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Chemistry

QuEChERS विधि और गैस क्रोमैटोग्राफी-अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा एवोकैडो किस्मों में 45 कीटनाशकों का निर्धारण

Published: December 8, 2023 doi: 10.3791/66082
Automatic Translation
1, 1, 2,3, 2,3
1Departamento de Ciencias Básicas, Facultad de Ingeniería, Universidad EAN, 2Departamento de Química, Unidad Departamental de Química Analítica, Facultad de Ciencias, Universidad de La Laguna (ULL), 3Instituto Universitario de Enfermedades Tropicales y Salud Pública de Canarias, Universidad de La Laguna (ULL)

Summary

वर्तमान प्रोटोकॉल अमोनियम फॉर्मेट के साथ Quick-E asy-Ch eap-E ffective-R ugged-S afe (QuEChERS) विधि का उपयोग करके एवोकैडो किस्मों में बहुवर्गीय कीटनाशक अवशेषों के विश्लेषण का वर्णन करता है, इसके बाद गैस क्रोमैटोग्राफी-अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री होती है।

Abstract

गैस क्रोमैटोग्राफी (जीसी) अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस / एमएस) भोजन में कीटनाशक अवशेषों की निगरानी के लिए बड़े पैमाने पर नियोजित एक प्रमुख विश्लेषणात्मक उपकरण के रूप में खड़ा है। फिर भी, ये विधियां मैट्रिक्स प्रभाव (एमई) के प्रति संवेदनशील हैं, जो संभावित रूप से विश्लेषण और मैट्रिक्स के विशिष्ट संयोजन के आधार पर सटीक मात्रा का ठहराव को प्रभावित कर सकती हैं। एमई को कम करने के लिए विभिन्न रणनीतियों के बीच, मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन इसकी लागत-प्रभावशीलता और सीधे कार्यान्वयन के कारण कीटनाशक अवशेष अनुप्रयोगों में प्रचलित दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करता है। इस अध्ययन में, कुल 45 प्रतिनिधि कीटनाशकों का विश्लेषण एवोकैडो (यानी, क्रिओलो, हैस और लोरेना) की तीन अलग-अलग किस्मों में किया गया था, जिसमें अमोनियमफॉर्मेट और जीसी-एमएस / एमएस के साथ क्यू आईसीके-ई asy-Ch eap-E प्रभावी-आर ugged-S afe (QuEChERS) विधि का उपयोग किया गया था।

इस प्रयोजन के लिए, एवोकैडो नमूने के 5 ग्राम को एसीटोनिट्राइल के 10 एमएल के साथ निकाला गया था, और फिर चरण पृथक्करण को प्रेरित करने के लिए 2.5 ग्राम अमोनियम फॉर्मेट जोड़ा गया था। इसके बाद, सतह पर तैरनेवाला 150 मिलीग्राम निर्जल एमजीएसओ4, 50 मिलीग्राम प्राथमिक-माध्यमिक अमाइन, 50 मिलीग्राम ऑक्टाडेसिलसिलेन, 10 मिलीग्राम ग्रेफाइटाइज्ड कार्बन ब्लैक, और 60 मिलीग्राम जिरकोनियम ऑक्साइड-आधारित शर्बत (जेड-सेप्ट +) को नियोजित करने वाले फैलाव ठोस-चरण निष्कर्षण के माध्यम से एक सफाई प्रक्रिया से गुजरा। जीसी-एमएस / एमएस विश्लेषण सफलतापूर्वक 25 मिनट से भी कम समय में किया गया था। विधि के प्रदर्शन का आकलन करने के लिए कठोर सत्यापन प्रयोग किए गए थे। एवोकैडो की प्रत्येक किस्म के लिए मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन वक्र की परीक्षा से पता चला कि एमई अपेक्षाकृत सुसंगत रहा और अधिकांश कीटनाशक / किस्म संयोजनों के लिए 20% से कम (नरम एमई के रूप में माना जाता है)। इसके अलावा, सभी तीन किस्मों के लिए मात्रा का ठहराव की विधि की सीमा 5 μg / किग्रा से कम थी। अंत में, अधिकांश कीटनाशकों के लिए वसूली मूल्य 70-120% की स्वीकार्य सीमा के भीतर गिर गया, जिसमें सापेक्ष मानक विचलन मूल्य 20% से कम था।

Introduction

रासायनिक विश्लेषण में, मैट्रिक्स प्रभाव (एमई) को विभिन्न तरीकों से परिभाषित किया जा सकता है, लेकिन एक व्यापक रूप से स्वीकृत सामान्य परिभाषा इस प्रकार है: यह संकेत में परिवर्तन को संदर्भित करता है, विशेष रूप से अंशांकन वक्र के ढलान में परिवर्तन जब नमूना मैट्रिक्स या इसका हिस्सा एक विशिष्ट विश्लेषण के विश्लेषण के दौरान मौजूद होता है। एक महत्वपूर्ण पहलू के रूप में, एमई को किसी भी विश्लेषणात्मक विधि की सत्यापन प्रक्रिया के दौरान पूरी तरह से जांच की आवश्यकता होती है, क्योंकि यह लक्ष्य विश्लेषण1 के लिए मात्रात्मक माप की सटीकता को सीधे प्रभावित करता है। आदर्श रूप से, नमूना मैट्रिक्स से किसी भी घटक को निकालने से बचने के लिए एक नमूना ढोंग प्रक्रिया पर्याप्त चयनात्मक होनी चाहिए। हालांकि, महत्वपूर्ण प्रयासों के बावजूद, इनमें से कई मैट्रिक्स घटक अभी भी ज्यादातर मामलों में अंतिम निर्धारण प्रणाली में समाप्त हो जाते हैं। नतीजतन, ऐसे मैट्रिक्स घटक अक्सर वसूली और सटीक मूल्यों से समझौता करते हैं, अतिरिक्त शोर पेश करते हैं, और विधि में शामिल समग्र लागत और श्रम को बढ़ाते हैं।

गैस क्रोमैटोग्राफी (जीसी) में, एमई जीसी प्रणाली के भीतर सक्रिय साइटों की उपस्थिति के कारण उत्पन्न होता है, जो विभिन्न तंत्रों के माध्यम से लक्ष्य विश्लेषण के साथ बातचीत करते हैं। एक ओर, मैट्रिक्स घटक इन सक्रिय साइटों को ब्लॉक या मास्क करते हैं जो अन्यथा लक्ष्य विश्लेषणों के साथ बातचीत करेंगे, जिसके परिणामस्वरूप लगातार सिग्नल एन्हांसमेंट2. दूसरी ओर, सक्रिय साइटें जो अबाधित रहती हैं, मजबूत बातचीत के कारण पीक टेलिंग या विश्लेषण अपघटन का कारण बन सकती हैं, जिससे नकारात्मक एमई हो सकता है। हालांकि, यह कुछ मामलों में संभावित लाभ प्रदान कर सकताहै 2. यह जोर देना महत्वपूर्ण है कि अत्यधिक निष्क्रिय घटकों और उचित रखरखाव का उपयोग करने के बावजूद, जीसी प्रणाली में पूर्ण जड़ता प्राप्त करना बेहद चुनौतीपूर्ण है। निरंतर उपयोग के साथ, जीसी प्रणाली में मैट्रिक्स घटकों का संचय अधिक स्पष्ट हो जाता है, जिससे एमई में वृद्धि होती है। आजकल, यह व्यापक रूप से मान्यता प्राप्त है कि ऑक्सीजन, नाइट्रोजन, फास्फोरस, सल्फर और इसी तरह के तत्वों वाले विश्लेषण, एक बड़ा एमई प्रदर्शित करते हैं क्योंकि वे इन सक्रिय साइटों के साथ आसानी से बातचीत करते हैं। इसके विपरीत, हाइड्रोकार्बन या organohalogens के रूप में अत्यधिक स्थिर यौगिकों इस तरह के बातचीत से गुजरना नहीं है और विश्लेषण 2,3 के दौरान अवलोकन एमई नहीं दिखा.

