Summary
Dit protocol beschrijft de analyse van residuen van bestrijdingsmiddelen in avocadovariëteiten met behulp van de Qu ick-Easy-Ch eap-E ffective-R ugged-S afe (QuEChERS) methode met ammoniumformiaat, gevolgd door gaschromatografie-tandem massaspectrometrie.
Abstract
Gaschromatografie (GC) tandem massaspectrometrie (MS/MS) is een vooraanstaand analytisch instrument dat op grote schaal wordt gebruikt voor de bewaking van residuen van bestrijdingsmiddelen in voedsel. Desalniettemin zijn deze methoden kwetsbaar voor matrixeffecten (ME's), die mogelijk van invloed kunnen zijn op nauwkeurige kwantificering, afhankelijk van de specifieke combinatie van analyt en matrix. Van de verschillende strategieën om ME's te verminderen, vertegenwoordigt matrix-gematchte kalibratie de overheersende aanpak in toepassingen voor residuen van bestrijdingsmiddelen vanwege de kosteneffectiviteit en eenvoudige implementatie. In deze studie werden in totaal 45 representatieve pesticiden geanalyseerd in drie verschillende variëteiten van avocado's (d.w.z. Criollo, Hass en Lorena) met behulp van de Qu ick-Easy-Ch eap-E ffective-R ugged-S afe (QuEChERS) methode met ammoniumformiaat en GC-MS/MS.
Voor dit doel werd 5 g van het avocadomonster geëxtraheerd met 10 ml acetonitril en vervolgens werd 2,5 g ammoniumformiaat toegevoegd om fasescheiding te induceren. Vervolgens onderging het supernatans een reinigingsproces via dispersieve vastefase-extractie met behulp van 150 mg watervrij MgSO4, 50 mg primair-secundair amine, 50 mg octadecylsilaan, 10 mg gegrafitiseerd roet en 60 mg sorptiemiddel op basis van zirkoniumoxide (Z-Sep+). De GC-MS/MS-analyse werd met succes uitgevoerd in minder dan 25 minuten. Er werden rigoureuze validatie-experimenten uitgevoerd om de prestaties van de methode te beoordelen. Uit het onderzoek van een matrix-afgestemde kalibratiecurve voor elke avocadovariëteit bleek dat de ME relatief consistent bleef en minder dan 20% (beschouwd als een zachte ME) voor de meeste combinaties van bestrijdingsmiddel en ras. Bovendien waren de kwantificeringsgrenzen van de methode voor alle drie de variëteiten lager dan 5 μg/kg. Ten slotte vielen de terugwinningswaarden voor de meeste pesticiden binnen het aanvaardbare bereik van 70-120%, met relatieve standaarddeviatiewaarden van minder dan 20%.
Introduction
In de chemische analyse kan het matrixeffect (ME) op verschillende manieren worden gedefinieerd, maar een algemeen aanvaarde algemene definitie is als volgt: het verwijst naar de verandering in het signaal, met name een verandering in de helling van de kalibratiecurve wanneer de monstermatrix of een deel ervan aanwezig is tijdens de analyse van een specifieke analyt. Als cruciaal aspect vereist ME grondig onderzoek tijdens het validatieproces van elke analytische methode, omdat het rechtstreeks van invloed is op de nauwkeurigheid van de kwantitatieve meting voor de doelanalyten1. Idealiter zou een voorbehandelingsprocedure van het monster selectief genoeg moeten zijn om te voorkomen dat er componenten uit de monstermatrix worden geëxtraheerd. Ondanks aanzienlijke inspanningen komen veel van deze matrixcomponenten in de meeste gevallen echter nog steeds in de definitieve bepalingssystemen terecht. Bijgevolg brengen dergelijke matrixcomponenten vaak de herstel- en precisiewaarden in gevaar, introduceren ze extra ruis en escaleren ze de totale kosten en arbeid die met de methode gemoeid zijn.
Bij gaschromatografie (GC) ontstaat ME door de aanwezigheid van actieve plaatsen binnen het GC-systeem, die via verschillende mechanismen interageren met de doelanalyten. Aan de ene kant blokkeren of maskeren de matrixbestanddelen deze actieve plaatsen die anders zouden interageren met de doelanalyten, wat resulteert in frequente signaalversterking2. Aan de andere kant kunnen actieve plaatsen die onbelemmerd blijven, piekresidu of afbraak van analyten veroorzaken als gevolg van sterke interacties, wat leidt tot een negatieve ME. Dit kan echter in bepaalde gevallen potentiële voordelen bieden2. Het is van cruciaal belang om te benadrukken dat het bereiken van volledige inertie in een GC-systeem buitengewoon uitdagend is, ondanks het gebruik van zeer inerte componenten en goed onderhoud. Bij continu gebruik wordt de accumulatie van matrixcomponenten in het GC-systeem meer uitgesproken, wat leidt tot een verhoogde ME. Tegenwoordig wordt algemeen erkend dat analyten die zuurstof, stikstof, fosfor, zwavel en soortgelijke elementen bevatten, een grotere ME vertonen omdat ze gemakkelijk interageren met deze actieve plaatsen. Omgekeerd ondergaan zeer stabiele verbindingen zoals koolwaterstoffen of organohalogenen dergelijke interacties niet en vertonen ze geen waarneembare ME tijdens analyse 2,3.
Over het algemeen kan ME niet volledig worden geëlimineerd, wat leidt tot de ontwikkeling van verschillende strategieën voor compensatie of correctie wanneer volledige verwijdering van matrixcomponenten niet haalbaar is. Onder deze strategieën is het gebruik van gedeutereerde interne standaarden (IS's), analytbeschermers, matrix-afgestemde kalibratie, de standaard additiemethode of de wijziging van injectietechnieken gedocumenteerd in de wetenschappelijke literatuur 1,2,4,5. In de richtsnoeren van SANTE/11312/2021 worden deze strategieën ook aanbevolen6.
Wat betreft de toepassing van matrix-gematchte kalibratie om ME's te compenseren, omvatten monstersequenties in praktijksituaties verschillende soorten voedsel of verschillende monsters van hetzelfde product. In dit geval wordt de veronderstelling gemaakt dat het gebruik van een monster van dezelfde grondstof ME in alle monsters effectief zal compenseren. Er is echter een gebrek aan voldoende studies in de bestaande literatuur die specifiek dit probleem onderzoeken7.
