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Capitoli
- 00:05Titolo
- 02:28Fly Cup Preparation and Embryo Collection
- 04:00Embryo Homogenization and Clarification
- 04:48Microtubule Polymerization, Kinesin Binding and Differential Sedimentation of Microtubules and Kinesin
- 06:49Representative Kinesin Purification Results
- 08:29Conclusion
Dies ist ein Protokoll, um aktiv in voller Länge zu isolieren Kinesin aus<em> Drosophila</em> Embryonen für die Einzel-Molekül-biophysikalische Untersuchungen. Wir zeigen, wie man Embryonen zu sammeln, machen den Embryo-Lysat, und dann polymerisieren Mikrotubuli (MT). Kinesin ist durch Immobilisierung auf der MTS, Spinning Festlegung der Kinesin-MT-Komplexe, und dann die Freigabe der Kinesin aus dem MTS via ATP zusätzlich gereinigt.
Tags
IsolationPurificationKinesinDrosophila EmbryosMotor ProteinsMicrotubulesSub-cellular LocationsNeurodegenerative DiseasesTherapeutic ApproachesATP HydrolysisPurification ProtocolGeneticaSingle-molecule Biophysical StudiesLaying CupsFemales Per CupOvernight CollectionsBleach DechorionatedHomogenizedLow Speed SpinHigh Speed CentrifugationClarified SupernatantGTP And TaxolPolymerize MTsImmobilized On Polymerized MTsATP AnalogAdenylyl ImidodiphosphateRoom TemperatureMicrotubule Pellet