कुल मिलाकर, एमई को पूरी तरह से समाप्त नहीं किया जा सकता है, जिससे मैट्रिक्स घटकों को पूरी तरह से हटाने पर मुआवजे या सुधार के लिए कई रणनीतियों का विकास संभव नहीं है। इन रणनीतियों के बीच, deuterated आंतरिक मानकों (आईएस), विश्लेषण रक्षक, मैट्रिक्स मिलान अंशांकन, मानक जोड़ विधि, या इंजेक्शन तकनीक के संशोधन के उपयोग वैज्ञानिक साहित्य 1,2,4,5 में प्रलेखित किया गया है. SANTE/11312/2021 दिशानिर्देशों ने भी इन रणनीतियों की सिफारिश कीहै 6.

एमई के लिए क्षतिपूर्ति करने के लिए मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन के आवेदन के संबंध में, व्यावहारिक स्थितियों में नमूना अनुक्रम एक ही वस्तु से विभिन्न प्रकार के खाद्य पदार्थों या विभिन्न नमूनों को शामिल करते हैं। इस मामले में, यह धारणा बनाई जाती है कि एक ही वस्तु से किसी भी नमूने को नियोजित करना सभी नमूनों में एमई के लिए प्रभावी रूप से क्षतिपूर्ति करेगा। हालांकि, मौजूदा साहित्य में पर्याप्त अध्ययन की कमी है जो विशेष रूप से इस मुद्दे की जांचकरते हैं 7.

वसा और पिगमेंट के एक सराहनीय प्रतिशत वाले मैट्रिक्स में कीटनाशकों का बहु-अवशेष निर्धारण एक चुनौतीपूर्ण कार्य है। coextracted सामग्री की काफी मात्रा में काफी निष्कर्षण दक्षता को प्रभावित और बाद में क्रोमैटोग्राफिक निर्धारण के साथ हस्तक्षेप, संभावित रूप से स्तंभ, स्रोत, और डिटेक्टर को नुकसान पहुंचाने, और महत्वपूर्ण एमई 8,9,10 में जिसके परिणामस्वरूप. नतीजतन, इस तरह के मैट्रिक्स में ट्रेस स्तर पर कीटनाशकों के विश्लेषण उच्चवसूली मूल्यों 7 सुनिश्चित करते हुए विश्लेषण से पहले मैट्रिक्स घटकों की एक महत्वपूर्ण कमी की आवश्यकता है. उच्च वसूली मूल्य प्राप्त करना यह सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है कि कीटनाशक विश्लेषण विश्वसनीय, सटीक और नियामक मानकों के अनुरूप रहें। यह खाद्य सुरक्षा, पर्यावरण संरक्षण और कृषि और संबंधित क्षेत्रों में सूचित निर्णय लेने के लिए महत्वपूर्ण है।

एवोकैडो दुनिया भर में उष्णकटिबंधीय और भूमध्यसागरीय जलवायु में खेती की जाने वाली उच्च व्यावसायिक मूल्य का फल है और व्यापक रूप से इसके मूल क्षेत्रों और कई निर्यात बाजारों में इसका सेवन किया जाता है। विश्लेषणात्मक दृष्टिकोण से, एवोकैडो एक जटिल मैट्रिक्स है जिसमें फैटी एसिड (यानी, ओलिक, पामिटिक और लिनोलिक) की एक महत्वपूर्ण संख्या होती है, नट्स के समान, एक महत्वपूर्ण वर्णक सामग्री, जैसे कि हरी पत्तियों में, साथ ही शर्करा और कार्बनिक अम्ल, अन्य फलों में पाए जाने वालेसमान 11. इसकी वसायुक्त प्रकृति के कारण, विश्लेषण के लिए किसी भी विश्लेषणात्मक पद्धति को नियोजित करते समय विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए। जबकि कुछ उदाहरणों में जीसी-एमएस का उपयोग करके एवोकैडो पर कीटनाशक अवशेष विश्लेषण किया गया है 8,12,13,14,15,16,17,18,19,20, यह अन्य मैट्रिक्स की तुलना में अपेक्षाकृत कम लगातार रहा है। ज्यादातर मामलों में, Quick-E asy-Ch eap-E प्रभावी-R ugged-S afe (QuEChERS) विधि का एक संस्करण 8,12,13,14,15,16,17,18 लागू किया गया है। इनमें से किसी भी अध्ययन ने विभिन्न एवोकैडो किस्मों के बीच एमई की स्थिरता की जांच नहीं की है।

इसलिए, इस काम का उद्देश्य अमोनियम फॉर्मेट और जीसी-एमएस / एमएस के साथ क्यूचर्स विधि का उपयोग करके एवोकैडो (यानी, क्रिओलो, हैस और लोरेना) की विभिन्न किस्मों में 45 प्रतिनिधि कीटनाशकों के लिए एमई और रिकवरी मूल्यों की स्थिरता का अध्ययन करना था। हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, यह पहली बार है कि इस तरह के फैटी मैट्रिक्स नमूनों पर इस प्रकार का अध्ययन किया गया है।

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Protocol

1. स्टॉक और कार्य समाधान तैयार करना

नोट: सुरक्षा कारणों से, पूरे प्रोटोकॉल में नाइट्राइल दस्ताने, एक प्रयोगशाला कोट और सुरक्षा चश्मा पहनने की सलाह दी जाती है।

