDS أسبوعيًا وتم تسجيل كمية من الطعام المعطى. يشار إلى متوسط وزن الجسم (ز) عبر اختبار Y-maze، ومتوسط الطعام اليومي (g) المعطى.

Figure 1
الشكل 1: يؤدي SDS إلى نمط ظاهري اكتئابي يتميز بتفاعل اجتماعي أقل.
(أ) تخطيطي يصور الجدول الزمني لبروتوكولات حاجز CORT وY-maze. (B) بيانات تمثيلية تظهر الحجم المستهلك (مل/ غرام/يوم) في المركبة والفئران التي تديرها CORT. (C) تخطيطي يصور الجدول الزمني لبروتوكولات حاجز SDS وY-maze. (D) في اختبار التفاعل الاجتماعي التمثيلي، تعرض فئران SDS المعرضة لتقليل الوقت الذي يقضيه التفاعل مع ماوس جديد مقارنة بماوس SDS مرنة أو فئران التحكم. الحانات هي متوسط ± SEM. * p < 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 2
الشكل 2: تحول CORT وDSS عن الاستجابة في مهمة حاجز Y-maze.
(أ)الجدول الزمني Y-متاهة مهمة حاجز لـ CORT و SDS. (ب)يقلل CORT المزمن من اختيار ذراع الموارد البشرية عند ارتفاعات حاجز 15 سم و20 سم. وقد تم تعديل هذا الرقم من Dieterich وآخرون 202021. (C) النتائج التمثيلية التي تثبت أن الفئران عرضة ل SDS تقلل من اختيار ذراع الموارد البشرية عند ارتفاعات حاجز 15 سم و 20 سم ، مقارنة بالفئران المتحكمة أو مرنة مع SDS. الحانات هي متوسط ± SEM. * p < 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 3
الشكل 3: لا يتأثر الكمون Y-متاهة بـ CORT المزمن.
لا يؤثر CORT المزمن على زمن الوصول لتحديد LR أو أذرع الموارد البشرية في Y-maze. أيضا، كل من المركبات و CORT الفئران تحديد LR أو ذراع الموارد البشرية مع الراحات مماثلة. وقد أعيد طبع هذا الرقم من ديتريش وآخرون 202021. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 4
الشكل 4: CORT المزمن وSDS يضعف حرية اختيار الذراع الموارد البشرية.
النتائج التمثيلية التي تبين أن الفئران التي تعرضت إما CORT المزمنة أو SDS تقلل من عدد من اختيارات الذراع مكافأة عالية مقارنة الفئران التحكم في التدريب الاختيار الحر، وتعقيد تفسير النتائج و / أو تأخير أو منع الانتقال إلى اختبار الحاجز. الحانات هي متوسط ± SEM. * p < 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 5
الشكل 5: تصنيف الفئران الذكور والإناث المعرضين للـ CNSDS إلى مجموعات سكانية سريعة التأثر ومرنة.
(أ) التخطيط للنموذج التجريبي والتحكمي في الجهاز العصبي المركزي. تمت إعادة طبع هذا الرقم من Yohn et al. 201928. (ب) ينتج المركز الوطني للطبقات والفئران الفئوية والفئوية والفئران الفئوية والفئوية (SUS) تصنيفاً قوياً للفئران التي تتمتع بالمرونة في الـ CNSDS(RESDS). تمت إعادة طبع هذا الرقم من Yohn et al. 201928. الحانات هي متوسط ± SEM. *p < 0.05، **p < 0.01، ***p < 0.001، ****p < 0.0001. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