De bepaling van het multiresidugehalte van bestrijdingsmiddelen in matrices die een aanzienlijk percentage vet en pigmenten bevatten, vormt een uitdagende taak. De aanzienlijke hoeveelheid geco-geëxtraheerd materiaal kan de extractie-efficiëntie aanzienlijk beïnvloeden en de daaropvolgende chromatografische bepaling verstoren, waardoor de kolom, bron en detector mogelijk worden beschadigd en aanzienlijkeME's 8,9,10 kunnen ontstaan. Bijgevolg vereist de analyse van pesticiden op sporenniveaus in dergelijke matrices een aanzienlijke vermindering van matrixcomponenten vóór de analyse, terwijl hoge terugwinningswaarden worden gewaarborgd7. Het verkrijgen van hoge herstelwaarden is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat pesticidenanalyses betrouwbaar, nauwkeurig en in overeenstemming met de wettelijke normen blijven. Dit is van vitaal belang voor het waarborgen van voedselveiligheid, milieubescherming en geïnformeerde besluitvorming in de landbouw en aanverwante gebieden.
Avocado is een vrucht met een hoge commerciële waarde die wereldwijd in tropische en mediterrane klimaten wordt geteeld en op grote schaal wordt geconsumeerd, zowel in de regio's van herkomst als op de talrijke exportmarkten. Vanuit analytisch oogpunt is avocado een complexe matrix die een aanzienlijk aantal vetzuren bevat (d.w.z. oliezuur, palmitinezuur en linolzuur), vergelijkbaar met noten, een aanzienlijk pigmentgehalte, zoals in groene bladeren, evenals suikers en organische zuren, vergelijkbaar met die inander fruit. Vanwege de vettige aard moet speciale aandacht worden besteed aan het gebruik van een analytische analysemethode. Hoewel analyse van residuen van bestrijdingsmiddelen is uitgevoerd op avocado's met behulp van GC-MS in sommige gevallen 8,12,13,14,15,16,17,18,19,20, is dit relatief minder frequent geweest in vergelijking met andere matrices. In de meeste gevallen is een versie van de Qu ick-Easy-Ch eap-E ffective-R ugged-S afe (QuEChERS) methode toegepast 8,12,13,14,15,16,17,18. Geen van deze studies heeft de consistentie van ME's tussen verschillende avocadovariëteiten onderzocht.
Daarom was het doel van dit werk om de consistentie van ME's en herstelwaarden te bestuderen voor 45 representatieve pesticiden in verschillende variëteiten van avocado (d.w.z. Criollo, Hass en Lorena) met behulp van de QuEChERS-methode met ammoniumformiaat en GC-MS/MS. Voor zover wij weten, is dit de eerste keer dat dit type onderzoek is uitgevoerd op dergelijke vetmatrixmonsters.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Voorbereiding van de voorraad en werkoplossingen
NOTITIE: Om veiligheidsredenen is het raadzaam om gedurende het hele protocol nitrilhandschoenen, een laboratoriumjas en een veiligheidsbril te dragen.
- Bereid individuele voorraadoplossingen van elk van de 45 in de handel verkrijgbare pesticidennormen (zie materiaaltabel) in een dosis van ongeveer 1.000 mg/l in acetonitril in maatkolven van 10 ml.
- Combineer de bovenstaande individuele voorraadoplossingen om een bouillonoplossing van 400 mg/l in acetonitril te bereiden in een maatkolf van 25 ml.
OPMERKING: Deze gemengde oplossing zal worden gebruikt om de werkoplossingen voor te bereiden op herstel- en kalibratie-experimenten. - Bereid stockoplossingen van atrazine-d5 en trifenylfosfaat (TPP) in concentraties van respectievelijk 750 mg/l en 1,050 mg/l in acetonitril in maatkolven van 10 ml. Gebruik atrazine-d5 als een procedurele interne standaard (P-IS) en TPP als een interne injectiestandaard (I-IS).
OPMERKING: Het ideale scenario zou het gebruik van een isotopisch gelabelde interne standaard voor elke specifieke doelanalyt inhouden. - Bereid oplossingen voor het terugwinnen van voorraden in acetonitril met 0,05% (v/v) mierenzuur (om afbraak te voorkomen) in maatkolven van 10 ml om monsterequivalenten van 10, 100 en 400 μg/kg te verkrijgen voor de bestrijdingsmiddelen en 200 μg/kg voor de P-IS afzonderlijk. Bewaar deze oplossingen in amberkleurige glazen injectieflacons in het donker bij -20 °C.
- Bereid kalibratieoplossingen van de bestrijdingsmiddelen en P-IS samen in acetonitril met 0,05% (v/v) mierenzuur in maatkolven van 10 ml tot respectievelijk 5, 10, 25, 75, 200, 400 en 600 μg/kg en 200 ng/ng, en bewaar ze in amberkleurige glazen injectieflacons in het donker bij −20 °C.
OPMERKING: Dezelfde oplossingen kunnen tijdens het experimentele werk worden gebruikt, maar het is essentieel om ze onmiddellijk na elk gebruik onder de gespecificeerde omstandigheden op te slaan. - Bereid een mengsel van analytbeschermers met 100 g/l 3-ethoxy-1,2-propaandiol, 10 g/l L-gulonzuur γ-lacton, 10 g/l D-sorbitol en 5 g/l shikiminezuur in een verhouding van 4/1 (v/v) acetonitril tot water met 0,5% (v/v) mierenzuur.
OPMERKING: Dit mengsel van analytbeschermers moet vlak voor de injectie worden toegevoegd om ME te verzachten.
2. Monstername
- Verzamel monsters van drie avocadosoorten (bijv. Criollo, Hass en Lorena) die verkrijgbaar zijn in supermarkten. Zorg ervoor dat elk monster ongeveer 1 kg weegt, wat voldoende is voor het uitvoeren van alle daaropvolgende onderzoeken en in overeenstemming is met Richtlijn 2002/63/EG21.
OPMERKING: Biologische monsters werden bij voorkeur geselecteerd om de kans op de aanwezigheid van residuen van bestrijdingsmiddelen te minimaliseren. - Transporteer de verzamelde avocadomonsters naar het laboratorium en homogeniseer ze afzonderlijk zonder de pijp met behulp van een hakmolen (zie Materiaaltabel). Bewaar de gehomogeniseerde monsters tot de analyse in amberkleurige glazen recipiënten bij 4 °C.
OPMERKING: Dezelfde avocadomonsters zullen gedurende het hele onderzoek worden gebruikt. Daarom is het van cruciaal belang om ze onmiddellijk na elk gebruik onder de aangegeven omstandigheden te bewaren.
3. Monstervoorbereiding volgens de QuEChERS-methode met ammoniumformiaat
OPMERKING: Figuur 1 illustreert een schematische weergave van de QuEChERS-methode met ammoniumformiaat.