  1. 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में एसीटोनिट्राइल में लगभग 1,000 मिलीग्राम/एल पर 45 वाणिज्यिक कीटनाशक मानकों ( सामग्री की तालिकादेखें) में से प्रत्येक के व्यक्तिगत स्टॉक समाधान तैयार करें।
  2. 25 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में एसीटोनिट्राइल में 400 मिलीग्राम / एल स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए उपरोक्त व्यक्तिगत स्टॉक समाधानों को मिलाएं।
    नोट: इस मिश्रित समाधान वसूली और अंशांकन प्रयोगों के लिए काम कर रहे समाधान तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा.
  3. 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में एसीटोनिट्राइल में क्रमशः 750 मिलीग्राम/एल और 1,050 मिलीग्राम/एल की सांद्रता में एट्राजीन-डी5 और ट्राइफिनाइल फॉस्फेट (टीपीपी) के स्टॉक समाधान तैयार करें। एट्राज़ीन-डी5 का उपयोग प्रक्रियात्मक आंतरिक मानक (पी-आईएस) के रूप में और टीपीपी को इंजेक्शन आंतरिक मानक (आई-आईएस) के रूप में करें।
    नोट: आदर्श परिदृश्य में प्रत्येक विशिष्ट लक्ष्य विश्लेषण के लिए आइसोटोपिक रूप से लेबल किए गए आंतरिक मानक का उपयोग शामिल होगा।
  4. कीटनाशकों के लिए 10, 100, और 400 माइक्रोग्राम/किग्रा नमूना समकक्ष और पी-आईएस के लिए 200 माइक्रोग्राम/किग्रा अलग से उपज के लिए 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में फॉर्मिक एसिड (गिरावट को रोकने के लिए) युक्त 0.05% (वी / वी) युक्त एसीटोनिट्राइल में स्टॉक रिकवरी समाधान तैयार करें। इन समाधानों को एम्बर ग्लास शीशियों में अंधेरे में -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  5. कीटनाशकों और पी-आईएस के अंशांकन समाधान एक साथ एसीटोनिट्राइल में 0.05% (वी / वी) फॉर्मिक एसिड के साथ 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 5, 10, 25, 75, 200, 400, और 600 माइक्रोग्राम / किग्रा, और 200 एनजी / एनजी, क्रमशः उपज के लिए तैयार करें, और उन्हें -20 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में एम्बर ग्लास शीशियों में स्टोर करें।
    नोट: एक ही समाधान प्रयोगात्मक कार्य भर में इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन तुरंत प्रत्येक उपयोग के बाद निर्दिष्ट शर्तों के तहत उन्हें भंडारण आवश्यक है.
  6. 3-एथोक्सी-1,2-प्रोपेनडिओल के 100 ग्राम/एल, एल-गुलोनिक एसिड γ-लैक्टोन, डी-सोर्बिटोल के 10 ग्राम/एल, और 5 ग्राम/एल शिकिमिक एसिड के 4/1 (वी/वी) अनुपात में 4/1 (वी/वी) फॉर्मिक एसिड के 0.5% (वी/वी) के साथ पानी के लिए विश्लेषण प्रोटेक्टेंट्स का मिश्रण तैयार करें।
    नोट: विश्लेषण प्रोटेक्टेंट्स का यह मिश्रण मुझे कम करने के लिए इंजेक्शन से ठीक पहले जोड़ा जाना है।

2. नमूना संग्रह

  1. सुपरमार्केट में उपलब्ध तीन एवोकैडो प्रजातियों (जैसे, क्रियोलो, हैस और लोरेना) से नमूने एकत्र करें। सुनिश्चित करें कि प्रत्येक नमूने का वजन लगभग 1 किलो है, जो बाद के सभी अध्ययनों के संचालन के लिए पर्याप्त है और निर्देश 2002/63/सीई21 के साथ संरेखित करता है।
    नोट: कीटनाशक अवशेषों की उपस्थिति की संभावना को कम करने के लिए कार्बनिक नमूनों को अधिमानतः चुना गया था।
  2. एकत्रित एवोकैडो नमूनों को प्रयोगशाला में ले जाएं, और व्यक्तिगत रूप से हेलिकॉप्टर का उपयोग करके पाइप के बिना उन्हें समरूप बनाएं ( सामग्री की तालिकादेखें)। विश्लेषण तक 4 डिग्री सेल्सियस पर एम्बर ग्लास कंटेनर में समरूप नमूनों को स्टोर करें।
    नोट: एक ही एवोकैडो नमूने पूरे अध्ययन भर में इस्तेमाल किया जाएगा. इसलिए, प्रत्येक उपयोग के तुरंत बाद निर्दिष्ट शर्तों के तहत उन्हें स्टोर करना महत्वपूर्ण है।

3. अमोनियम फॉर्मेट के साथ QuEChERS विधि का उपयोग करके नमूना तैयार करना

नोट: चित्रा 1 अमोनियम फॉर्मेट के साथ क्यूचर्स विधि का एक योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व दिखाता है।

  1. 50 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में प्रत्येक एवोकैडो नमूने के 5 ग्राम वजन ( सामग्री की तालिकादेखें)।
  2. 200 माइक्रोग्राम/किग्रा की एकाग्रता प्राप्त करने के लिए पी-आईएस समाधान के 50 माइक्रोन जोड़ें। वसूली मूल्यांकन के लिए, 10, 100, और 400 माइक्रोग्राम/किग्रा (एन = 5 प्रत्येक) की सांद्रता प्राप्त करने के लिए चरण 1.4 में तैयार कीटनाशक समाधान भी जोड़ें।
  3. नमूने में स्पाइक के पूरी तरह से एकीकरण को सुनिश्चित करने के लिए 30 एस के लिए ट्यूब भंवर।
  4. अपकेंद्रित्र ट्यूब में एसीटोनिट्राइल के 10 एमएल जोड़ें। 5 मिनट के लिए 70 आरपीएम पर ट्यूब हिला.
  5. अमोनियम फॉर्मेट के 2.5 ग्राम जोड़ें, ट्यूब को फिर से 5 मिन के लिए 70 आरपीएम पर हिलाएं, और बाद में इसे 5 मिन के लिए 1,800 × ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें।
  6. निर्जल एमजीएसओ4 के 150 मिलीग्राम, प्राथमिक-माध्यमिक अमाइन (पीएसए) के 50 मिलीग्राम, ऑक्टाडेसिलसिलेन (सी18) के 50 मिलीग्राम, ग्रेफाइटेड कार्बन ब्लैक (जीसीबी) के 10 मिलीग्राम, और 60 मिलीग्राम जिरकोनियम ऑक्साइड-आधारित सॉर्बेंट जेड-एसईपी + युक्त 2 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब के लिए, फैलाव-ठोस चरण निष्कर्षण (डी-एसपीई) का उपयोग करके शुद्धिकरण के लिए निकालने का 1 एमएल जोड़ें। 30 एस के लिए ट्यूब भंवर और 5 मिनट के लिए 1,800 × ग्राम पर यह अपकेंद्रित्र.
  7. निकालने के 200 माइक्रोन को एक ऑटोसैंपलर शीशी में स्थानांतरित करें, चरण 1.6 में तैयार किए गए विश्लेषणात्मक सुरक्षात्मक समाधान के 20 माइक्रोन जोड़ें, और टीपीपी समाधान के 50 माइक्रोन शामिल करें।
  8. जीसी-एमएस / एमएस सिस्टम का उपयोग करके वाद्य विश्लेषण करें (अनुभाग 4 देखें)।
  9. ऊपर वर्णित एक ही प्रक्रिया के बाद मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन करें, रिक्त अर्क का उपयोग करके, डी-एसपीई चरण (चरण 3.6) के दौरान, 15 एमएल ट्यूबों में सतह पर तैरनेवाला के 5 एमएल को साफ करें। चरण 3.7 पर स्पाइक और पी-आईएस समाधान जोड़ें। टीपीपी के साथ 5, 10, 25, 50, 100, 200, 400, और 600 माइक्रोग्राम/किग्रा उपज के लिए ऑटोसैंपलर शीशियों में अंशांकन मानक समाधान जोड़ें, जिसके परिणामस्वरूप 270 माइक्रोन की अंतिम मात्रा होती है।
    नोट: कुल मिलाकर, प्रत्येक एवोकैडो किस्म के साथ-साथ एसीटोनिट्राइल-केवल अंशांकन के लिए मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन घटता का निर्माण करना सुनिश्चित करें।