في حين أن نموذج CORT المزمن يوفر جرعة ثابتة من CORT في مياه الشرب ، يمكن أن يكون هناك بعض التباين في الكمية التي تستهلكها الفئران. علاوة على ذلك ، لا يمكن تقييم الاستهلاك إلا القفص الكلي ، ومتوسط مأخوذ استنادًا إلى عدد الفئران في القفص. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يحدث الانسكاب عند وزن الزجاجات، نقل الفئران لاختبار السلوك، أو عند تغيير إلى قفص جديد. ومع ذلك، فإن تتبع استهلاك المركبات و CORT لا يزال ممكنا ودقيقا عبر أسابيع من العلاج واختبار السلوك. نحن ننصح بشدة بتغيير إلى زجاجة جديدة تحتوي على السيارة أو CORT مرة واحدة في الأسبوع، فضلا عن الحفاظ على أوقات محددة لوزن وتبادل الزجاجات. على سبيل المثال، يمكن أن يتم تغيير إلى زجاجات جديدة عند وزنها وإعادة ملء الزجاجات يوم الاثنين، ثم وزنها وإعادة ملء جميع الزجاجات مرة أخرى يوم الخميس أو الجمعة. وبالمثل ، فمن الأفضل أن تزن جميع الفئران في نفس الوقت في يوم معين كل أسبوع. وأخيراً، من المهم الإشارة إلى أن هذا النموذج الكورتي للحد من إنتاج داخلي من الكورتيكوستيرون من قبل محور HPA. وبالتالي، يجب أن تبقى الفئران على CORT طوال الاختبار السلوكي حتى يتم التضحية بها. إذا تم أخذ الفئران من CORT ، فقد يعانون من أزمة أديسونية من قصور الغدة الكظرية الحاد. وقد استخدمت إجراءات بديلة 2-3 أسبوع التعرض كورت، تليها تدريجيا الفمي قبالة CORT ومن ثم نافذة اختبار السلوك من حوالي 3-4 أسابيع كما مستويات CORT الذاتية العودة إلى17،,19.

في مهمة حاجز Y-maze ، من الأهمية بمكان البدء في التعود على المتاهة والتدريب مباشرة بعد بروتوكول SDS(الشكل 2A). ومن المحاذير المحتملة لهذا الجدول الزمني التجريبي هو أن الفئران يتم تدريبها بعد التلاعب وليس مسبقاً، حيث يمكن تقسيمها بالتساوي على أساس أداء التدريب. ومع ذلك ، في تجربتنا التدريب قبل مقابل بعد إدارة CORT لا تؤثر بشكل كبير على السلوك الآلي16. يتم تدريب جميع الفئران بدقة والوصول إلى معيار (> 70٪ اختيار الذراع الموارد البشرية في جلسات الاختيار الحر) قبل التقدم لاختبار الحاجز. يجب أن تكون الفئران أولاً معتادة بشكل صحيح على المتاهة ، بحيث تصبح جهازًا مألوفًا ، حيث وجدنا أن هذا يساعد في مرحلة التدريب اللاحقة. عند تدريب كل فأرة، من المهم الحفاظ على الأسلحة المكافأة العالية والمنخفضة المصممة لكل فأرة فردية، لذلك لا يجتاز الماوس ذراعاً تتوقع 4 كريات وإيجاد 2، أو العكس بالعكس. نوصي بالاحتفاظ بالنسخ الورقية والرقمية لملفات البيانات الخام الكبيرة التي تشير إلى أن أذرع المكافأة العالية والمنخفضة المكافئة لجميع فئران Control و SDS.

نحن لا نعتقد أن هناك فرقا في أداء المتاهة بسبب المواصفات الدقيقة لشكل المتاهة (Y-متاهة مقابل T-المتاهة)، ونعتقد أن الباحثين يمكن استخدام إما في التجارب السلوكية الاختيار ذات الصلة بالجهد. أيضا، لقد سبق أن أبلغنا عن زيادة طفيفة في اختيار ذراع الموارد البشرية في 15 سم مقارنة مع 10 سم في الفئران التي تديرها المركبات21. ومع ذلك، يجب أن يتوقع الباحثون مماثلة أو انخفاض اختيار الذراع الموارد البشرية كما يزيد ارتفاع الحاجز الماضي 15 سم، كما من قبل الفئران حاجز 20 سم نادرا ما تختار الذراع الموارد البشرية21.

