Muestreo de sangre de la vena subclavia en ratas conscientes
Summary
Aquí presentamos una combinación de métodos efectivos de restricción en ratas y punción de la vena subclavia que permiten la recolección de sangre rápida, segura y repetida en ratas sin anestesia.
Abstract
Existen varios métodos establecidos para obtener muestras de sangre repetidas de ratas, siendo los métodos más comúnmente empleados el muestreo de la vena lateral de la cola sin anestesia y el muestreo de la vena yugular con anestesia. Sin embargo, la mayoría de estos métodos requieren asistencia y equipo anestésico y, en ocasiones, plantean dificultades en cuanto a la extracción de sangre o la mala calidad de las muestras de sangre. Además, estos métodos de extracción de sangre consumen mucho tiempo y recursos humanos cuando se requiere la toma repetida de muestras de sangre para un gran número de ratas. Este estudio presenta una técnica para la toma repetitiva de muestras de sangre en ratas no anestesiadas por un solo individuo competente. Se pueden obtener muestras de sangre altamente satisfactorias mediante la punción de la vena subclavia. El método demostró una impresionante tasa de éxito general del 95%, con una mediana de tiempo de solo 2 minutos desde la sujeción de la rata hasta la finalización de la extracción de sangre. Además, realizar recolecciones de sangre consecutivas dentro del rango designado no inflige ningún daño a las ratas. Vale la pena promover este método para la recolección de sangre, especialmente en estudios farmacocinéticos a gran escala.
Introduction
Las ratas son uno de los animales de experimentación más comunes, y hay muchas formas de obtener muestras de sangre. En el caso de los experimentos que impliquen una sola extracción de sangre en la fase final, se puede obtener una cantidad suficiente de sangre mediante punción cardíaca o extracción de sangre de la aorta abdominal1. Sin embargo, algunos estudios requieren la recolección repetida de sangre de ratas para análisis de sangre o bioquímicos de rutina, especialmente en estudios de farmacocinética y toxicología, donde se requiere la recolección repetida de sangre para determinar la absorción, distribución y metabolismo de los medicamentos2.
En la actualidad, aunque la extracción de sangre en las venas de la cola es el método más común para la toma de muestras de sangre de ratas, a pesar de no requerir anestesia, este método puede ser un desafío para las recolecciones repetidas, y el volumen de sangre recolectado es relativamente pequeño 3,4. Además, aunque se puede recolectar sangre de las venas safena y del pene, la cantidad de sangre obtenida es limitada y se requiere anestesia 1,5. Además, las muestras de sangre recogidas del plexo venoso submandibular, así como de las venas sublingual, yugular y subclavia, proporcionan muestras de mayor calidad, pero suelen requerir anestesia o la asistencia de varios individuos 1,6,7,8,9. Por último, la extracción de sangre de los senos paranasales retroorbitarios no solo requiere anestesia, sino que también puede causar lesiones y estrés a las ratas9.
La calidad de las muestras de sangre que normalmente se obtienen de las venas principales es generalmente del másalto nivel. En la actualidad, algunos estudios han encontrado que la microtoma continua a través de la vena yugular es un método muy adecuado para la investigación toxicológica en ratas, aunque este método suele requerir el cateterismo de la vena yugular 10,11,12. Por lo tanto, vale la pena explorar cómo obtener muestras de sangre de alta calidad de acuerdo con el principio de las 3R de la investigación con animales sin intervención quirúrgica. El objetivo de este estudio fue presentar un método para extraer sangre de la vena subclavia de manera eficiente en ratas. Esta técnica permite la rápida recogida de muestras satisfactorias a través de un procedimiento de una sola persona sin necesidad de anestesia.
Protocol
Representative Results
Discussion
Aunque la extracción de sangre de la vena de la cola es el método más común para la toma repetida de muestras de sangre en ratas, podría estar influenciado por los fármacos anestésicos y, debido al pequeño tamaño de la vena de la cola, la cantidad de sangre que se puede recolectar en una sola instancia es limitada, lo que lleva a una mayor duración de la recolección de sangre 4,5. Aunque los sistemas de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudio fue apoyado por el Proyecto del Plan Cuiying del Segundo Hospital de la Universidad de Lanzhou (Subvención No. PR0121015) y el Laboratorio Provincial Clave de Investigación de Enfermedades del Sistema Urinario de Gansu (Subvención Nº 0412D2).
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
Riferimenti
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