4. GC-MS/MS प्रयोग गरेर वाद्य विश्लेषण

  1. एक इलेक्ट्रॉन आयनीकरण इंटरफ़ेस (-70 ईवी) और एक ऑटोसैंपलर ( सामग्री की तालिकादेखें) से लैस ट्रिपल क्वाड्रूपोल (टीक्यू) के साथ जीसी-एमएस / एमएस सिस्टम को नियोजित करने वाले विश्लेषणों का संचालन करें।
  2. 1.2 एमएल / मिनट की निरंतर प्रवाह दर पर वाहक गैस के रूप में अल्ट्राहाई शुद्धता हीलियम के साथ एक एमएस जीसी कॉलम (30 मीटर लंबाई, 0.25 मिमी आंतरिक व्यास, 0.25 माइक्रोन फिल्म मोटाई का सिलिका बॉन्ड) को नियोजित करें।
  3. उपकरण संचालन के साथ आगे बढ़ने से पहले निम्नलिखित मापदंडों की जाँच करें:
    1. सुनिश्चित करें कि गैस का दबाव सही है: 140 साई पर हीलियम और 65 साई पर आर्गन।
    2. यह सुनिश्चित करने के लिए रोटरी पंप तेल की स्थिति की जांच करें कि यह स्पष्ट और उचित स्तर पर है।
    3. सुनिश्चित करें कि इंजेक्शन सिरिंज में पिछले इंजेक्शन से कोई रुकावट नहीं है।
    4. पुष्टि करें कि धोने की शीशियों में प्रत्येक विलायक की पर्याप्त मात्रा होती है।
    5. जांचें कि उपभोग्य सामग्रियों का काउंटर (सेप्टम, लाइनर) अपनी सीमा तक नहीं पहुंचा है।
  4. फ्रंट पैनल पर स्थित मुख्य जीसी स्विच चालू करें और पीछे स्थित एमएस स्विच चालू करें।
  5. GCMS रीयल टाइम विश्लेषण सफ्टवेयर खोल्नुहोस् जसले GC-MS/MS प्रणालीको सबै प्यारामिटरहरू नियन्त्रण गर्दछ।
    नोट: साधन प्रणाली डिफ़ॉल्ट रूप से GCMS वास्तविक समय विश्लेषण सॉफ्टवेयर भी शामिल है.
  6. वैक्यूम कंट्रोल पर क्लिक करें | उन्नत | रोटरी पंप 1 वैक्यूम सिस्टम शुरू करने के लिए।
    नोट: इस विंडो में, इष्टतम वैक्यूम मूल्यों को निर्धारित करने के लिए दबाव की निगरानी करें, जो 9.0 पा से कम होना चाहिए। इसमें लगभग 12 घंटे लगेंगे।
  7. टर्बो आणविक पंप 1 और टर्बो आणविक पंप 2 चालू करने के लिए प्रारंभ पर क्लिक करें।
  8. आयन सोर्स हीटर विकल्प के लिए स्टार्ट पर क्लिक करें।
    नोट: 1 घंटे के अनुशंसित समय के बाद, यह पुष्टि करने के लिए सिस्टम के वैक्यूम की जांच करें कि अनुशंसित मान 1.6e-3 Pa से कम है।
  9. एमएस इंटरफ़ेस तापमान को 250 डिग्री सेल्सियस और आयन स्रोत तापमान को 300 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें।
  10. जीसी ओवन को 1 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस के प्रारंभिक तापमान पर बनाए रखें, फिर इसे 25 डिग्री सेल्सियस / मिनट की दर से 180 डिग्री सेल्सियस तक रैंप करें। इसके बाद, तापमान को 5 डिग्री सेल्सियस / मिनट पर 230 डिग्री सेल्सियस और फिर 25 डिग्री सेल्सियस / मिनट पर 2 9 0 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाएं। अंत में, 6 मिनट के लिए 290 डिग्री सेल्सियस पर तापमान स्थिर रखें। कुल विश्लेषण समय 24.6 मिनट है।
  11. इन सभी सिस्टम के ऑन होने के बाद क्लोज पर क्लिक करें।
  12. विश्लेषण सॉफ्टवेयर से ट्यूनिंग विकल्प पर क्लिक करें और मास स्पेक्ट्रोमीटर स्थितियों का प्रारंभिक सत्यापन करने के लिए पीक मॉनिटर व्यू पर क्लिक करें।
    नोट: यदि आवश्यक हो, तो ऑटोट्यूनिंग करें।
  13. अधिग्रहण पर क्लिक करें, और प्रदर्शित विंडो से, डाउनलोड प्रारंभिक पैरामीटर पर क्लिक करें। सत्यापित करें कि उपकरण तैयार है जीसी और तैयार एमएस।

5. डेटा अधिग्रहण

  1. सॉफ्टवेयर से नई बैच फ़ाइल पर क्लिक करें और इस तरह के नमूना नाम के रूप में जानकारी युक्त एक अनुक्रम बनाने, नमूना आईडी, विधि फ़ाइल, डेटा फ़ाइल, इंजेक्शन मात्रा, और ट्यूनिंग फ़ाइल. आवश्यकतानुसार पंक्तियाँ जोड़ें और सहेजें पर क्लिक करें।
  2. बैच स्टार्ट पर क्लिक करें और इंजेक्शन प्रक्रिया शुरू होने दें।
  3. विभाजन रहित मोड में 250 डिग्री सेल्सियस पर इंजेक्शन प्रदर्शन करें, 1 माइक्रोन की इंजेक्शन मात्रा बनाए रखें। इंजेक्शन के बाद 1 मिनट के बाद, विभाजन खोलें।
    नोट: इंजेक्शन के बीच, प्रत्येक विलायक के साथ एक एकल कुल्ला का उपयोग करके, मेथनॉल, एथिल एसीटेट और एसीटोनिट्राइल के साथ 10 माइक्रोन सिरिंज को साफ करना सुनिश्चित करें। सभी इंजेक्शन तीन प्रतियों में किए जाते हैं।
  4. मल्टीपल रिएक्शन मॉनिटरिंग (MRM) मोड का उपयोग करके विश्लेषणों का विश्लेषण करें, जो TQ के साथ MS/MS सिस्टम में नियोजित मानक मोड है।
    नोट: तालिका 1 प्रतिधारण समय (मिनट में) और बहुस्तरीय कीटनाशकों, पी-आईएस और आई-आईएस के लिए क्वांटिफायर और क्वालीफायर संक्रमण प्रदान करता है। मात्रात्मक विश्लेषण P-IS आयन के लिए परिमाणीकरण आयन के शिखर क्षेत्र के अनुपात पर निर्भर करता है। आई-आईएस का उपयोग इंजेक्शन के दौरान गुणवत्ता नियंत्रण के लिए किया जाता है। अनुपूरक फ़ाइल 1 में सभी 45 विश्लेषण किए गए कीटनाशकों के लिए क्रोमैटोग्राम शामिल हैं।
  5. डेटा विश्लेषण के लिए Postrun विश्लेषण सॉफ़्टवेयर खोलें।
    नोट: साधन प्रणाली डिफ़ॉल्ट रूप से GCMS Postrun विश्लेषण सॉफ्टवेयर भी शामिल है.
  6. विश्लेषण किए जाने वाले इंजेक्शन पर क्लिक करें, विश्लेषण वाली तालिका के माध्यम से नेविगेट करें, और ब्याज की चोटी का चयन करें।
  7. क्रोमैटोग्राम की कल्पना करने के लिए चोटी या ब्याज के क्षेत्र पर क्लिक करें. शिखर एकीकरण की समीक्षा करें, और यदि आवश्यक हो, तो मैन्युअल एकीकरण करें। आवश्यक गणना और विधि मूल्यांकन करने के लिए सभी विश्लेषणों के क्षेत्रों को सत्यापित करें।

