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Capitoli
- 00:05Titolo
- 02:28Fly Cup Preparation and Embryo Collection
- 04:00Embryo Homogenization and Clarification
- 04:48Microtubule Polymerization, Kinesin Binding and Differential Sedimentation of Microtubules and Kinesin
- 06:49Representative Kinesin Purification Results
- 08:29Conclusion
Questo è un protocollo per isolare attiva Kinesin piena lunghezza da<em> Drosophila</em> Embrioni per la singola molecola studi biofisici. Mostriamo come raccogliere gli embrioni, fare il lisato embrione, e quindi polimerizzare i microtubuli (MTS). Chinesina è purificato per immobilizzare sul MTS, riducendo la velocità dei Kinesin-MT complessi, e quindi rilasciare il chinesina dalla MTS tramite aggiunta ATP.
Tags
IsolationPurificationKinesinDrosophila EmbryosMotor ProteinsMicrotubulesSub-cellular LocationsNeurodegenerative DiseasesTherapeutic ApproachesATP HydrolysisPurification ProtocolGeneticaSingle-molecule Biophysical StudiesLaying CupsFemales Per CupOvernight CollectionsBleach DechorionatedHomogenizedLow Speed SpinHigh Speed CentrifugationClarified SupernatantGTP And TaxolPolymerize MTsImmobilized On Polymerized MTsATP AnalogAdenylyl ImidodiphosphateRoom TemperatureMicrotubule Pellet