- Weeg 5 g van elk avocadomonster af in een centrifugebuisje van 50 ml (zie materiaaltabel).
- Voeg 50 μL van de P-IS-oplossing toe tot een concentratie van 200 μg/kg. Voeg voor de beoordeling van het herstel ook de in stap 1.4 bereide bestrijdingsmiddelenoplossingen toe tot concentraties van 10, 100 en 400 μg/kg (n = 5 elk).
- Draai de buis gedurende 30 s om een grondige integratie van de spike in het monster te garanderen.
- Voeg 10 ml acetonitril toe aan de centrifugebuis. Schud de tube op 70 tpm gedurende 5 minuten.
- Voeg 2,5 g ammoniumformiaat toe, schud de buis opnieuw op 70 tpm gedurende 5 minuten en centrifugeer deze vervolgens gedurende 5 minuten op 1.800 × g .
- Voeg 1 ml van het extract toe aan een centrifugebuis van 2 ml met 150 mg watervrij MgSO4, 50 mg primair-secundair amine (PSA), 50 mg octadecylsilaan (C18), 10 mg gegrafitiseerd roet (GCB) en 60 mg van een sorptiemiddel op basis van zirkoniumoxide Z-Sep+, voor zuivering met behulp van dispersieve-vaste-fase-extractie (d-SPE). Draai de buis gedurende 30 s en centrifugeer deze gedurende 5 minuten bij 1.800 × g .
- Breng 200 μl van het extract over in een injectieflacon met autosampler, voeg 20 μl van de in stap 1.6 bereide analytbeschermende oplossing toe en voeg 50 μl TPP-oplossing toe.
- Voer instrumentele analyse uit met behulp van een GC-MS/MS-systeem (zie hoofdstuk 4).
- Voer een matrix-afgestemde kalibratie uit volgens dezelfde procedure als hierboven beschreven, met behulp van blanco extracten, behalve tijdens de d-SPE-stap (stap 3.6), reinig 5 ml van het supernatans in buisjes van 15 ml. Voeg de spike- en P-IS-oplossingen toe bij stap 3.7. Voeg de kalibratiestandaardoplossingen toe aan de autosampler-flacons om 5, 10, 25, 50, 100, 200, 400 en 600 μg/kg te verkrijgen, samen met de TPP, wat resulteert in een eindvolume van 270 μl.
OPMERKING: Zorg er in het algemeen voor dat u matrix-afgestemde kalibratiecurven construeert voor elke avocadovariëteit plus de kalibraties met alleen acetonitril.
4. Instrumentele analyse met behulp van GC-MS/MS
- Voer de analyses uit met behulp van een GC-MS/MS-systeem met een drievoudige quadrupool (TQ) uitgerust met een elektronenionisatie-interface (-70 eV) en een autosampler (zie Materiaaltabel).
- Gebruik een MS GC-kolom (silicabinding van 30 m lengte, 0,25 mm binnendiameter, 0,25 μm filmdikte) samen met ultrazeer zuiver helium als draaggas met een constant debiet van 1,2 ml/min.
- Controleer de volgende parameters voordat u doorgaat met de werking van de apparatuur:
- Zorg ervoor dat de gasdruk correct is: helium bij 140 psi en argon bij 65 psi.
- Controleer de toestand van de olie van de roterende pomp om er zeker van te zijn dat deze helder en op het juiste niveau is.
- Zorg ervoor dat de injectiespuit geen obstructies heeft van eerdere injecties.
- Controleer of de wasflesjes voldoende volume van elk oplosmiddel bevatten.
- Controleer of de teller voor verbruiksartikelen (septum, voering) zijn limiet niet heeft bereikt.
- Zet de GC-hoofdschakelaar op het voorpaneel aan en zet de MS-schakelaar aan de achterkant aan.
- Open de GCMS Real Time Analysis-software die alle parameters van het GC-MS/MS-systeem bestuurt.
OPMERKING: Het instrumentensysteem bevat standaard de GCMS Real Time Analysis-software. - Klik op Vacuümregeling | Geavanceerd | Roterende pomp 1 om het vacuümsysteem te starten.
NOTITIE: Controleer in dit venster de druk om de optimale vacuümwaarden te bepalen, die lager moeten zijn dan 9.0 Pa. Het duurt ongeveer 12 uur. - Klik op Start om turbo moleculaire pomp 1 en turbo moleculaire pomp 2 in te schakelen.
- Klik op Start voor de optie Ion Source Heater .
NOTITIE: Controleer na een aanbevolen tijd van 1 uur het vacuüm van het systeem om te bevestigen dat de aanbevolen waarde lager is dan 1.6e-3 Pa. - Stel de temperatuur van de MS-interface in op 250 °C en de temperatuur van de ionenbron op 300 °C.
- Houd de GC-oven gedurende 1 minuut op een begintemperatuur van 50 °C en voer deze vervolgens op tot 180 °C met een snelheid van 25 °C/min. Verhoog vervolgens de temperatuur tot 230 °C bij 5 °C/min en vervolgens tot 290 °C bij 25 °C/min. Houd ten slotte de temperatuur gedurende 6 minuten constant op 290 °C. De totale analysetijd is 24,6 min.
- Klik op Sluiten zodra al deze systemen zijn ingeschakeld.
- Klik op de optie Tuning in de analysesoftware en klik op Peak Monitor View om een eerste verificatie van de omstandigheden van de massaspectrometer uit te voeren.
OPMERKING: Voer indien nodig autotuning uit. - Klik op Acquisitie en klik in het weergegeven venster op Initiële parameters downloaden. Controleer of de apparatuur klaar is voor GC en klaar MS.
5. Data-acquisitie
- Klik op Nieuw batchbestand in de software en maak een reeks met informatie zoals de naam van het monster, de voorbeeld-ID, het methodebestand, het gegevensbestand, het injectievolume en het afstemmingsbestand. Voeg indien nodig rijen toe en klik op Opslaan.
- Klik op Batch Start en laat het injectieproces beginnen.
- Voer de injectie uit bij 250 °C in de splitless-modus, waarbij een injectievolume van 1 μl wordt aangehouden. Open na 1 minuut na de injectie de splitsing.
OPMERKING: Zorg ervoor dat u tussen de injecties door de spuit van 10 μl reinigt met methanol, ethylacetaat en acetonitril, met behulp van een enkele spoeling met elk oplosmiddel. Alle injecties worden in drievoud uitgevoerd. - Analyseer de analyten met behulp van de meervoudige reactiebewakingsmodus (MRM), de standaardmodus die wordt gebruikt in MS/MS-systemen met een TQ.