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Representative Results

विश्लेषणात्मक पद्धति का व्यापक सत्यापन SANTE/11312/2021 दिशानिर्देश6 के अनुसार आयोजित किया गया था, जिसमें रैखिकता, ME, पुनर्प्राप्ति और पुनरावृत्ति का आकलन शामिल था।

रैखिकता मूल्यांकन के लिए, मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन घटता का निर्माण कई एकाग्रता स्तरों (5 से 600 माइक्रोग्राम/किग्रा तक) पर नुकीले रिक्त नमूनों का उपयोग करके किया गया था। अधिकांश चयनित कीटनाशकों के लिए निर्धारण गुणांक (आर2) 0.99 से अधिक या उसके बराबर पाए गए, जो एकाग्रता और प्रतिक्रिया के बीच एक अत्यधिक रैखिक संबंध दर्शाते हैं। 5 माइक्रोग्राम/किग्रा का सबसे कम अंशांकन स्तर (एलसीएल) चुना गया था, जो खाद्यनिगरानी उद्देश्यों के लिए 10 माइक्रोग्राम/किग्रा की स्थापित अधिकतम अवशेष सीमा (एमआरएल) का पालन करता था।

एमई का मूल्यांकन करने के लिए, मल्टीक्लास कीटनाशकों के अंशांकन घटता की ढलानों की तुलना शुद्ध विलायक और मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन स्थितियों के बीच की गई थी। एक उदाहरण उदाहरण के रूप में, चित्रा 2 विलायक में घटता की तुलना और कार्बोफ्यूरन के लिए तीन मैट्रिक्स में से प्रत्येक को दर्शाता है। एमई की गणना समीकरण (1) 7 का उपयोग करके की गई थी, उपज प्रतिशत जो सिग्नल वृद्धि (सकारात्मक प्रतिशत) या सिग्नल दमन (नकारात्मक प्रतिशत) को दर्शाता है।

मैट्रिक्स प्रभाव (%) = Equation 1 (1)

प्रतिशत श्रेणियों के आधार पर प्रस्तुत एमई वर्गीकरण प्रणाली, विश्लेषणात्मक निष्कर्षों की व्याख्या में सहायता करते हुए, कीटनाशक संकेतों पर मैट्रिक्स के प्रभाव में अंतर्दृष्टि प्रदान करती है। कार्बोफ्यूरान के सभी मामलों में, 20% से अधिक सकारात्मक एमई प्राप्त किया गया था। हालांकि, मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन घटता की पीढ़ी के निष्कर्षों ने अधिकांश कीटनाशक/विविधता संयोजनों के लिए 20% से कम (नरम एमई के रूप में वर्गीकृत) के अपेक्षाकृत सुसंगत एमई का खुलासा किया ( तालिका 2 और चित्रा 3 देखें)।

विश्लेषण की सटीकता और पुनरावृत्ति का मूल्यांकन करने के लिए, रिक्त नमूनों को तीन अलग-अलग एकाग्रता स्तरों (प्रत्येक एकाग्रता के लिए 10, 100, और 400 माइक्रोग्राम / किग्रा; एन = 5) पर कीटनाशकों के साथ नुकीला किया गया था। चित्रा 4 में परिणाम कीटनाशकों की गिनती का प्रदर्शन करते हैं जिनकी औसत वसूली प्रतिशत प्रत्येक प्रकार के एवोकैडो के लिए 70-120% की स्वीकार्य सीमा के भीतर थी। इसके अलावा, तालिका 3 प्राप्त सभी विशिष्ट मूल्यों के लिए विस्तृत डेटा प्रस्तुत करता है। परीक्षण किए गए कीटनाशकों के एक महत्वपूर्ण अनुपात ने विशिष्ट सीमा के भीतर आने वाले रिकवरी प्रतिशत का प्रदर्शन किया, जिसमें सापेक्ष मानक विचलन (आरएसडी) मान 20% से कम था।

