Mikroinjektion av levande drosophilaembryon: Tidig leverans av reagenser till det utvecklande embryot

- Samla levande Drosophila-embryon och ta bort deras icke-transparenta koritioner. Applicera sedan på ett glaslock en rad heptanlim, som är tejplim upplöst i flytande heptan. För att kunna hantera de nu dechorionerade embryona, rikta försiktigt proverna i rad på limet.

Överför täcket till en uttorkningskammare för att delvis desiccate embryona. Detta förhindrar cytoplasmic läckage under eller efter injektioner. Därefter, ta bort täckglaset och täck embryona med halokarbonolja för att förhindra ytterligare uttorkning samtidigt som syre kan spridas in i embryona.

För att utföra mikroinjektionen, använd ett mikroinjektionssystem på ett kompatibelt mikroskop.

I exempelprotokollet kommer vi att se en demonstration av Drosophila embryo microinjection för levande bildstudier av celldelning.

- Innan du ställer in täckglaset, gör heptanlim genom att rulla ut dubbelstickig tejp och placera den i en 100 milliliter flaska. Tillsätt cirka 50 milliliter heptan, försegla flaskan och gunga den i flera dagar.

Innan du förbereder embryona, gör en uttorkningskammare som embryona kommer att placeras i före injektionen.

För att börja förbereda embryona, samla dem först från lekmannaburen genom att byta druvjuiceplattan med jäst varje timme.

Använd en bomullsspetsad applikator, lägg ett lager heptanlim i en linje på täcket. Limmet ska inte vara trögflytande och ska torka om några sekunder.

Slutligen, sätt en bit dubbelstickig tejp på rutschkanan bredvid täckglaset.

Använd sedan ena halvan av en pincett för att rulla embryona över den dubbelstickiga tejpen tills koringen bryts upp.

Placera 10 till 20 embryon i en rad. Ta bort täckglaset och placera det i uttorkningskammaren i tre till åtta minuter.

Hitta först embryona under ett 16X-mål. Flytta bort embryona och hitta nålen utan att flytta brännpunkten och flytta upp den utan att flytta den i X- eller Y-riktningen.

För att öppna nålen, sätt kanten på täckglaset i synfältet, men inte där en nål kommer att vara, och sänk nålen till samma brännplan.

Ta nu embryona i sikte. Sänk nålen i oljan och se till att få fina vätskedroppar från nålen.