ショ ウジョウバエ 胚の微小注射:開発中の胚への試薬の早期導入

- 生きたショウジョウバエ胚を集めて透明でないコリオンを取り除く。ガラスのカバースリップに、液体ヘプタンに溶解したテープ粘着剤であるヘプタン接着剤のラインを塗布する。

カバースリップを脱水室に移して胚を部分的に乾燥させる。これは注射中または注射後の細胞質漏れを防ぐ。次に、カバースリップを取り除き、酸素が胚に拡散することを可能にしながら、さらなる脱水を防ぐために、シャロカーボンオイルで胚を覆う。

マイクロインジェクションを行うためには、互換性のある顕微鏡でマイクロインジェクションシステムを使用します。目の部分を見て、注射液をプリロードした胚と針の両方を特定します。

このプロトコル例では、細胞分裂の生画像研究のためのショウジョウバエ胚微小注射のデモンストレーションを見る。

- カバースリップを設置する前に、ダブルスティッキーテープを展開してヘプタン接着剤を作り、100ミリリットルのボトルに入れます。

胚を準備する前に、注射の前に胚が入れられる脱水室を作りなさい。これを行うには、35ミリメートルの皿の一部を100ミリメートルのペトリ皿の中に入れて「テーブル」を作ります。

胚の準備を始めるには、まず1時間ごとに酵母でブドウジュースプレートを交換してケージから回収します。回収開始から約2時間後に胚を画像化する必要があります。

コットンチップのアプリケーターを使用して、カバースリップのラインにヘプタン接着剤の1つの層を入れてください。接着剤は粘性であってはならず、数秒で乾燥する必要があります。

最後に、カバースリップの横のスライドに二重粘着テープを貼ります。湿らせたブラシで、ブドウジュースプレートから胚を慎重に拾い、スライドの両面粘着テープの上に置きます。

次に、ツイーザーの半分を使用して、コリヨンが開くまで胚を二重粘着テープの上に転がします。コリヨンの上にそっと転がって胚を拾い上げ、1枚の間にくっつけてカバースリップのヘプタン接着剤の上に置き、カバースリップの長い側と平行に置きます。

10~20個の胚を1列に入れて、カバースリップを取り外し、脱水室に3~8分間置く。現地の湿度と注入する量に依存する時間は、次に真空グリースで金属室にカバースリップを置き、最後に、さらなる脱水を避けるために胚をハローカーボンオイルで覆う。

まず、16Xの目的の下で胚を見つける。胚を離れて、焦点面を動かさずに針を見つけなさい。針を中心にして、X方向またはY方向に動かさずに上に移動する。

針を開くには、カバースリップの端を視野に入れ、針がどこに置かれるかではなく、針を同じ焦点面に下げる。

今、胚を油に下げて、針から素敵な液体滴を得ることを確認してください。着実に胚を針に移し、胚に滴を注入し、胚を離して移動します。