بالإضافة إلى ذلك، من المهم استخدام 70% رذاذ الإيثانول لتنظيف المتاهة وإزالة الروائح المتبقية بعد كل دورة. نوصي أيضًا بتشغيل الفئران بطريقة متسقة حتى يكون هناك فاصل زمني ثابت نسبيًا بين المحاكمات لجميع الفئران. نقترح ركوب الدراجات ما يقرب من 4-6 الفئران في وقت، والتي ينبغي أن تعطي فاصل زمني من حوالي 5 دقائق. وأخيراً، في جلسة الاختيار الحر الأخيرة، وفي جميع جلسات اختبار الحواجز، من المهم تسجيل زمن الوصول لتحديد أي ذراع في جميع التجارب. أيضا، الفئران لا تدير أحيانا للقفز إلى أعلى الجدران Plexiglas، أو أكثر تواترا من أعلى الحواجز. نوصي أطول محولات جدار Plexiglas على طول جانبي المتاهة إذا حدث هذا. ويمكن أن تكون هذه مجرد قطع مستطيلة من Plexiglas (عرض 20 سم، وطول 80 سم). نحن بمناسبة أي محاكمة حيث فشل الماوس لتحديد ذراع في غضون 60 ثانية أو يختار ذراع ولكن لا يأكل الكريات الغذائية كتجربة حذف. وأخيرا، يمكن لكل من CORT المزمن وDSS تقليل وزن الجسم الذي يؤثر على كمية الطعام المستهلكة خلال أسابيع من الاختبار21. يجب على الباحثين وزن الفئران بانتظام وضبط كمية الطعام المعطاة في القفص المنزلي للحفاظ على الفئران في حوالي 90٪ من وزن الجسم الغذائي المجاني.

هنا نناقش أيضا نموذج وضعت مؤخرا، المزمنة غير التمييزية الإجهاد الهزيمة الاجتماعية (CNSDS) (الشكل 5A)، لتحفيز الإجهاد السكان عرضة والمرونة في الفئران الذكور والإناث(الشكل 5B). يمكن استخدام نموذج CNSDS من قبل الباحثين قبل الكلينيكي المهتمين باضطرابات الإجهاد أو المزاج. في نموذج CNSDS من المهم للغاية أن تتعرض الإناث التجريبية للهجوم مرة واحدة على الأقل في كل دورة. في تقريبا كلّ اجتماعيّة هزيمة دورات هاجمت ال [ا لّونتل ونور]. يجب فحص كل معتد CD-1 بدقة مع كل من الفئران C57BL/6J الذكور والإناث قبل بدء بروتوكول CNSDS، وكذلك تسجيل أي وجميع الهجمات في كل دورة. في حين أننا وصف شرط ازدواجية السيطرة على الجنس في منهجية CNSDS حيث واحد من الذكور وأنثى واحدة التفاعل، قد يكون من المناسب للبعض لتشمل الذكور إضافية لهذه التفاعلات السيطرة، وبالتالي محاكاة اثنين من الذكور وأنثى واحدة المستخدمة في الإجراء CNSDS. هذا الإجراء التحكم البديل لا يؤثر على سلوك الفئران في السلوكيات تجنب28. بالإضافة إلى ذلك، ينبغي تنفيذ اختبار التفاعل الاجتماعي بعد 24 ساعة من بروتوكول الهزيمة لمدة 10 أيام لضمان فعالية الأسلوب وطبقة الفئران الذكور والإناث إما مرنة أو عرضة ل CNSDS24.

مسألة واحدة في استخدام النهج التاريخي لتقسيم الفئران إلى مجموعات مرنة وعرضة على أساس اختبار التفاعل الاجتماعي هو أنه لا يمكن قياس جميع السلوكيات النفور بدقة باستخدام برامج تتبع الفيديو. "مرنة" الفئران مع درجة التفاعل > 1 قد يكون يدل على سلوك منقاد حول الحاوية السكن الماوس CD131. من المهم لهذا المجال لتطوير البرمجيات التي تتبع أفضل مثل هذه الميكروبات. أدوات مثل التحليل السلوكي البسيط (SimBA32)، الذي تم تطويره من قبل المختبر الذهبي للسماح للتصنيفات السلوكية للسلوكيات الاجتماعية المعقدة في القوارض ، قد تكون مفيدة في هذا الصدد.

