Aqui, um protocolo para criar uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte é descrito. Este modelo de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto das doenças.
A córnea é fundamental para a visão, representando cerca de dois terços do poder refrativo do olho. Crucial para o papel da córnea na visão é a sua transparência. No entanto, devido à sua posição externa, a córnea é altamente suscetível a uma grande variedade de lesões que podem levar à perda de transparência corneal e eventual cegueira. A cicatrização eficiente da ferida corneal em resposta a essas lesões é fundamental para a manutenção da homeostase da córnea e preservação da transparência corneal e capacidades de refração. Em eventos de cicatrização comprometida da ferida córnea, a córnea torna-se vulnerável a infecções, ulcerações e cicatrizes. Dada a importância fundamental da cicatrização da ferida córnea para a preservação da transparência e visão da córnea, uma melhor compreensão do processo normal de cicatrização da ferida córnea é um pré-requisito para a compreensão da cicatrização prejudicada da ferida córnea associada à infecção e doença. Em direção a este objetivo, modelos de murina de woundarás córneas têm se mostrado úteis para promover nossa compreensão dos mecanismos de cura da ferida córnea que operam sob condições fisiológicas normais. Aqui, um protocolo para criar uma abrasão epitelial córnea central em rato usando uma trefina e um taco de golfe sem cortes é descrito. Neste modelo, uma trefina circular de 2 mm de diâmetro, centrada sobre a córnea, é usada para demarcar a área da ferida. O taco de golfe spud é usado com cuidado para debridar o epitélio e criar uma ferida circular sem danificar a membrana do porão epitelial da córnea. A resposta inflamatória resultante prossegue como uma cascata bem caracterizada de eventos celulares e moleculares que são críticos para a cicatrização eficiente das feridas. Este modelo simples de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e bem publicado e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto da doença.
A córnea é o anterior transparente um terço do olho. A córnea serve várias funções, incluindo proteger as estruturas internas do olho e formar uma barreira estrutural que protege o olho contra infecções1. Mais importante, a córnea é fundamental para a visão, fornecendo cerca de dois terços do poder refrativo do olho 2,3. Crucial para o papel da córnea na visão é a sua transparência. No entanto, devido à sua posição externa, a córnea é exposta a uma grande variedade de lesões no dia-a-dia que podem levar à interrupção de sua função de barreira, perda de transparência e eventual cegueira. A perda de transparência da córnea é uma das principais causas de deficiência visual em todo o mundo, 4,5. As abrasões corneais são um motivo comum para as visitas ao pronto-socorro (PS), respondendo por metade dos casos relacionados aos olhos apresentados no PS6. Estima-se que mais de 1 milhão de indivíduos sofra de lesões relacionadas aos olhos anualmente nos Estados Unidos7. A cura eficiente da ferida córnea em resposta a essas lesões é fundamental para manter a homeostase da córnea e a preservação de suas capacidades de transparência e refração. Em eventos de cicatrização comprometida da córnea, a córnea torna-se vulnerável a infecções, ulcerações e cicatrizesde 8,9. Além disso, a crescente popularidade das cirurgias refrativas coloca um desafio traumático único na córnea10. Dada a importância fundamental da cicatrização da ferida córnea para a preservação da transparência e visão da córnea, uma melhor compreensão do processo normal de cicatrização da ferida córnea é um pré-requisito para a compreensão da cicatrização prejudicada da ferida córnea associada à infecção e doença.
Para isso, foram desenvolvidos diversos modelos animais de cicatrização de feridas córneas, 11,12,13,14,15. Modelos de murina de cicatrização de feridas córneas têm se mostrado úteis para promover nossa compreensão dos mecanismos de cura da ferida córnea que operam sob condições fisiológicas normais. Diferentes tipos de feridas córneas têm sido empregados no estudo da cicatrização de feridas córneas, cada uma adequada para investigar diferentes aspectos do processo de cicatrização da ferida. Os modelos de feridas mais comuns usados em estudos de cicatrização de feridas córneas são os modelos mecânicos e químicos de feridas. As feridas córneas químicas, principalmente envolvendo a criação de queimaduras alcalinas na córnea, são úteis para o estudo de úlceras córneas, opificação e neovascularização13. As feridas mecânicas da córnea envolvem ferimentos de desbridamento (abrasão) e ferimentos de ceratectomia 14,15,16. Uma membrana de porão epitelial de córnea intacta ou rompida define feridas de debridamento e ceratectomia, respectivamente. Nas feridas de desbridamento, a membrana do porão epitelial permanece intacta, enquanto nas feridas da querotetomia, a membrana do porão é rompida com penetração principalmente no estroma anterior. As feridas de desbridamento são mais úteis para estudar a re-epitelialização, a proliferação de células epiteliais, a resposta imune e a regeneração nervosa após o ferimento na córnea. As feridas de ceratectomia, por outro lado, são mais úteis para estudar cicatrizes na córnea 14,15.
Aqui, um protocolo para criar uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte é descrito. Este modelo simples de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e bem publicado e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto da doença17.
O objetivo deste artigo de métodos era descrever um protocolo para a criação de uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte. Este modelo de murina tem sido usado para estudar inflamação córnea e sua contribuição para a cicatrização de feridas. Esse tipo de modelo pode ser usado para estudar mecanismos de cicatrização de feridas córneas em condições fisiológicas normais e em patologias 17,28,29,41,42.<sup class=…
The authors have nothing to disclose.
Financiamento: Apoiado por: NIH EY018239 (A.R.B., C.W.S., e R.E.R.), P30EY007551 (A.R.B.), e Sigma Xi Grant em Aid of Research (P.K.A.). O conteúdo é de responsabilidade exclusiva dos autores e não representa as opiniões oficiais dos Institutos Nacionais de Saúde, ou Sigma Xi.
Anti-CD31 antibody | BD Bioscience, Pharmingen | 550274 | |
Anti-CD41 antibody | BD Bioscience, Pharmingen | 553847 | |
Anti-Ly6G antibody | BD Bioscience, Pharmingen | 551459 | |
Bovine serum albumin (BSA) | ThermoFisher scientific | B14 | |
C57BL/6 mice | Jackson Laboratories | 664 | |
DAPI | Sigma Aldrich | D8417 | |
DeltaVision wide-field deconvolution fluorescence microscope | GE Life Sciences | ||
Dissecting microscope | Leica microsystems | ||
Electronic Toploading Balances (Weighing scale) | Fisher Scientific | ||
Ethanol | ThermoFisher scientific | T038181000CS | |
Golf-club spud | Stephens instruments | S2-1135 | |
Iris curve scissors | Fisher Scientific | 31212 | |
Isoflurane | Patterson veterinary | 07-893-1389 | |
Ketamine | Patterson veterinary | 07-890-8598 | |
Phospate buffered saline (PBS) | ThermoFisher scientific | AM9624 | |
Sodium fluorescein salt | Sigma Aldrich | 46970 | |
Surgical blade (scapel blade) | Fine Science tools | 10022-00 | |
Trephine | Integra Miltex | 33-31 | |
TritonX -100 | Fisher Scientific | 50-295-34 | |
Forcep | Fine Science tools | 11923-13 | |
Xylazine | Patterson veterinary | 07-808-1947 |