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Capitoli
- 00:05Titolo
- 02:28Fly Cup Preparation and Embryo Collection
- 04:00Embryo Homogenization and Clarification
- 04:48Microtubule Polymerization, Kinesin Binding and Differential Sedimentation of Microtubules and Kinesin
- 06:49Representative Kinesin Purification Results
- 08:29Conclusion
Il s'agit d'un protocole d'isoler actif Kinesin pleine longueur à partir de<em> Drosophila</em> Embryons pour une seule molécule d'études biophysiques. Nous montrons comment collecter les embryons, faire le lysat d'embryons, puis polymériser microtubules (MTs). Kinesin est purifié par l'immobiliser sur le SCM, la filature par les complexes Kinesin-MT, puis en relâchant la kinésine de la MT par addition d'ATP.
Tags
IsolationPurificationKinesinDrosophila EmbryosMotor ProteinsMicrotubulesSub-cellular LocationsNeurodegenerative DiseasesTherapeutic ApproachesATP HydrolysisPurification ProtocolGeneticaSingle-molecule Biophysical StudiesLaying CupsFemales Per CupOvernight CollectionsBleach DechorionatedHomogenizedLow Speed SpinHigh Speed CentrifugationClarified SupernatantGTP And TaxolPolymerize MTsImmobilized On Polymerized MTsATP AnalogAdenylyl ImidodiphosphateRoom TemperatureMicrotubule Pellet
