Prelievo di sangue della vena succlavia nei ratti coscienti
Summary
Qui presentiamo una combinazione di efficaci metodi di restrizione dei ratti e puntura della vena succlavia che consentono una raccolta di sangue rapida, sicura e ripetuta nei ratti senza anestesia.
Abstract
Esistono diversi metodi consolidati per ottenere campioni di sangue ripetuti dai ratti, con i metodi più comunemente impiegati che sono il campionamento della vena caudale laterale senza anestesia e il campionamento della vena giugulare con anestesia. Tuttavia, la maggior parte di questi metodi richiede assistenza e attrezzature anestetiche e talvolta pone difficoltà in termini di raccolta del sangue o di scarsa qualità dei campioni di sangue. Inoltre, questi metodi di raccolta del sangue consumano molto tempo e risorse umane quando è necessario un campionamento ripetuto del sangue per un gran numero di ratti. Questo studio presenta una tecnica per il campionamento ripetitivo del sangue in ratti non anestetizzati da parte di un singolo individuo esperto. Campioni di sangue altamente soddisfacenti possono essere ottenuti perforando la vena succlavia. Il metodo ha dimostrato un impressionante tasso di successo complessivo del 95%, con un tempo mediano di soli 2 minuti dalla contenzione del ratto al completamento della raccolta del sangue. Inoltre, l’esecuzione di prelievi di sangue consecutivi all’interno dell’intervallo designato non infligge alcun danno ai ratti. Questo metodo merita di essere promosso per la raccolta del sangue, soprattutto negli studi di farmacocinetica su larga scala.
Introduction
I ratti sono uno degli animali da esperimento più comuni e ci sono molti modi per ottenere campioni di sangue. Per gli esperimenti che prevedono un singolo prelievo di sangue nella fase conclusiva, è possibile ottenere una quantità sufficiente di sangue mediante puntura cardiaca o prelievo di sangue dell’aorta addominale1. Tuttavia, alcuni studi richiedono la raccolta ripetuta di sangue dai ratti per analisi del sangue o biochimiche di routine, specialmente negli studi di farmacocinetica e tossicologia, in cui è necessaria una raccolta ripetuta di sangue per determinare l’assorbimento, la distribuzione e il metabolismo dei farmaci2.
Attualmente, sebbene la raccolta del sangue della vena caudale sia il metodo più comune per il prelievo di sangue dai ratti, nonostante non richieda l’anestesia, questo metodo può essere impegnativo per raccolte ripetute e il volume di sangue raccolto è relativamente piccolo 3,4. Inoltre, sebbene il sangue possa essere raccolto dalle vene safene e del pene, la quantità di sangue ottenuta è limitata ed è necessaria l’anestesia 1,5. Inoltre, i campioni di sangue prelevati dal plesso venoso sottomandibolare, così come dalle vene sublinguali, giugulari e succlavia forniscono campioni di qualità superiore, ma in genere richiedono l’anestesia o l’assistenza di più individui 1,6,7,8,9. Infine, la raccolta di sangue del seno/canale retro-orbitale non solo richiede l’anestesia, ma può anche potenzialmente causare lesioni e stress ai ratti9.
La qualità dei campioni di sangue tipicamente ottenuti dalle vene principali è generalmente di altissimo livello1. Attualmente, alcuni studi hanno scoperto che il microcampionamento continuo attraverso la vena giugulare è un metodo molto adatto per la ricerca tossicologica nei ratti, sebbene questo metodo di solito richieda il cateterismo della vena giugulare 10,11,12. Pertanto, vale la pena esplorare come ottenere campioni di sangue di alta qualità secondo il principio delle 3R della ricerca sugli animali senza intervento chirurgico. L’obiettivo di questo studio era quello di presentare un metodo per estrarre in modo efficiente il sangue dalla vena succlavia nei ratti. Questa tecnica consente la rapida raccolta di campioni soddisfacenti attraverso una procedura da parte di una sola persona senza la necessità di anestesia.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sebbene la raccolta del sangue della vena caudale sia il metodo più comune per il prelievo ripetuto di sangue nei ratti, potrebbe essere influenzata dai farmaci anestetici e, a causa delle piccole dimensioni della vena caudale, la quantità di sangue che può essere raccolta in un singolo caso è limitata, portando a una maggiore durata della raccolta del sangue 4,5. Sebbene i sistemi di cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) e spettrometria di massa t…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo studio è stato sostenuto dal Cuiying Plan Project del Secondo Ospedale dell’Università di Lanzhou (Grant No. PR0121015) e il Laboratorio Chiave Provinciale del Gansu per la Ricerca sulle Malattie del Sistema Urinario (Grant No. 0412D2).
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
Riferimenti
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