OPMERKING: Tabel 1 geeft de retentietijden (in min) en de kwantificator- en kwalificatieovergangen voor de multiklasse pesticiden, P-IS en I-IS. De kwantitatieve analyse is gebaseerd op de verhouding tussen het piekgebied van het kwantificeringsion en het P-IS-ion. De I-IS wordt gebruikt voor de kwaliteitscontrole tijdens de injectie. Aanvullend bestand 1 bevat chromatogrammen voor alle 45 geanalyseerde bestrijdingsmiddelen. - Open de Postrun Analysis software voor data-analyse.
OPMERKING: Het instrumentensysteem bevat standaard de GCMS Postrun Analysis-software. - Klik op de injectie die u wilt analyseren, navigeer door de tabel met de analyten en selecteer de piek die van belang is.
- Klik op de piek of het interessegebied om het chromatogram te visualiseren. Bekijk de piekintegraties en voer indien nodig handmatige integratie uit. Controleer de gebieden van alle analyten om de nodige berekeningen en methode-evaluatie uit te voeren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Uitgebreide validatie van de analytische methode werd uitgevoerd volgens SANTE/11312/2021 richtlijnen6, die beoordelingen van lineariteit, ME, herstel en herhaalbaarheid omvatten.
Voor de lineariteitsbeoordeling werden matrix-afgestemde kalibratiecurven geconstrueerd met behulp van blanco monsters met spikes op meerdere concentratieniveaus (variërend van 5 tot 600 μg/kg). De bepalingscoëfficiënten (R2) voor de meeste van de geselecteerde bestrijdingsmiddelen bleken hoger dan of gelijk te zijn aan 0,99, wat wijst op een zeer lineair verband tussen concentratie en respons. Er werd gekozen voor het laagste kalibratieniveau (LCL) van 5 μg/kg, waarbij werd voldaan aan de vastgestelde maximumresidulimiet (MRL) van 10 μg/kg voor de monitoring van levensmiddelen22.
Om de ME te evalueren, werden de hellingen van de kalibratiecurves van de multiclass pesticiden vergeleken tussen puur oplosmiddel en matrix-afgestemde kalibratieomstandigheden. Als illustratief voorbeeld toont figuur 2 de vergelijking van de curven in het oplosmiddel en elk van de drie matrices voor carbofuran. De ME werd berekend met behulp van vergelijking (1)7, wat percentages oplevert die signaalversterking (positieve percentages) of signaalonderdrukking (negatieve percentages) aangeven.
Matrixeffect (%) = 
(1)
Het gepresenteerde ME-classificatiesysteem, gebaseerd op percentages, geeft inzicht in de impact van de matrix op de pesticidensignalen, wat helpt bij de interpretatie van analytische bevindingen. In alle gevallen werd voor carbofuran een positieve ME van meer dan 20% verkregen. De bevindingen van het genereren van matrix-gematchte kalibratiecurven toonden echter een relatief consistente ME van minder dan 20% (geclassificeerd als een zachte ME) voor de meeste combinaties van bestrijdingsmiddel en ras (zie tabel 2 en figuur 3).
Om de nauwkeurigheid en herhaalbaarheid van de analyse te evalueren, werden blanco monsters verrijkt met pesticiden op drie verschillende concentratieniveaus (10, 100 en 400 μg/kg; n = 5 voor elke concentratie). De resultaten in figuur 4 tonen het aantal pesticiden waarvan de gemiddelde herstelpercentages binnen het aanvaardbare bereik van 70-120% lagen voor elk type avocado. Bovendien bevat tabel 3 gedetailleerde gegevens voor alle verkregen specifieke waarden. Een aanzienlijk deel van de geteste pesticiden vertoonde herstelpercentages die binnen het specifieke bereik lagen, met relatieve standaarddeviatie (RSD)-waarden van minder dan 20%.
Figuur 1: Schematische weergave van de QuEChERS-methode met ammoniumformiaat dat wordt gebruikt voor de extractie van residuen van bestrijdingsmiddelen uit avocadomonsters. Afkortingen: QuEChERS = Qu ick-E asy-Cheap-E ffective-R ugged-S afe; IS = interne standaard; PSA = primair-secundair amine; GCB = gegrafitiseerd roet; QC = kwaliteitscontrole; GC-MS/MS = gaschromatografie-tandem massaspectrometrie. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Vergelijking van de kalibratiecurven in het oplosmiddel en de matrices voor carbofuran. Oplosmiddel: y = 0,0028x - 0,0054 en R2 = 0,9974; Criollo: y = 0,0050x + 0,0050, R2 = 0,9994 en ME = 80%; Hass: y = 0,0037x - 0,0109, R2 = 0,9977 en ME = 30%; Lorena: y = 0,0041x + 0,0053, R2 = 0,9998 en ME = 42%. Afkortingen: ME = matrixeffect; P-IS = procedurele interne standaard. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Aantal geselecteerde pesticiden gecategoriseerd op basis van hun respectieve ME-bereik voor avocadovariëteiten. De classificatie van ME is gebaseerd op drie categorieën: zacht (waarden tussen -20% en 20%), gemiddeld (waarden tussen -20% en -50% of tussen 20% en 50%) en sterk (waarden hoger dan 50% of lager dan -50%). Afkorting: ME = matrixeffect. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Aantal bestrijdingsmiddelen dat buiten en binnen het aanvaardbare herstelbereik valt, piekte op 10, 100 en 400 μg/kg (n = 15) in de drie avocadovariëteiten. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Tabel 1: Retentietijden, kwantificator- en kwalificatieovergangen gebruikt in GC-MS/MS-analyses van de geselecteerde pesticiden, samen met de P-IS en I-IS. Afkortingen: P-IS = procedurele interne standaard; I-IS = injectie interne standaard; GC-MS/MS = gaschromatografie-tandem massaspectrometrie; HCB = hexachloorbenzeen; α-HCH = alfa-hexachloorcyclohexaan; β-HCH = bèta-hexachloorcyclohexaan; 4,4'-DDD = 4,4'-dichloordifenyldichloorethaan; 4,4'-DDE = 4,4'-dichloordifenyldichloorethyleen; 4,4'-DDT = 4,4'-dichloordifenyltrichloorethaan; TPP = trifenylfosfaat; EPN = ethyl nitrofenyl fenylfosfofoforotioaat. Klik hier om deze tabel te downloaden.