قد يحدث بعض تصاعد أثناء بروتوكول CNSDS. في حين أننا لم نلاحظ أي حالات حمل في هذا النموذج، ينبغي للباحثين أن يكون على بينة من هذا الاحتمال.

وثمة قيد آخر على بروتوكولات الهزيمة الاجتماعية، بما في ذلك CNSDS، هو نافذة زمنية محدودة يقال للتحقيق في آثار الإجهاد على السلوك بعد الانتهاء من جلسات الهزيمة الاجتماعية. وهكذا، قمنا بتكييف بروتوكولات حاجز المتاهة الحالية لتناسب جميع جلسات التعود والتدريب والاختبار في إطار زمني مدته 30 يومًا. ومع ذلك ، قد يعجل هذا التدريب الشامل لبعض الفئران ، الذين قد يكافحون للوصول إلى معيار 70 ٪ لاختيار ذراع المكافأة العالية اللازمة لإكمال جلسات الاختيار الحر(الشكل 4). بالإضافة إلى ذلك، هناك أيام محدودة متاحة لإكمال أي اختبارات سلوكية أخرى دون التخطيط السليم. ومع ذلك، تشير الدراسات الحديثة إلى أن الإجهاد الهزيمة الاجتماعية يمكن أن تنتج المزيد من الآثار المستمرة على الدماغ والسلوك. تظهر الدراسات من مختبر Miczek أن 10 أيام من الإجهاد الهزيمة الاجتماعية يمكن أن تزيد من استهلاك الكحول الطوعي في الفئران تستمر على الأقل 4 أسابيع31,33. بروتوكولات الهزيمة الاجتماعية استخدام دورات الهزيمة التي تستمر في أي مكان من 5-10 دقائق. نحن نستخدم 5 دقائق التعرض ل CNSDS لتقليل احتمال وقوع إصابات في الفئران C57BL/6J التجريبية28. ينتج بروتوكول CNSDS نتائج مماثلة في الإناث إلى بروتوكول الهزيمة الاجتماعية التي وضعتها نيومان وزملاؤها ، والتي تتعرض فيها الفئران الإناث C57BL/6J إلى فئران ويبر السويسريةالمقيمة 28. على غرار CNSDS، يستخدم هذا الاختلاف من بروتوكول الهزيمة الاجتماعية 10 أيام من التفاعلات 5 دقيقة للحث على النمط الظاهري الإجهاد المزمن.

يمكن استخدام هذه الطرق لدراسة كيفية تأثير الإجهاد المزمن على معالجة المكافأة والتحفيز في الفئران. كل من معالجة المكافأة، والمواضيع الإناث، هي تاريخيا غير مدروسة في مجال اضطراب المزاج قبل الكلينيكي. وينبغي أن تحدد الدراسات المستقبلية تأثير الإجهاد المزمن على حافز مكافأة الذكور والإناث وطبقة المرونة ضد الفئران المعرضة للخطر(الشكل 5B). سيكون من القيمة معرفة ما إذا كان هذا التقسيم الطبقي ينتج تأثيرات مختلفة على أداء حاجز Y-maze كما رأينا في سلوكيات التجنب ، مثل الحقل المفتوح ، والمتاهة المرتفعة ، والتغذية المثبطة للجدة. يمكن أن تجمع الدراسات المستقبلية بين هذه المنهجيات وتقنيات أخرى، مثل تقنيات optogenetics أو تكنولوجيا DREADDS، لفحص الدوائر العصبية التي تتوسط في استجابة الإجهاد أو مكافأة الدافع.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgments

ويود المؤلفون أن يشكروا توماس غريس على بناء متاهات Y والحواجز وأقفاص الهزيمة الاجتماعية. ويود المؤلفون أن يشكروا جاي لي وكارينا شتيش وبراتشي سريفاستافا على المساعدة في جمع البيانات. تم تمويل هذا العمل من قبل NIMH Grant R01 MH112861 (BAS).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acrylic Sheet McMaster Carr 8560K215 Clear, 3/16" thick, 24" X 36"
Beta-cyclodextrin Sigma-Aldrich C4767 500 mg
C57BL/6J Mice Jackson Labs 000664 Adults age 7-8 weeks
Corticosterone Sigma-Aldrich C2505 or C27840 100 or 500 mg
Male CD-1 Mice Charles River 022 "Retired Breeders"
PVC Acrylic Sheet McMaster Carr 8560K215 White, 3/16" thick, 48" X 48"
Solidstate Ultrasonic Cleaner Fisher Scientific FS-28 Must reach 40 kHz
Steel Wire Cloth McMaster Carr 9219T143 1 ft X 2 ft

