Los espermatozoides de cosecha y la inseminación artificial de los ratones

Summary

Este protocolo muestra los métodos para la extracción de los espermatozoides desde los testículos de los machos y luego inseminar a las hembras. Este procedimiento es útil cuando el tiempo exacto que se necesita en los estudios de desarrollo, así como el trabajo transgénico.

Abstract

Los roedores del género Peromyscus (ratón venado) son los mamíferos nativos más prevalente en América del Norte. Peromyscus especies se utilizan en una amplia gama de investigación, incluyendo la toxicología, la epidemiología, la ecología, comportamiento, y los estudios genéticos. Aquí un modelo útil para las manifestaciones de la inseminación artificial.

Métodos similares a los que se muestran aquí se han utilizado previamente en varios estudios el ratón venado, todavía no existe un protocolo detallado se ha publicado. Aquí se demuestra el método básico de la inseminación artificial. Este método consiste en la extracción de los testículos de los roedores, y luego aislar los espermatozoides del epidídimo y conducto deferente. El esperma maduro, ahora en una mezcla de leche, se colocan en el tracto reproductivo de la hembra en el momento de la ovulación. La fertilización se cuenta como el día 0 para el tiempo de desarrollo del embrión. Los embriones se pueden recuperar en el tiempo deseado de puntos y manipulado.

La inseminación artificial se puede utilizar en una variedad de especies de roedores en el momento exacto de embriones es crucial y difícil de obtener. Esta técnica es de vital importancia para las especies o cepas (incluyendo la mayoría de Peromyscus) que no pueden aparearse inmediatamente y / o donde el apareamiento es difícil de evaluar. Además, la inseminación artificial proporciona tiempo exacto para el desarrollo del embrión ya sea en la cartografía de progreso en el desarrollo y / o trabajo transgénico. Reducción del número de animales se pueden utilizar desde la fecundación está garantizada. Este método ha sido vital para fomentar el sistema de Peromyscus, y se espera que se benefician los demás.

Protocol

Inseminación artificial La inseminación artificial se utiliza en lugar de cruces naturales para aumentar las probabilidades de que todas las mujeres han de quedar embarazada. Dos hombres se utilizó para cada uno hembras superovuladas o una mujer sabe que está en celo. El epidídimo caudae de ratones machos maduros fueron colocados en una suspensión de leche 9% y el tajo con agujas de calibre 18. El esperma se les permite nadar libremente durante unos minutos y luego los epidídimos fueron…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Petri Dish	Tool	Fisher	08-772-30
18 gauge needle	Tool	Becton Dickinson	305195
Powdered milk	Reagent	Any Grocery store
1 ml syringe	Tool	National Scientific Company	S7510-1
Forceps	Tool	Roboz	RS-5060
Scissors	Tool	Roboz	RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline	Reagent	Gibco	14200-075
22 gauge blunt needle	Tool	Give to me