Tabel 2: Matrixeffectwaarden (%) voor de geselecteerde pesticiden in verschillende avocadovariëteiten tijdens de validatie van de uiteindelijke analysemethode. Afkortingen: HCB = hexachloorbenzeen; α-HCH = alfa-hexachloorcyclohexaan; β-HCH = bèta-hexachloorcyclohexaan; 4,4'-DDD = 4,4'-dichloordifenyldichloorethaan; 4,4'-DDE = 4,4'-dichloordifenyldichloorethyleen; 4,4'-DDT = 4,4'-dichloordifenyltrichloorethaan; TPP = trifenylfosfaat; EPN = ethyl nitrofenyl fenylfosfofoforotioaat. Klik hier om deze tabel te downloaden.
Tabel 3: Herstelwaarden en de bijbehorende RSD's tussen haakjes (n = 5 op elk piekniveau), beide in %, voor de geselecteerde pesticiden in verschillende avocadovariëteiten tijdens de validatie van de uiteindelijke analysemethode. Afkortingen: RSD's = relatieve standaarddeviaties; HCB = hexachloorbenzeen; α-HCH = alfa-hexachloorcyclohexaan; β-HCH = bèta-hexachloorcyclohexaan; 4,4'-DDD = 4,4'-dichloordifenyldichloorethaan; 4,4'-DDE = 4,4'-dichloordifenyldichloorethyleen; 4,4'-DDT = 4,4'-dichloordifenyltrichloorethaan; TPP = trifenylfosfaat; EPN = ethyl nitrofenyl fenylfosfofoforotioaat. Klik hier om deze tabel te downloaden.
Aanvullend dossier 1: Massaspectrometrische spectra van alle bestrijdingsmiddelen. Afkortingen: HCB = hexachloorbenzeen; α-HCH = alfa-hexachloorcyclohexaan; β-HCH = bèta-hexachloorcyclohexaan; 4,4'-DDD = 4,4'-dichloordifenyldichloorethaan; 4,4'-DDE = 4,4'-dichloordifenyldichloorethyleen; 4,4'-DDT = 4,4'-dichloordifenyltrichloorethaan; EPN = ethyl nitrofenyl fenylfosfofoforotioaat. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De belangrijkste beperking in verband met matrix-afgestemde kalibratie komt voort uit het gebruik van blanco monsters als kalibratiestandaarden. Dit leidt tot een groter aantal monsters dat voor analyse moet worden verwerkt en een verhoogde injectie van matrixcomponenten in elke analytische sequentie, wat mogelijk leidt tot hogere onderhoudseisen aan het instrument. Desalniettemin is deze strategie geschikter dan standaard optelling, die een veel groter aantal te injecteren monsters zou genereren vanwege de noodzaak om voor elk monster een kalibratiecurve uit te voeren. Daarom is in beide gevallen het gebruik van monstervoorbereidingstechnieken vereist die een dergelijke co-extractie minimaliseren en toch kosteneffectief, snel en betrouwbaar blijven. In deze context heeft de QuEChERS-methode zijn nut bewezen bij het analyseren van residuen van bestrijdingsmiddelen in avocadomonsters 8,12,13,14,15,16,17,18. In geen van deze benaderingen is echter de toepassing van de QuEChERS-methode met ammoniumformiaat onderzocht. Deze keuze is bedoeld om de nadelen van het gebruik van magnesium- en natriumzouten in MS-analyse te verzachten 23,24,25,26,27. Zowel magnesium- als natriumzouten hebben een lage dampdruk die de neiging hebben om vaste afzettingen te vormen op oppervlakken in de MS-bron, wat mogelijk de prestaties van het instrument kan beïnvloeden. Hoewel dit fenomeen zich voordoet in vloeistofchromatografie (LC)-systemen, brengt het ook uitdagingen met zich mee in de context van GC, waar deze zich kunnen ophopen in de inlaatvoering, waardoor de voering vaker moet worden vervangen27. Om deze beperkingen te overwinnen en de compatibiliteit met MS-detectie te verbeteren, is de vervanging van deze zouten door zeer vluchtige alternatieven geïmplementeerd. Ammoniumzouten hebben de voorkeur omdat ze gemakkelijk kunnen worden verdampt en/of afgebroken, waardoor de nadelen worden overwonnen. Het huidige onderzoek is het eerste voorbeeld van het gebruik van de QuEChERS-methode waarbij ammoniumformiaat wordt gebruikt voor de analyse van residuen van bestrijdingsmiddelen in avocado's. Het extractieproces bestond met name uit het onderwerpen van het avocadomonster aan een extractiestap met acetonitril, waarbij 0,5 g ammoniumformiaat per gram monster werd toegevoegd om het zouten te vergemakkelijken (figuur 1).
Als tweede stap van de QuEChERS-methode is de dSPE-stap cruciaal omdat deze dient om ongewenste matrixcomponenten te verwijderen die mogelijk tot analytische interferenties kunnen leiden26. Het bereiken van een effectieve d-SPE-stap vereist echter vaak een combinatie van verschillende sorptiemiddelen om de diverse co-extractieven uit de monstermatrix aan te pakken. Bij avocado's kan deze stap watervrij MgSO4 omvatten om overtollig water te verwijderen en de verdeling van pesticiden te verbeteren, PSA om vetzuren, organische zuren en suikers te elimineren, C18 om de verwijdering van niet-polaire componenten te verbeteren, GCB voor het verwijderen van chlorofyl en zirkoniumdioxydematerialen zoals Z-Sep+ om grote hoeveelheden vet te elimineren 15,26,28. Vervolgens werden de avocado-extracten overgebracht naar centrifugebuisjes met specifieke hoeveelheden van elk sorptiemiddel: 150 mg watervrij MgSO4, 50 mg PSA, 50 mg C18, 10 mg GCB en 60 mg Z-Sep+ (Figuur 1).
Om het validatieproces met betrekking tot de extractie- en reinigingsstappen op gang te brengen, werden de kalibratiecurves grondig onderzocht. Dit omvatte het beoordelen van matrix-afgestemde kalibratiecurves voor elke combinatie van analyt/avocado-ras, naast kalibraties met alleen acetonitril (Figuur 2). In beide scenario's werd een eerder voorgesteld mengsel van analytbeschermers29, bestaande uit 3-ethoxy-1,2-propaandiol, L-gulonzuur γ-lacton, D-sorbitol en shikiminezuur, gebruikt. De evaluatie omvatte lineariteit over een concentratiebereik van 5 tot 600 μg/kg. De LCL van 5 μg/kg ligt onder de strenge MRL van 10 μg/kg zoals vastgesteld in de internationale regelgeving voor de analyse van residuen van bestrijdingsmiddelen in levensmiddelen22. Bovendien leverde de LCL van 5 μg/kg een signaal-ruisverhouding op van meer dan 10 voor alle geselecteerde multiclass pesticiden. Visuele inspectie van kalibratieplots werd ook uitgevoerd om de precisie van de hellingswaarden te verifiëren die werden gebruikt voor het berekenen van ME. De resultaten gaven aan dat de meeste van de geselecteerde pesticiden R2-waarden vertoonden die hoger waren dan of gelijk waren aan 0,99 over alle vier de kalibratiecurven voor elk van hen. De algehele beoordeling van de kalibratieresultaten toonde de nauwkeurigheid en geschiktheid van deze vergelijkingen aan voor nauwkeurige ME-berekeningen in elke avocadovariëteit.
De ME werd vastgesteld als zacht (ME ≤ 20%) voor de meeste pesticiden in elk van de drie onderzochte avocadovariëteiten (Tabel 2 en Figuur 3). In dit verband zijn drie belangrijke punten de moeite waard om te benadrukken. Ten eerste waren de uiteindelijke monsterextracten relatief schoon vanwege de effectiviteit van het geïmplementeerde monstervoorbereidingsprotocol, wat resulteerde in minimale interferenties. Ten tweede zijn ME's in GC-systemen onderhevig aan de invloeden die voortkomen uit interacties die plaatsvinden binnen de matrix en de interacties die plaatsvinden op actieve plaatsen binnen het systeem29. Het gebruikte mengsel van analytbeschermingsmiddelen bestreek bijna het hele spectrum van pesticiden. Pesticiden die vroeg elueerden (propoxur, dichloorvos, carbofuran en difenylamine), evenals die later elueerden (pyriproxyfen, fenvaleraat, esfenvaleraat en deltamethrin), vertoonden echter de hoogste en minder consistente ME-waarden. Ten derde is, rekening houdend met deze verschillen, besloten om de matrix-gematchte kalibratie van elk ras afzonderlijk te gebruiken voor het uitvoeren van het herstelonderzoek. Het is belangrijk op te merken dat het ene ras redelijk representatief kan zijn voor de andere rassen voor de overige bestrijdingsmiddelen.
De beoordeling van het herstel en de reproduceerbaarheid werden uitgevoerd bij drie verschillende concentratieniveaus (10, 100 en 400 μg/kg) in vijfvoud (n = 15). Om dit te bereiken, werden avocadomonsters aan het begin van de toepassing van de QuEChERS-methode gespiked. Het herstel werd berekend door de verhoudingen van het piekgebied van het bestrijdingsmiddel te vergelijken met de piek van de P-IS (atrazine-d5) verkregen uit matrix-gematchte kalibratie. Elk duplicaat werd in drievoud geïnjecteerd binnen dezelfde sequentie om consistentie te garanderen. Het gebruik van een isotopisch gelabelde IS maakt het mogelijk om mogelijke verliezen aan pesticiden tijdens het protocol te compenseren, terwijl ook rekening wordt gehouden met methodologische fouten en instrumentele variabiliteit. De resultaten toonden aan dat de meeste pesticiden voldeden aan de aanvaardbare criteria, met terugvorderingen variërend van 70 tot 120% en RSD van minder dan 20% bij elke piekniveau6 (figuur 4), wat de effectiviteit en herhaalbaarheid van de methode aangeeft. Bij bepaalde bestrijdingsmiddelen werd echter een herstel waargenomen dat buiten dit aanvaardbare bereik lag (tabel 3). Dit is het geval van hexachloorbenzeen (HCB), met een herstel in het bereik van 28-55% voor alle concentratieniveaus en matrices. Dit kan worden toegeschreven aan de vlakke moleculaire structuur van HCB, die leidt tot een sterke affiniteit met GCB, waardoor het wordt vastgehouden en de extractie-efficiëntie afneemt30. Ondanks de lagere terugvorderingen voor HCB en enkele andere gevallen, vertoonde de methode nog steeds een consistent en betrouwbaar herstel voor deze pesticiden, waarbij de RSD-waarden onder de aanbevolen limiet bleven.
Concluderend kan worden gesteld dat de analyse van residuen van bestrijdingsmiddelen in voedselmonsters op ME stuit, wat van invloed kan zijn op de nauwkeurigheid van GC-MS/MS. Matrix-matched kalibratie blijkt een eenvoudige en effectieve strategie te zijn om deze effecten te verminderen, zelfs in matrices zoals avocado's, die rijk zijn aan vetzuren en andere co-extractieve materialen zoals pigmenten. Door de toepassing van de QuEChERS-methode waarbij gebruik wordt gemaakt van ammoniumformiaat in combinatie met matrix-afgestemde kalibratie en analytbeschermingsmiddelen, wordt een zeer nauwkeurige kwantificering bereikt. Bijgevolg zorgt deze aanpak voor een betrouwbare en afdwingbare analyse van residuen van bestrijdingsmiddelen in avocadomonsters, waardoor het geschikt is voor regelgevende toepassingen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben geen belangenconflicten om bekend te maken.
Acknowledgments
We willen EAN University en de University of La Laguna bedanken.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-Ethoxy-1,2-propanediol | Sigma Aldrich | 260428-1G | |
| Acetonitrile | Merk | 1006652500 | |
| Ammonium formate | Sigma Aldrich | 156264-1KG | |
| AOAC 20i/s autosampler | Shimadzu | 221-723115-58 | |
| Automatic shaker MX-T6-PRO | SCILOGEX | 8.23222E+11 | |
| Balance | OHAUS | PA224 | |
| Centrifuge tubes, 15 mL | Nest | 601002 | |
| Centrifuge tubes, 2 mL | Eppendorf | 4610-1815 | |
| Centrifuge tubes, 50 mL | Nest | 602002 | |
| Centrifuge Z206A | MERMLE | 6019500118 | |
| Choper 2L | Oster | 2114111 | |
| Column SH-Rxi-5sil MS, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm | Shimadzu | 221-75954-30 | MS GC column |
| Dispensette 5-50 mL | BRAND | 4600361 | |
| DSC-18 | Sigma Aldrich | 52600-U | |
| D-Sorbitol | Sigma Aldrich | 240850-5G | |
| Ethyl acetate | Merk | 1313181212 | |
| GCMS-TQ8040 | Shimadzu | 211552 | |
| Graphitized carbon black | Sigma Aldrich | 57210-U | |
| Injection syringe | Shimadzu | LC2213461800 | |
| L-Gulonic acid γ-lactone | Sigma Aldrich | 310301-5G | |
| Linner splitless | Shimadzu | 221-4887-02 | |
| Magnesium sulfate anhydrus | Sigma Aldrich | M7506-2KG | |
| Methanol | Panreac | 131091.12.12 | |
| Milli-Q ultrapure (type 1) water | Millipore | F4H4783518 | |
| Pipette tips 10 - 100 µL | Biologix | 200010 | |
| Pipette tips 100 - 1000 µL | Brand | 541287 | |
| Pipette tips 20 - 200 µL | Brand | 732028 | |
| Pipettes Pasteur | NORMAX | 5426023 | |
| Pippette Transferpette S variabel 10 - 100 µL | BRAND | 704774 | |
| Pippette Transferpette S variabel 100 - 1000 µL | BRAND | 704780 | |
| Pippette Transferpette S variabel 20 - 200 µL | SCILOGEX | 7.12111E+11 | |
| Primary-secondary amine | Sigma Aldrich | 52738-U | |
| Shikimic acid | Sigma Aldrich | S5375-1G | |
| Syringe Filter PTFE/L 25 mm, 0.45 µm | NORMAX | FE2545I | |
| Triphenyl phosphate (QC) | Sigma Aldrich | 241288-50G | |
| Vials with fused-in insert | Sigma Aldrich | 29398-U | |
| Z-SEP+ | Sigma Aldrich | 55299-U | zirconium oxide-based sorbent |
| Pesticides | CAS registry number | ||
| 4,4´-DDD | Sigma Aldrich | 35486-250MG | 72-54-8 |
| 4,4´-DDE | Sigma Aldrich | 35487-100MG | 72-55-9 |
| 4,4´-DDT | Sigma Aldrich | 31041-100MG | 50-29-3 |
| Alachlor | Sigma Aldrich | 45316-250MG | 15972-60-8 |
| Aldrin | Sigma Aldrich | 36666-25MG | 309-00-2 |
| Atrazine | Sigma Aldrich | 45330-250MG-R | 1912-24-9 |
| Atrazine-d5 (IS) | Sigma Aldrich | 34053-10MG-R | 163165-75-1 |
| Buprofezin | Sigma Aldrich | 37886-100MG | 69327-76-0 |
| Carbofuran | Sigma Aldrich | 32056-250-MG | 1563-66-2 |
| Chlorpropham | Sigma Aldrich | 45393-250MG | 101-21-3 |
| Chlorpyrifos | Sigma Aldrich | 45395-100MG | 2921-88-2 |
| Chlorpyrifos-methyl | Sigma Aldrich | 45396-250MG | 5598-13-0 |
| Deltamethrin | Sigma Aldrich | 45423-250MG | 52918-63-5 |
| Dichloran | Sigma Aldrich | 45435-250MG | 99-30-9 |
| Dichlorvos | Sigma Aldrich | 45441-250MG | 62-73-7 |
| Dieldrin | Sigma Aldrich | 33491-100MG-R | 60-57-1 |
| Diphenylamine | Sigma Aldrich | 45456-250MG | 122-39--4 |
| Endosulfan A | Sigma Aldrich | 32015-250MG | 115-29-7 |
| Endrin | Sigma Aldrich | 32014-250MG | 72-20-8 |
| EPN | Sigma Aldrich | 36503-100MG | 2104-64-5 |
| Esfenvalerate | Sigma Aldrich | 46277-100MG | 66230-04-4 |
| Ethion | Sigma Aldrich | 45477-250MG | 563-12-2 |
| Fenamiphos | Sigma Aldrich | 45483-250MG | 22224-92-6 |
| Fenitrothion | Sigma Aldrich | 45487-250MG | 122-14-5 |
| Fenthion | Sigma Aldrich | 36552-250MG | 55-38-9 |
| Fenvalerate | Sigma Aldrich | 45495-250MG | 51630-58-1 |
| HCB | Sigma Aldrich | 45522-250MG | 118-74-1 |
| Iprodione | Sigma Aldrich | 36132-100MG | 36734-19-7 |
| Lindane | Sigma Aldrich | 45548-250MG | 58-89-9 |
| Malathion | Sigma Aldrich | 36143-100MG | 121-75-5 |
| Metalaxyl | Sigma Aldrich | 32012-100MG | 57837-19-1 |
| Methidathion | Sigma Aldrich | 36158-100MG | 950-37-8 |
| Myclobutanil | Sigma Aldrich | 34360-100MG | 88671-89-0 |
| Oxyfluorfen | Sigma Aldrich | 35031-100MG | 42874-03-3 |
| Parathion-methyl | Sigma Aldrich | 36187-100MG | 298-00-0 |
| Penconazol | Sigma Aldrich | 36189-100MG | 66246-88-6 |
| Pirimiphos-methyl | Sigma Aldrich | 32058-250MG | 29232-93-7 |
| Propiconazole | Sigma Aldrich | 45642-250MG | 60207-90-1 |
| Propoxur | Sigma Aldrich | 45644-250MG | 114-26-1 |
| Propyzamide | Sigma Aldrich | 45645-250MG | 23850-58-5 |
| Pyriproxifen | Sigma Aldrich | 34174-100MG | 95737-68-1 |
| Tolclofos-methyl | Sigma Aldrich | 31209-250MG | 5701804-9 |
| Triadimefon | Sigma Aldrich | 45693-250MG | 43121-43-3 |
| Triflumizole | Sigma Aldrich | 32611-100MG | 68694-11-1 |
| α-HCH | Sigma Aldrich | 33377-50MG | 319-86-8 |
| β-HCH | Sigma Aldrich | 33376-100MG | 319-85-7 |
References
- Raposo, F., Barceló, D. Challenges and strategies of matrix effects using chromatography-mass spectrometry: An overview from research versus regulatory viewpoints. Trends Analyt Chem. 134, 116068 (2021).
- Rahman, M. M., Abd El-Aty, A. M., Shim, J. H. Matrix enhancement effect: a blessing or a curse for gas chromatography?-A review. Anal Chim Acta. 801, 14-21 (2013).
- Poole, C. F. Matrix-induced response enhancement in pesticide residue analysis by gas chromatography. J Chromatogr A. 1158 (1-2), 241-250 (2007).
- Anastassiades, M., Maštovská, K., Lehotay, S. J. Evaluation of analyte protectants to improve gas chromatographic analysis of pesticides. J Chromatogr A. 1015 (1-2), 163-184 (2003).
- Trufelli, H., Palma, P., Famiglini, G., Cappiello, A. An overview of matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry. Mass Spectrom Reviews. 30 (3), 491-509 (2011).
- European Commission SANTE/11312/2021. Guidance document on analytical quality control and method validation procedures for pesticide residues analysis in food and feed. European Commission. , (2021).