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kessler, R. C., et al. Lifetime and 12-month prevalence of DSM-III-R psychiatric disorders in the United States. Results from the National Comorbidity Survey. Arch Gen Psychiatry. 51 (1), 8-19 (1994).
  2. Breslau, N., Davis, G. C. Chronic stress and major depression. Archives of General Psychiatry. 43 (4), 309-314 (1986).
  3. Willner, P. Chronic mild stress (CMS) revisited: consistency and behavioural-neurobiological concordance in the effects of CMS. Neuropsychobiology. 52 (2), 90-110 (2005).
  4. Monleon, S., et al. Attenuation of sucrose consumption in mice by chronic mild stress and its restoration by imipramine. Psychopharmacology (Berl). 117 (4), 453-457 (1995).
  5. Willner, P., Towell, A., Sampson, D., Sophokleous, S., Muscat, R. Reduction of sucrose preference by chronic unpredictable mild stress, and its restoration by a tricyclic antidepressant. Psychopharmacology (Berl). 93 (3), 358-364 (1987).
  6. Berlin, I., Givry-Steiner, L., Lecrubier, Y., Puech, A. Measures of anhedonia and hedonic responses to sucrose in depressive and schizophrenic patients in comparison with healthy subjects. European psychiatry: the journal of the Association of European Psychiatrists. 13 (6), 303-309 (1998).
  7. Fawcett, J., Clark, D. C., Scheftner, W. A., Gibbons, R. D. Assessing Anhedonia in Psychiatric Patients: The Pleasure Scale. Archives of General Psychiatry. 40 (1), 79-84 (1983).
  8. Pardo, M., et al. Adenosine A2A receptor antagonism and genetic deletion attenuate the effects of dopamine D2 antagonism on effort-based decision making in mice. Neuropharmacology. 62 (5-6), 2068-2077 (2012).
  9. Salamone, J. D., Cousins, M. S., Bucher, S. Anhedonia or anergia? Effects of haloperidol and nucleus accumbens dopamine depletion on instrumental response selection in a T-maze cost/benefit procedure. Behav Brain Res. 65 (2), 221-229 (1994).
  10. Dienes, K. A., Hazel, N. A., Hammen, C. L. Cortisol secretion in depressed, and at-risk adults. Psychoneuroendocrinology. 38 (6), 927-940 (2013).
  11. Gotlib, I. H., Joormann, J., Minor, K. L., Hallmayer, J. HPA axis reactivity: a mechanism underlying the associations among 5-HTTLPR, stress, and depression. Biol Psychiatry. 63 (9), 847-851 (2008).
  12. Knorr, U., Vinberg, M., Kessing, L. V., Wetterslev, J. Salivary cortisol in depressed patients versus control persons: a systematic review and meta-analysis. Psychoneuroendocrinology. 35 (9), 1275-1286 (2010).
  13. Joels, M., Karst, H., Sarabdjitsingh, R. A. The stressed brain of humans and rodents. Acta Physiol (Oxf). 223 (2), 13066 (2018).
  14. Samuels, B. A., et al. Modeling treatment-resistant depression. Neuropharmacology. 61 (3), 408-413 (2011).
  15. David, D. J., et al. Neurogenesis-dependent and-independent effects of fluoxetine in an animal model of anxiety/depression. Neuron. 62 (4), 479-493 (2009).
  16. Dieterich, A., et al. Chronic corticosterone administration induces negative valence and impairs positive valence behaviors in mice. Translational psychiatry. 9 (1), 1-13 (2019).
  17. Gourley, S. L., Taylor, J. R. Recapitulation and reversal of a persistent depression-like syndrome in rodents. Current Protocols in Neuroscience. 49 (1), 31-39 (2009).
  18. Gourley, S. L., et al. Regionally specific regulation of ERK MAP kinase in a model of antidepressant-sensitive chronic depression. Biol Psychiatry. 63 (4), 353-359 (2008).
