意識のあるラットにおける鎖骨下静脈採血
Summary
ここでは、麻酔なしでラットの迅速、安全、反復採血を可能にする効果的なラット制限法と鎖骨下静脈穿刺法の組み合わせを紹介します。
Abstract
ラットから繰り返し血液サンプルを取得するための確立された方法はいくつかあり、最も一般的に採用されている方法は、麻酔なしの側尾静脈サンプリングと麻酔による頸静脈サンプリングです。しかし、これらの方法のほとんどは、補助具や麻酔器具を必要とし、採血や血液サンプルの質の悪さという点で困難を伴うことがあります。さらに、これらの採血方法は、多数のラットに対して採血を繰り返す必要がある場合、多大な時間と人的資源を消費します。この研究は、麻酔をかけていないラットで、熟練した 1 人の個人で繰り返し採血する技術を提示します。鎖骨下静脈に穴を開けることで、非常に満足のいく血液サンプルを得ることができます。この方法は、ラットの拘束から採血完了までの時間の中央値で、95%という驚異的な全体的な成功率を示しました。また、指定範囲内で連続採血を行っても、ラットに害を及ぼすことはありません。この方法は、特に大規模な薬物動態研究において、採血のために推進する価値があります。
Introduction
ラットは最も一般的な実験動物の1つであり、血液サンプルを取得する方法はたくさんあります。最終段階での1回の採血を含む実験では、心臓穿刺または腹部大動脈採血によって十分な量の血液を得ることができます1。ただし、一部の研究では、特に薬物動態および毒物学の研究において、薬物の吸収、分布、および代謝を決定するために繰り返し採血する必要がある、定期的な血液分析または生化学的分析のためにラットからの繰り返しの採血が必要です2。
現在、ラットからの採血には尾静脈採血が最も一般的な方法であるが、麻酔を必要としないにもかかわらず、この方法は繰り返し採取が困難な場合があり、採取される血液の量は比較的少ない3,4。また、伏在静脈や陰茎静脈から採血はできるが、得られる血液の量は限られており、麻酔が必要である1,5。さらに、顎下静脈神経叢、舌下静脈、頸静脈、鎖骨下静脈から採取された血液サンプルは、より高品質のサンプルを提供しますが、通常、麻酔または複数の個人の支援が必要です1,6,7,8,9。最後に、眼窩後洞/運河採血は麻酔を必要とするだけでなく、ラットに傷害やストレスを与える可能性もある9。
通常、主要な静脈から得られる血液サンプルの品質は、一般的に最高水準です1。現在、いくつかの研究では、頸静脈を通る連続マイクロサンプリングがラットの毒物学的研究に非常に適した方法であることがわかりましたが、この方法は通常、頸静脈カテーテル検査を必要とします10,11,12。したがって、外科的介入なしに動物研究の3R原則に従って高品質の血液サンプルを取得する方法を探求する価値があります。本研究の目的は、ラットの鎖骨下静脈から効率的に血液を抽出する方法を提示することである。この技術により、麻酔を必要とせずに1人で満足のいくサンプルを迅速に採取することができます。
Protocol
Representative Results
Discussion
ラットでは、尾静脈採血が最も一般的な採血方法であるが、麻酔薬の影響を受ける可能性があり、尾静脈のサイズが小さいため、1回で採取できる血液量が限られ、採血期間が長くなります4,5。高速液体クロマトグラフィー(HPLC)-タンデム質量分析(MS/MS)システムとラット尾静脈のキャピラリーマイクロサンプリング(CMS)を組み合わせることで、ラット…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究は、蘭州大学第二病院の翠英計画プロジェクト(Grant No.PR0121015)および甘粛省泌尿器系疾患研究重点実験室(助成金番号0412D2)。
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
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