Questo protocollo vengono utilizzati dei metodi per l'estrazione degli spermatozoi dai testicoli dei maschi e poi inseminazione topi femmina. Questa procedura è utile quando il tempo preciso è necessaria in studi sullo sviluppo e il lavoro transgenici.
Abstract
Roditori del genere Peromyscus (topi cervi) sono i mammiferi autoctoni più diffusi del Nord America. Specie Peromyscus sono utilizzati in una vasta gamma di ricerca tra cui tossicologia, epidemiologia, ecologia, comportamento, e gli studi genetici. Qui essi forniscono un utile modello per le dimostrazioni di inseminazione artificiale.
Metodi simili a quelli visualizzati qui sono già state utilizzate in diversi studi topo cervo, ancora nessun protocollo dettagliato è stato pubblicato. Qui mostriamo il metodo di base della fecondazione artificiale. Questo metodo comporta l'estrazione dei testicoli dal roditore, poi isolare gli spermatozoi dall'epididimo e vasi deferenti. Lo sperma maturo, ora in una miscela di latte, sono collocati nel tratto riproduttivo della femmina al momento della ovulazione. Fecondazione viene considerato come 0 giorni per tempi di sviluppo embrionale. Gli embrioni possono poi essere recuperate al momento desiderato-point e manipolata.
L'inseminazione artificiale può essere utilizzato in una varietà di specie di roditori in cui tempistica esatta embrione è fondamentale o difficile da ottenere. Questa tecnica è di vitale importanza per le specie o ceppi (tra cui la maggior Peromyscus) che non possono accoppiarsi immediatamente e / o dove l'accoppiamento è difficile da valutare. Inoltre, l'inseminazione artificiale provvede esatta tempistica per lo sviluppo embrionale sia in corso la mappatura dello sviluppo e / o di lavoro transgenici. Riduzione del numero di animali possono essere utilizzati in quanto la fecondazione è garantita. Questo metodo è stato fondamentale per promuovere il sistema Peromyscus, e si spera beneficiare gli altri.
Protocol
Inseminazione artificiale L'inseminazione artificiale è usato al posto di accoppiamenti naturali per aumentare le probabilità che tutte le femmine hanno avrà una gravidanza. 2 maschi è stato utilizzato per ogni 1 femmine superovulated o una femmina noti per essere in estro. L'epididimo caudae da maturare topi maschi sono stati collocati in una sospensione di latte 9% e affettato aperto con 18 aghi di calibro. Lo sperma è stato permesso di nuotare liberamente per qualche minuto e p…
Acknowledgements
Vorrei ringraziare Mike Dewey dal Centro Peromyscus patrimonio genetico per le sue informazioni preziose, la pazienza e la conoscenza sulla riproduzione dei roditori.