  19. Gourley, S. L., Wu, F. J., Taylor, J. R. Corticosterone regulates pERK1/2 map kinase in a chronic depression model. Annals of the New York Academy of Sciences. 1148 (1), 509-514 (2008).
  20. Mekiri, M., Gardier, A. M., David, D. J., Guilloux, J. P. Chronic corticosterone administration effects on behavioral emotionality in female c57bl6 mice. Experimental and clinical psychopharmacology. 25 (2), 94 (2017).
  21. Dieterich, A., et al. Chronic corticosterone shifts effort-related choice behavior in male mice. Psychopharmacology (Berl). , (2020).
  22. Shafiei, N., Gray, M., Viau, V., Floresco, S. B. Acute Stress Induces Selective Alterations in Cost/Benefit Decision-Making. Neuropsychopharmacology. 37 (10), 2194-2209 (2012).
  23. Treadway, M. T., Buckholtz, J. W., Schwartzman, A. N., Lambert, W. E., Zald, D. H. Worth the 'EEfRT'? The effort expenditure for rewards task as an objective measure of motivation and anhedonia. PLoS One. 4 (8), (2009).
  24. Golden, S. A., Covington, H. E., Berton, O., Russo, S. J. p. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nature protocols. 6 (8), 1183 (2011).
  25. Yohn, S. E., et al. The VMAT-2 inhibitor tetrabenazine alters effort-related decision making as measured by the T-maze barrier choice task: reversal with the adenosine A2A antagonist MSX-3 and the catecholamine uptake blocker bupropion. Psychopharmacology (Berl). 232 (7), 1313-1323 (2015).
  26. Harris, A. Z., et al. A novel method for chronic social defeat stress in female mice. Neuropsychopharmacology. 43 (6), 1276 (2018).
  27. Takahashi, A., et al. Establishment of a repeated social defeat stress model in female mice. Scientific Reports. 7 (1), 1-12 (2017).
  28. Yohn, C. N., et al. Chronic non-discriminatory social defeat is an effective chronic stress paradigm for both male and female mice. Neuropsychopharmacology. 44 (13), 2220-2229 (2019).
  29. Krishnan, V., et al. Molecular adaptations underlying susceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131 (2), 391-404 (2007).
  30. Iñiguez, S. D., et al. Vicarious Social Defeat Stress Induces Depression-Related Outcomes in Female Mice. Biol Psychiatry. 83 (1), 9-17 (2018).
  31. Newman, E. L., Leonard, M. Z., Arena, D. T., de Almeida, R. M., Miczek, K. A. Social defeat stress and escalation of cocaine and alcohol consumption: Focus on CRF. Neurobiology of Stress. 9, 151-165 (2018).
  32. Nilsson, S. R., et al. Simple Behavioral Analysis (SimBA) - an open source toolkit for computer classification of complex social behaviors in experimental animals. bioRxiv. , (2020).
  33. Newman, E. L., Leonard, M. Z., Arena, D. T., de Almeida, R. M. M., Miczek, K. A. Social defeat stress and escalation of cocaine and alcohol consumption: Focus on CRF. Neurobiology of Stress. 9, 151-165 (2018).

Tags

السلوك قضية 162 الاكتئاب الإجهاد المزمن خيار ذات الصلة بالجهد الإجهاد الهزيمة الاجتماعية كورتيكوستيرون اضطرابات المزاج مكافأة الاختلافات الجنسية
الإجهاد المزمن يتحول سلوك الاختيار ذات الصلة بالجهد في مهمة حاجز Y-Maze في الفئران
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dieterich, A., Yohn, C. N., Samuels, … More

Dieterich, A., Yohn, C. N., Samuels, B. A. Chronic Stress Shifts Effort-Related Choice Behavior in a Y-Maze Barrier Task in Mice. J. Vis. Exp. (162), e61548, doi:10.3791/61548 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter