Coleta de sangue da veia subclávia em ratos conscientes

Summary

Apresentamos aqui uma combinação de métodos eficazes de restrição em ratos e punção da veia subclávia que permitem a coleta de sangue rápida, segura e repetida em ratos sem anestesia.

Abstract

Existem vários métodos estabelecidos para a obtenção de repetidas amostras de sangue de ratos, sendo os métodos mais comumente empregados a amostragem da veia caudal lateral sem anestesia e a amostragem da veia jugular com anestesia. No entanto, a maioria desses métodos requer assistência e equipamentos anestésicos e, por vezes, apresentam dificuldades em termos de coleta de sangue ou da má qualidade das amostras de sangue. Além disso, esses métodos de coleta de sangue consomem tempo e recursos humanos significativos quando amostras repetidas de sangue são necessárias para um grande número de ratos. Este estudo apresenta uma técnica de coleta repetitiva de sangue em ratos não anestesiados por um único indivíduo proficiente . Amostras de sangue altamente satisfatórias podem ser obtidas puncionando a veia subclávia. O método demonstrou uma impressionante taxa de sucesso global de 95%, com um tempo mediano de apenas 2 min desde a contenção do rato até a conclusão da coleta de sangue. Além disso, a realização de coletas consecutivas de sangue dentro da faixa designada não causa nenhum dano aos ratos. Este método vale a pena promover para a coleta de sangue, especialmente em estudos farmacocinéticos em larga escala.

Introduction

Os ratos são um dos animais experimentais mais comuns, e existem muitas maneiras de obter amostras de sangue. Para experimentos que envolvam uma única coleta de sangue na fase final, uma quantidade suficiente de sangue pode ser obtida por punção cardíaca ou coleta de sangue da aorta abdominal¹. No entanto, alguns estudos requerem repetidas coletas de sangue de ratos para análises de rotina de sangue ou bioquímicas, especialmente em estudos farmacocinéticos e toxicológicos, onde coletas repetidas de sangue são necessárias para determinar a absorção, distribuição e metabolismo de drogas².

Atualmente, embora a coleta de sangue da veia caudal seja o método mais comum para coleta de sangue de ratos, apesar de não necessitar de anestesia, esse método pode ser desafiador para coletas repetidas, e o volume de sangue coletado é relativamente pequeno ^3,4. Além disso, embora o sangue possa ser coletado das veias safena e peniana, a quantidade de sangue obtida é limitada, sendo necessária anestesia ^1,5. Além disso, amostras de sangue coletadas do plexo venoso submandibular, bem como das veias sublingual, jugular e subclávia fornecem amostras de melhor qualidade, mas tipicamente requerem anestesia ou assistência de múltiplos indivíduos 1,6,7,8,9. Finalmente, a coleta de sangue do seio retro-orbital/canal não só necessita de anestesia, mas também pode potencialmente causar lesão e estresse aos ratos⁹.

A qualidade das amostras de sangue tipicamente obtidas das principais veias é geralmente do mais alto padrão¹. Atualmente, alguns estudos constataram que a microamostragem contínua através da veia jugular é um método muito adequado para pesquisa toxicológica em ratos, embora esse método geralmente necessite de cateterização da veia jugular10,11,12. Portanto, vale a pena explorar como obter amostras de sangue de alta qualidade de acordo com o princípio 3R da pesquisa animal sem intervenção cirúrgica. O objetivo deste estudo foi apresentar um método eficiente de extração de sangue da veia subclávia em ratos. Esta técnica permite a rápida coleta de amostras satisfatórias através de um procedimento unipessoal, sem a necessidade de anestesia.

Protocol

Este estudo seguiu as diretrizes descritas na 8ª edição do Guide for the Care and Use of Laboratory Animals13. A pesquisa recebeu aprovação do Comitê de Ética do Lanzhou University Second Hospital e foi documentada em conformidade com as diretrizes do ARRIVE 2.014. Doze ratos Wistar saudáveis (seis machos pesando 290-330 g e seis fêmeas pesando 250-280 g) com idades entre 12-16 semanas foram acomodados no Laboratório de Animais GLP da Universidade de Lanzhou por 3…

Representative Results

Espécimes de plasma de alta qualidade exibem uma tonalidade amarelo-pálida, clareza e transparência, desprovidos de qualquer coloração vermelha ou coagulação, como mostrado na Figura 2A. A Figura 2B mostra hemólise (lado esquerdo) ou coagulação (lado direito) como resultado de procedimentos inadequados, respectivamente. Ao longo de 96 sessões de coleta de sangue em 4 dias, os tempos médios de coleta única para os grupos A e …

Discussion

Embora a coleta de sangue da veia caudal seja o método mais comum para repetidas coletas de sangue em ratos, ela pode ser influenciada por drogas anestésicas e, devido ao pequeno tamanho da veia caudal, a quantidade de sangue que pode ser coletada em um único momento é limitada, levando a um maior tempo de coleta de sangue ^4,5. Embora sistemas de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) – espectrometria de massas em tandem (MS/MS) combinados com micr…

Materials

0.75% normal saline	Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.	——	Prepared heparin sodium solution
1 mL Pasteur pipette	Biosharp	BS-XG-01-NS	Blood collection
1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm)	Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.	0.45*12RWLB	Blood collection
1.5 mL Eppendorf tube	Biosharp	BS-15-M	Blood storage and collection
75% medical alcohol	Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.	——	Disinfection of rat blood collection site
Centrifuge tube holder	Biosharp	BS-05/15-SM60	——
Electronic scale	Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.	JE1002	Weigh
Heparin sodium injection	Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.	——	Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL
Low temperature centrifuge	HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd.	H1750R	Separation of serum