Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Recoger embriones drosophila vivos y eliminar sus corionas no transparentes. Entonces, en un cubrecoche de vidrio, aplicar una línea de pegamento de heptano, que es adhesivo de cinta disuelto en heptano líquido.
Transferir el cubrecoches a una cámara de deshidratación para desesiccar parcialmente los embriones. Esto evitará fugas citoplasmáticas durante o después de las inyecciones.
Para realizar la microinyección, utilice un sistema de microinjección en un microscopio compatible. Al mirar a través de las piezas de los ojos, identificar tanto los embriones como la aguja precargada con solución de inyección.
En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración de microinyección embrionaria de Drosophila para estudios de imágenes en vivo de la división celular.
- Antes de configurar el clip, hacer pegamento de heptano desenrollando cinta adhesiva doble, y colocándolo en una botella de 100 mililitros.
Antes de preparar los embriones, hacer una cámara de deshidratación en la que se colocarán los embriones antes de la inyección. Para ello, poner una parte de una placa de 35 milímetros dentro de una placa de Petri de 100 milímetros para hacer una "mesa".
Para comenzar a preparar los embriones, primero recoglos de la jaula de puesta cambiando la placa de jugo de uva con levadura cada hora. Los embriones deben ser imaginedos unas dos horas después del inicio de la colección.
Usando un aplicador con punta de algodón, poner una capa de pegamento de heptano en una línea en el deslizamiento de cubierta. El pegamento no debe ser viscoso y debe secarse en unos segundos. Si es demasiado grueso, añadir más heptano.
Finalmente, coloque un trozo de cinta adhesiva doble en el tobogán junto a la cubierta. Con un cepillo humedecido, recoja cuidadosamente los embriones de la placa de jugo de uva y colóquelos en la cinta doble pegajosa en el tobogán.
A continuación, usa la mitad de una pinza para enrollar los embriones sobre la cinta doblemente pegajosa hasta que el coral se abra. Recoge el embrión enrollándolo suavemente sobre el coral, para que se pegue a la pinza, y colóquelo en el pegamento de heptano en el cubrecopi con el lado largo del embrión paralelo al lado largo de la pinza.
Colocar de 10 a 20 embriones en una fila. Retire el tubo de cubierta y colóquelo en la cámara de deshidratación durante tres u ocho minutos. El tiempo depende de la humedad local y la cantidad a inyectar.
Primero, encuentra los embriones bajo un objetivo 16X. Aleja los embriones y encuentra la aguja sin mover el plano focal.
Para abrir la aguja, coloque el borde de la cubierta en el campo de visión, pero no donde estará una aguja, y baje la aguja al mismo plano focal.
Ahora ponga los embriones a la vista. Baje la aguja al aceite y asegúrese de obtener gotas líquidas agradables de la aguja. Mueva constantemente el embrión a la aguja, inyecte una gota en el embrión y luego aleje el embrión.