Figure 1
चित्रा 1: एवोकैडो नमूनों से कीटनाशक अवशेषों के निष्कर्षण के लिए नियोजित अमोनियम फॉर्मेट के साथ क्यूचर्स विधि का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। संक्षिप्ताक्षर: QuEChERS = Quick-E asy-Ch eap-E प्रभावी-R ugged-S afe; आईएस = आंतरिक मानक; पीएसए = प्राथमिक-माध्यमिक अमाइन; जीसीबी = ग्रेफाइटाइज्ड कार्बन ब्लैक; QC = गुणवत्ता नियंत्रण; GC-MS/MS = गैस क्रोमैटोग्राफी-अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: कार्बोफ्यूरन के लिए विलायक और मैट्रिक्स में अंशांकन घटता की तुलना। विलायक: y = 0.0028x - 0.0054 और R2 = 0.9974; क्रिओलो: y = 0.0050x + 0.0050, R2 = 0.9994, और ME = 80%; हस: y = 0.0037x - 0.0109, R2 = 0.9977, और ME = 30%; लोरेना: y = 0.0041x + 0.0053, R2 = 0.9998, और ME = 42%। संक्षिप्ताक्षर: ME = मैट्रिक्स प्रभाव; P-IS = प्रक्रियात्मक आंतरिक मानक। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: एवोकैडो किस्मों के लिए एमई की उनकी संबंधित श्रेणियों द्वारा वर्गीकृत चयनित कीटनाशकों की संख्या। एमई का वर्गीकरण तीन श्रेणियों पर आधारित है: नरम (-20% और 20% के बीच मान), मध्यम (-20% और -50% के बीच या 20% और 50% के बीच के मान), और मजबूत (50% से अधिक मूल्य या -50% से नीचे गिरना)। संक्षिप्ताक्षर: ME = मैट्रिक्स प्रभाव। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्र 4: स्वीकार्य रिकवरी रेंज के बाहर और भीतर आने वाले कीटनाशकों की संख्या तीन एवोकैडो किस्मों में 10, 100 और 400 μg/kg (n = 15) पर बढ़ी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका 1: पी-आईएस और आई-आईएस के साथ-साथ चयनित कीटनाशकों के जीसी-एमएस/एमएस विश्लेषण में उपयोग किए जाने वाले प्रतिधारण समय, क्वांटिफायर और क्वालीफायर संक्रमण। संक्षिप्ताक्षर: पी-आईएस = प्रक्रियात्मक आंतरिक मानक; I-IS = इंजेक्शन आंतरिक मानक; GC-MS/MS = गैस क्रोमैटोग्राफी-अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री; एचसीबी = हेक्साक्लोरोबेंजीन; α-एचसीएच = अल्फा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; β-एचसीएच = बीटा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; 4,4'-डीडीडी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोइथेन; 4,4'-डीडीई = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोएथिलीन; 4,4'-डीडीटी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलट्राइक्लोरोइथेन; टीपीपी = ट्राइफेनिल फॉस्फेट; ईपीएन = एथिल नाइट्रोफेनिल फेनिलफॉस्फोनोथियोएट। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 2: अंतिम विश्लेषणात्मक विधि के सत्यापन के दौरान विभिन्न एवोकैडो किस्मों में चयनित कीटनाशकों के लिए मैट्रिक्स प्रभाव मान (%) संक्षिप्ताक्षर: एचसीबी = हेक्साक्लोरोबेंजीन; α-एचसीएच = अल्फा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; β-एचसीएच = बीटा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; 4,4'-डीडीडी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोइथेन; 4,4'-डीडीई = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोएथिलीन; 4,4'-डीडीटी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलट्राइक्लोरोइथेन; टीपीपी = ट्राइफेनिल फॉस्फेट; ईपीएन = एथिल नाइट्रोफेनिल फेनिलफॉस्फोनोथियोएट। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 3: रिकवरी मान और उनके संबंधित आरएसडी कोष्ठक में (प्रत्येक स्पाइकिंग स्तर पर एन = 5), दोनों में% अंतिम विश्लेषणात्मक विधि के सत्यापन के दौरान विभिन्न एवोकैडो किस्मों में चयनित कीटनाशकों के लिए। संक्षिप्ताक्षर: RSDs = सापेक्ष मानक विचलन; एचसीबी = हेक्साक्लोरोबेंजीन; α-एचसीएच = अल्फा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; β-एचसीएच = बीटा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; 4,4'-डीडीडी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोइथेन; 4,4'-डीडीई = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोएथिलीन; 4,4'-डीडीटी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलट्राइक्लोरोइथेन; टीपीपी = ट्राइफेनिल फॉस्फेट; ईपीएन = एथिल नाइट्रोफेनिल फेनिलफॉस्फोनोथियोएट। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक फ़ाइल 1: सभी कीटनाशकों के मास स्पेक्ट्रोमेट्रिक स्पेक्ट्रा। संक्षिप्ताक्षर: एचसीबी = हेक्साक्लोरोबेंजीन; α-एचसीएच = अल्फा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; β-एचसीएच = बीटा-हेक्साक्लोरोसाइक्लोहेक्सेन; 4,4'-डीडीडी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोइथेन; 4,4'-डीडीई = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलडीक्लोरोएथिलीन; 4,4'-डीडीटी = 4,4'-डाइक्लोरोडिफेनिलट्राइक्लोरोइथेन; ईपीएन = एथिल नाइट्रोफेनिल फेनिलफॉस्फोनोथियोएट। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन से जुड़ी प्राथमिक सीमा अंशांकन मानकों के रूप में रिक्त नमूनों के उपयोग से उत्पन्न होती है। यह विश्लेषण के लिए संसाधित किए जाने वाले नमूनों की एक संवर्धित संख्या और प्रत्येक विश्लेषणात्मक अनुक्रम में मैट्रिक्स घटकों के बढ़े हुए इंजेक्शन की ओर जाता है, संभावित रूप से उच्च साधन रखरखाव की मांग के लिए अग्रणी। बहरहाल, यह रणनीति मानक जोड़ की तुलना में अधिक उपयुक्त है, जो प्रत्येक नमूने के लिए अंशांकन वक्र करने की आवश्यकता के कारण इंजेक्शन लगाने के लिए नमूनों की एक बड़ी संख्या उत्पन्न करेगा। नतीजतन, दोनों मामलों में, नमूना तैयार करने की तकनीकों का उपयोग जो इस तरह के सह-निष्कर्षण को कम करते हैं जबकि शेष लागत प्रभावी, तेज और विश्वसनीय की आवश्यकता होती है। इस संदर्भ में, QuEChERS विधि ने एवोकैडो नमूनों 8,12,13,14,15,16,17,18में कीटनाशक अवशेषों का विश्लेषण करने में अपनी उपयोगिता का प्रदर्शन किया है। हालांकि, उन दृष्टिकोणों में से किसी ने भी अमोनियम प्रारूप को नियोजित करने वाली क्यूचर्स विधि के अनुप्रयोग का पता नहीं लगाया है। इस विकल्प एमएस विश्लेषण 23,24,25,26,27में मैग्नीशियम और सोडियम लवण का उपयोग कर की कमियों को कम करना है. मैग्नीशियम और सोडियम लवण दोनों में कम वाष्प दबाव होता है जिसमें एमएस स्रोत के भीतर सतहों पर ठोस जमा बनाने की प्रवृत्ति होती है, जो संभावित रूप से उपकरण प्रदर्शन को प्रभावित कर सकती है। जबकि यह घटना तरल क्रोमैटोग्राफी (एलसी) सिस्टम में होती है, यह जीसी के संदर्भ में भी चुनौतियां पैदा करती है, जहां ये इनलेट लाइनर में जमा हो सकते हैं, लाइनर27 के अधिक लगातार प्रतिस्थापन की आवश्यकता होती है। इन सीमाओं को दूर करने और एमएस डिटेक्शन के साथ संगतता बढ़ाने के लिए, अत्यधिक अस्थिर विकल्पों के साथ इन लवणों का प्रतिस्थापन लागू किया गया है। अमोनियम लवण को प्राथमिकता दी जाती है क्योंकि उन्हें आसानी से वाष्पित किया जा सकता है और/या विघटित किया जा सकता है, जिससे नुकसान पर काबू पाया जा सकता है। वर्तमान जांच एवोकैडो में कीटनाशक अवशेषों के विश्लेषण के लिए अमोनियम प्रारूप को नियोजित करने वाली क्यूचर्स विधि का उपयोग करने के पहले उदाहरण का प्रतिनिधित्व करती है। विशेष रूप से, निष्कर्षण प्रक्रिया में एवोकैडो नमूने को एसीटोनिट्राइल का उपयोग करके निष्कर्षण चरण के अधीन करना शामिल था, जिसमें नमूने के प्रति ग्राम 0.5 ग्राम अमोनियम फॉर्मेट के अतिरिक्त नमकीन बनाने की सुविधा थी (चित्र 1)।

QuEChERS विधि के दूसरे चरण के रूप में, dSPE कदम महत्वपूर्ण है क्योंकि यह अवांछित मैट्रिक्स घटकों को हटाने के लिए कार्य करता है जो संभावित रूप से विश्लेषणात्मक हस्तक्षेप26 को जन्म दे सकता है। हालांकि, एक प्रभावी डी-एसपीई कदम को प्राप्त करने के लिए अक्सर नमूना मैट्रिक्स से उत्पन्न होने वाले विविध सह-निष्कर्षण को संबोधित करने के लिए विभिन्न शर्बत के संयोजन की आवश्यकता होती है। एवोकाडोस से निपटने के दौरान, इस कदम में अतिरिक्त पानी को हटाने और कीटनाशक विभाजन में सुधार करने के लिए निर्जल एमजीएसओ4, फैटी एसिड, कार्बनिक अम्ल और शर्करा को खत्म करने के लिए पीएसए, नॉनपोलर घटकों को हटाने के लिए सी18, क्लोरोफिल हटाने के लिए जीसीबी, और ज़िरकोनिया सामग्री जैसे जेड-सेप + वसा 15,26,28 की उच्च मात्रा को खत्म करने के लिए शामिल हो सकते हैं. नतीजतन, एवोकैडो अर्क को प्रत्येक शर्बत की विशिष्ट मात्रा वाले अपकेंद्रित्र ट्यूबों में स्थानांतरित किया गया था: 150 मिलीग्राम निर्जल एमजीएसओ4, 50 मिलीग्राम पीएसए, 50 मिलीग्राम सी18, 10 मिलीग्राम जीसीबी, और 60 मिलीग्राम जेड-सेप + (चित्रा 1)।