- Kwon, H., Lehotay, S. J., Geis-Asteggiante, L. Variability of matrix effects in liquid and gas chromatography-mass spectrometry analysis of pesticide residues after QuEChERS sample preparation of different food crops. J Chromatogr A. 1270, 235-245 (2012).
- Lehotay, S. J., Maštovská, K., Yun, S. J. Evaluation of two fast and easy methods for pesticide residue analysis in fatty food matrixes. J AOAC Int. 88 (2), 630-638 (2005).
- González-Curbelo, M. Á, González-Sálamo, J., Varela-Martínez, D. A., Hernández-Borges, J. Analysis of pesticide residues in pollen and dairy products. Sustainable Agriculture Reviews 47. 47, Cham: Springer International Publishing. 47-89 (2020).
- Madej, K., Kalenik, T. K., Piekoszewski, W. Sample preparation and determination of pesticides in fat-containing foods. Food Chem. 269, 527-541 (2018).
- Yanty, N. A. M., Marikkar, J. M. N., Long, K. Effect of varietal differences on composition and thermal characteristics of avocado oil. J Am Oil Chem Soc. 88, 1997-2003 (2011).
- Pano-Farias, N. S., Ceballos-Magaña, S. G., Muniz-Valencia, R., Gonzalez, J. Validation and assessment of matrix effect and uncertainty of a gas chromatography coupled to mass spectrometry method for pesticides in papaya and avocado samples. J Food Drug Anal. 25 (3), 501-509 (2017).
- Pano-Farias, N. S., Ceballos-Magaña, S. G., Jurado, J. M., Aguayo-Villarreal, I. A., Muñiz-Valencia, R. Analytical method for pesticides in avocado and papaya by means of ultra-high performance liquid chromatography coupled to a triple quadrupole mass detector: Validation and uncertainty assessment. J Food Sci. 83 (8), 2265-2272 (2018).
- Pano-Farias, N. S., Ceballos-Magaña, S. G., Gonzalez, J., Jurado, J. M., Muñiz-Valencia, R. Supercritical fluid chromatography with photodiode array detection for pesticide analysis in papaya and avocado samples. J Sep Sci. 38 (7), 1240-1247 (2015).
- Lozano, A., Rajski, Ł, Uclés, S., Belmonte-Valles, N., Mezcua, M., Fernández-Alba, A. R. Evaluation of zirconium dioxide-based sorbents to decrease the matrix effect in avocado and almond multiresidue pesticide analysis followed by gas chromatography tandem mass spectrometry. Talanta. 118, 68-83 (2014).
- Han, L., Matarrita, J., Sapozhnikova, Y., Lehotay, S. J. Evaluation of a recent product to remove lipids and other matrix co-extractives in the analysis of pesticide residues and environmental contaminants in foods. J Chromatogr A. 1449, 17-29 (2016).
- Chamkasem, N., Ollis, L. W., Harmon, T., Lee, S., Mercer, G. Analysis of 136 pesticides in avocado using a modified QuEChERS method with LC-MS/MS and GC-MS/MS. J Agric Food Chem. 61 (10), 2315-2329 (2013).
- Rajski, Ł, Lozano, A., Uclés, A., Ferrer, C., Fernández-Alba, A. R. Determination of pesticide residues in high oil vegetal commodities by using various multi-residue methods and clean-ups followed by liquid chromatography tandem mass spectrometry. J Chromatogr A. 1304, 109-120 (2013).
- Hernández-Borges, J., Ravelo-Pérez, L. M., Hernández-Suárez, E. M., Carnero, A., Rodríguez-Delgado, M. Á Analysis of abamectin residues in avocados by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. J Chromatogr A. 1165 (1-2), 52-57 (2007).
- Moreno, J. F., Liébanas, F. A., Frenich, A. G., Vidal, J. M. Evaluation of different sample treatments for determining pesticide residues in fat vegetable matrices like avocado by low-pressure gas chromatography-tandem mass spectrometry. J Chromatogr A. 1111 (1), 97-105 (2006).
- Commission Directive 2002/63/EC of 11 July 2002 establishing Community methods of sampling for the official control of pesticide residues in and on products of plant and animal origin and repealing Directive 79/700/EEC. Official Journal of the European Union. L187, 30-43 (2002).
- European Regulation, 396/2005, Regulation (EC) NO 396/2005 of the European Parliament and of the Council of 23 February 2005 on maximum residue levels of pesticides in or on food and feed of plant and animal origin and amending Council Directive 91/414/EEC. Official Journal of the European Union. L70, 1-16 (2005).
- González-Curbelo, M. Á, Lehotay, S. J., Hernández-Borges, J. Validation of a modified QuEChERS version for high-throughput analysis of a wide range of pesticides in foods. Abstracts of Papers of the American Chemical Society. 246, American Chemical Society. Washington D.C., USA. (2013).
- González-Curbelo, M. Á, Lehotay, S. J., Hernández-Borges, J., Rodríguez Delgado, J. Ammonium formate buffer in QuEChERS for high throughput analysis of pesticides in food by fast, low-pressure GC-MS/MS and LC-MS/MS. Abstracts of Papers of the American Chemical Society. 248, American Chemical Society. Washington D.C., USA. (2014).
- González-Curbelo, M. Á, Lehotay, S. J., Hernández-Borges, J., Rodríguez-Delgado, M. Á Use of ammonium formate in QuEChERS for high-throughput analysis of pesticides in food by fast, low-pressure gas chromatography and liquid chromatography tandem mass spectrometry. J Chromatogr A. 1358, 75-84 (2014).
- Varela-Martínez, D. A., González-Sálamo, J., González-Curbelo, M. Á, Quick Hernández-Borges, J. Quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe (QuEChERS) extraction. Handbooks in Separation Science. , Elsevier. Amsterdam, the Netherlands. 399-437 (2020).
- González-Curbelo, M. Á Analysis of organochlorine pesticides in a soil sample by a modified QuEChERS approach using ammonium formate. J Vis Exp. 191, e64901 (2023).
- González-Curbelo, M. Á, Dionis-Delgado, S., Asensio-Ramos, M., Hernández-Borges, J. Pesticide analysis in toasted barley and chickpea flours. J Sep Sci. 35 (2), 299-307 (2012).
- Varela-Martínez, D. A., González-Curbelo, M. Á, González-Sálamo, J., Hernández-Borges, J. High-throughput analysis of pesticides in minor tropical fruits from Colombia. Food Chem. 280, 221-230 (2019).
- Li, L., Li, W., Qin, D. M., Jiang, S. R., Liu, F. M. Application of graphitized carbon black to the QuEChERS method for pesticide multiresidue analysis in spinach. J AOAC Int. 92 (2), 538-547 (2009).