निष्कर्षण और सफाई चरणों से जुड़े सत्यापन प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, अंशांकन घटता की कड़ाई से जांच की गई थी। इसमें एसीटोनिट्राइल-केवल अंशांकन(चित्रा 2)के अलावा, प्रत्येक विश्लेषण/एवोकैडो किस्म संयोजन के लिए मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन घटता का आकलन करना शामिल था। दोनों परिदृश्यों में, पहले से प्रस्तावित विश्लेषणात्मक रक्षक मिश्रण29, जिसमें 3-एथोक्सी-1,2-प्रोपेनडिओल, एल-गुलोनिक एसिड γ-लैक्टोन, डी-सोर्बिटोल और शिकिमिक एसिड शामिल थे, कार्यरत थे। मूल्यांकन में 5 से 600 μg/kg एकाग्रता सीमा में रैखिकता शामिल थी। 5 माइक्रोग्राम/किग्रा का एलसीएलखाद्य वस्तुओं में कीटनाशक अवशेषों के विश्लेषण को नियंत्रित करने वाले अंतर्राष्ट्रीय नियमों द्वारा निर्धारित 10 माइक्रोग्राम/किग्रा के कड़े एमआरएल से नीचे आता है। इसके अलावा, 5 μg/kg के LCL ने सभी चयनित मल्टीक्लास कीटनाशकों के लिए 10 से अधिक सिग्नल-टू-शोर अनुपात प्राप्त किया। अंशांकन भूखंडों का दृश्य निरीक्षण भी एमई की गणना के लिए नियोजित ढलान मूल्यों की सटीकता को सत्यापित करने के लिए किया गया था। परिणामों ने संकेत दिया कि अधिकांश चयनित कीटनाशकों ने उनमें से प्रत्येक के लिए सभी चार अंशांकन वक्रों में आर2 मूल्यों को 0.99 से अधिक या उसके बराबर प्रदर्शित किया। अंशांकन परिणामों के समग्र मूल्यांकन ने प्रत्येक एवोकैडो किस्म में सटीक एमई गणना के लिए इन समीकरणों की सटीकता और उपयुक्तता का प्रदर्शन किया।

एमई को जांच के तहत तीन एवोकैडो किस्मों में से प्रत्येक में अधिकांश कीटनाशकों के लिए नरम (एमई ≤ 20%) निर्धारित किया गया था (तालिका 2 और चित्रा 3)। इस संदर्भ में, तीन प्रमुख बिंदु हाइलाइट करने लायक हैं। सबसे पहले, अंतिम नमूना अर्क कार्यान्वित नमूना तैयारी प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता के कारण अपेक्षाकृत साफ थे, जिसके परिणामस्वरूप न्यूनतम हस्तक्षेप हुआ। दूसरे, जीसी सिस्टम में, एमई मैट्रिक्स के भीतर होने वाली बातचीत और सिस्टम29 के भीतर सक्रिय साइटों पर होने वाली बातचीत से उत्पन्न प्रभावों के अधीन हैं। उपयोग किए गए विश्लेषणात्मक सुरक्षाकारों के मिश्रण ने व्यापक रूप से कीटनाशकों के लगभग पूरे स्पेक्ट्रम को कवर किया। हालांकि, कीटनाशकों को जल्दी (प्रोपोक्सुर, डाइक्लोरवोस, कार्बोफ्यूरान, और डिपेनिलमाइन) के साथ-साथ बाद में एल्यूटिंग (पाइरीप्रोक्सीफेन, फेनवेलरेट, एस्फेनवेलरेट और डेल्टामेथ्रिन) ने उच्चतम और कम सुसंगत एमई मूल्यों का प्रदर्शन किया। तीसरा, इन अंतरों पर विचार करते हुए, रिकवरी अध्ययन करने के लिए प्रत्येक किस्म के मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन का अलग से उपयोग करने का निर्णय लिया गया। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि शेष कीटनाशकों के लिए एक किस्म यथोचित रूप से अन्य किस्मों का प्रतिनिधित्व कर सकती है।

वसूली और प्रजनन क्षमता मूल्यांकन क्विंटुप्लिकेट (एन = 15) में तीन अलग-अलग एकाग्रता स्तरों (10, 100, और 400 माइक्रोग्राम/किग्रा) पर किया गया था। इसे प्राप्त करने के लिए, QuEChERS विधि के आवेदन की शुरुआत में एवोकैडो के नमूनों को नुकीला किया गया था। मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन से प्राप्त पी-आईएस (एट्राज़ीन-डी5) के शिखर पर कीटनाशक शिखर क्षेत्र के अनुपात की तुलना करके वसूली की गणना की गई थी। प्रत्येक प्रतिकृति स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए एक ही अनुक्रम के भीतर तीन प्रतियों में इंजेक्ट किया गया था. आइसोटोपिक रूप से लेबल किए गए आईएस का उपयोग प्रोटोकॉल के दौरान संभावित कीटनाशक नुकसान के लिए मुआवजे को सक्षम बनाता है, जबकि पद्धति संबंधी त्रुटियों और वाद्य परिवर्तनशीलता के लिए भी लेखांकन करता है। परिणामों से पता चला कि अधिकांश कीटनाशक स्वीकार्य मानदंडों को पूरा करते हैं, प्रत्येक स्पाइकिंग स्तर6 (चित्रा 4) पर 70 से 120% और आरएसडी 20% से नीचे की वसूली के साथ, विधि की प्रभावशीलता और दोहराव को दर्शाता है। हालांकि, कुछ कीटनाशकों ने इस स्वीकार्य सीमा (तालिका 3) से परे वसूली का प्रदर्शन किया। यह हेक्साक्लोरोबेंजीन (एचसीबी) का मामला है, जो सभी सांद्रता स्तरों और मैट्रिक्स के लिए 28-55% की सीमा में वसूली दिखा रहा है। यह एचसीबी के प्लानर आणविक संरचना, जो जीसीबी के साथ एक मजबूत संबंध की ओर जाता है के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है, इसकी अवधारण और निष्कर्षण दक्षता30 को कम करने. एचसीबी और कुछ अन्य मामलों के लिए कम वसूली के बावजूद, विधि ने अभी भी इन कीटनाशकों के लिए लगातार और विश्वसनीय वसूली का प्रदर्शन किया, आरएसडी मान अनुशंसित सीमा से नीचे बने रहे।

अंत में, खाद्य नमूनों में कीटनाशक अवशेषों का विश्लेषण एमई का सामना करता है, जो जीसी-एमएस / एमएस की सटीकता को प्रभावित कर सकता है। मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन इन प्रभावों को कम करने के लिए एक सीधी और प्रभावी रणनीति साबित होती है, यहां तक कि एवोकैडो जैसे मैट्रिसेस में भी, जो फैटी एसिड और अन्य सह-निकालने वाली सामग्री जैसे पिगमेंट में समृद्ध होते हैं। मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन और विश्लेषण सुरक्षा के साथ अमोनियम फॉर्मेट को नियोजित करने वाले QuEChERS विधि के आवेदन के माध्यम से, अत्यधिक सटीक मात्रा का ठहराव प्राप्त किया जाता है। नतीजतन, यह दृष्टिकोण एवोकैडो नमूनों में विश्वसनीय और लागू करने योग्य कीटनाशक अवशेष विश्लेषण सुनिश्चित करता है, जिससे यह नियामक अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हो जाता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

हम ईएएन विश्वविद्यालय और ला लगुना विश्वविद्यालय को धन्यवाद देना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
3-Ethoxy-1,2-propanediol Sigma Aldrich 260428-1G
Acetonitrile Merk 1006652500
Ammonium formate Sigma Aldrich 156264-1KG
AOAC 20i/s autosampler Shimadzu 221-723115-58
Automatic shaker MX-T6-PRO SCILOGEX 8.23222E+11
Balance OHAUS PA224
Centrifuge tubes, 15 mL Nest 601002
Centrifuge tubes, 2 mL Eppendorf 4610-1815
Centrifuge tubes, 50 mL Nest 602002
Centrifuge Z206A MERMLE 6019500118
Choper 2L Oster 2114111
Column SH-Rxi-5sil MS, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm Shimadzu 221-75954-30 MS GC column 
Dispensette 5-50 mL BRAND 4600361
DSC-18 Sigma Aldrich 52600-U
D-Sorbitol Sigma Aldrich 240850-5G
Ethyl acetate Merk 1313181212
GCMS-TQ8040  Shimadzu 211552
Graphitized carbon black Sigma Aldrich 57210-U
Injection syringe Shimadzu LC2213461800
L-Gulonic acid γ-lactone Sigma Aldrich 310301-5G
Linner splitless Shimadzu 221-4887-02
Magnesium sulfate anhydrus Sigma Aldrich M7506-2KG
Methanol Panreac 131091.12.12
Milli-Q ultrapure (type 1) water Millipore F4H4783518
Pipette tips 10 - 100 µL Biologix 200010
Pipette tips 100 - 1000 µL Brand 541287
Pipette tips 20 - 200 µL Brand 732028
Pipettes Pasteur NORMAX 5426023
Pippette Transferpette S variabel 10 - 100 µL BRAND 704774
Pippette Transferpette S variabel 100 - 1000 µL BRAND 704780
Pippette Transferpette S variabel 20 - 200 µL SCILOGEX 7.12111E+11
Primary-secondary amine Sigma Aldrich 52738-U
Shikimic acid Sigma Aldrich S5375-1G
Syringe Filter PTFE/L 25 mm, 0.45 µm NORMAX FE2545I
Triphenyl phosphate (QC) Sigma Aldrich 241288-50G
Vials with fused-in insert Sigma Aldrich 29398-U
Z-SEP+ Sigma Aldrich 55299-U zirconium oxide-based sorbent
Pesticides CAS registry number
4,4´-DDD Sigma Aldrich 35486-250MG 72-54-8
4,4´-DDE Sigma Aldrich 35487-100MG 72-55-9
4,4´-DDT Sigma Aldrich 31041-100MG 50-29-3
Alachlor Sigma Aldrich 45316-250MG 15972-60-8
Aldrin Sigma Aldrich 36666-25MG 309-00-2
Atrazine Sigma Aldrich 45330-250MG-R 1912-24-9
Atrazine-d5 (IS) Sigma Aldrich 34053-10MG-R 163165-75-1
Buprofezin Sigma Aldrich 37886-100MG 69327-76-0
Carbofuran Sigma Aldrich 32056-250-MG 1563-66-2
Chlorpropham Sigma Aldrich 45393-250MG 101-21-3
Chlorpyrifos Sigma Aldrich 45395-100MG 2921-88-2
Chlorpyrifos-methyl Sigma Aldrich 45396-250MG 5598-13-0
Deltamethrin Sigma Aldrich 45423-250MG 52918-63-5
Dichloran Sigma Aldrich 45435-250MG 99-30-9
Dichlorvos Sigma Aldrich 45441-250MG 62-73-7
Dieldrin Sigma Aldrich 33491-100MG-R 60-57-1
Diphenylamine Sigma Aldrich 45456-250MG 122-39--4
Endosulfan A Sigma Aldrich 32015-250MG 115-29-7
Endrin Sigma Aldrich 32014-250MG 72-20-8
EPN Sigma Aldrich 36503-100MG 2104-64-5
Esfenvalerate Sigma Aldrich 46277-100MG 66230-04-4
Ethion Sigma Aldrich 45477-250MG 563-12-2
Fenamiphos Sigma Aldrich 45483-250MG 22224-92-6
Fenitrothion Sigma Aldrich 45487-250MG 122-14-5
Fenthion Sigma Aldrich 36552-250MG 55-38-9
Fenvalerate Sigma Aldrich 45495-250MG 51630-58-1
HCB Sigma Aldrich 45522-250MG 118-74-1
Iprodione Sigma Aldrich 36132-100MG 36734-19-7
Lindane Sigma Aldrich 45548-250MG 58-89-9
Malathion Sigma Aldrich 36143-100MG 121-75-5
Metalaxyl Sigma Aldrich 32012-100MG 57837-19-1
Methidathion Sigma Aldrich 36158-100MG 950-37-8
Myclobutanil Sigma Aldrich 34360-100MG 88671-89-0
Oxyfluorfen Sigma Aldrich 35031-100MG 42874-03-3
Parathion-methyl Sigma Aldrich 36187-100MG 298-00-0
Penconazol Sigma Aldrich 36189-100MG 66246-88-6
Pirimiphos-methyl Sigma Aldrich 32058-250MG 29232-93-7
Propiconazole Sigma Aldrich 45642-250MG 60207-90-1
Propoxur Sigma Aldrich 45644-250MG 114-26-1
Propyzamide Sigma Aldrich 45645-250MG 23850-58-5
Pyriproxifen Sigma Aldrich 34174-100MG 95737-68-1
Tolclofos-methyl Sigma Aldrich 31209-250MG 5701804-9
Triadimefon Sigma Aldrich 45693-250MG 43121-43-3
Triflumizole Sigma Aldrich 32611-100MG 68694-11-1
α-HCH Sigma Aldrich 33377-50MG 319-86-8
β-HCH Sigma Aldrich 33376-100MG 319-85-7

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References

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QuEChERS विधि और गैस क्रोमैटोग्राफी-अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा एवोकैडो किस्मों में 45 कीटनाशकों का निर्धारण
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Varela-Martínez, D. A., González-Curbelo, M. Á., González-Sálamo, J., Hernández-Borges, J. Determination of 45 Pesticides in Avocado Varieties by the QuEChERS Method and Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. J. Vis. Exp. (202), e66082, doi:10.3791/66082 (2023).

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