Le sperme de récolte et l'insémination artificielle des souris

Summary

Ce protocole illustre des méthodes pour extraire le sperme des testicules des mâles et ensuite inséminer les souris femelles. Cette procédure est utile lorsque l'heure précise est nécessaire dans les études de développement ainsi que les travaux transgéniques.

Abstract

Les rongeurs de l'Peromyscus genre (souris sylvestre) sont les plus répandus natif mammifères nord-américain. Peromyscus espèces sont utilisées dans un large éventail de recherche, y compris la toxicologie, l'épidémiologie, l'écologie, du comportement, et les études génétiques. Ici, ils fournissent un modèle utile pour les démonstrations de l'insémination artificielle.

Des méthodes similaires à celles affichées ici ont déjà été utilisées dans plusieurs études de souris sylvestres, mais aucun protocole détaillé a été publié. Ici nous démontrons la méthode de base de l'insémination artificielle. Cette méthode consiste à extraire les testicules du rongeur, puis à isoler les spermatozoïdes de l'épididyme et le canal déférent. Les spermatozoïdes matures, maintenant dans un mélange de lait, sont placés dans l'appareil génital de la femelle au moment de l'ovulation. La fertilisation est compté comme 0 jours pour la synchronisation du développement embryonnaire. Les embryons peuvent alors être récupérées au moment du point désiré et manipulés.

L'insémination artificielle peut être utilisé dans une variété d'espèces de rongeurs, où le calendrier exact est cruciale embryon ou difficiles à obtenir. Cette technique est vitale pour les espèces ou souches (y compris les plus Peromyscus) qui ne peut s'accouplent immédiatement et / ou lorsque l'accouplement est difficile à évaluer. En outre, l'insémination artificielle permet timing exact pour le développement de l'embryon, soit dans la cartographie des progrès de développement et / ou travaux transgéniques. Réduction du nombre d'animaux peut être utilisé depuis la fécondation est garanti. Cette méthode a été essentielle à la poursuite du système Peromyscus, et nous espérons bénéficier d'autres aussi.

Protocol

Insémination Artificielle L'insémination artificielle est utilisée à la place d'accouplements naturels pour augmenter les chances que toutes les femelles ont deviennent enceintes. 2 mâles a été utilisé pour chaque 1 femelles superovulées ou une femelle connue pour être en oestrus. Les épididymes caudae de souris mâles matures ont été placés dans une suspension de lait de 9% et tranchées ouvertes avec 18 aiguilles de calibre. Le sperme a été autorisée à nager libreme…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Petri Dish	Tool	Fisher	08-772-30
18 gauge needle	Tool	Becton Dickinson	305195
Powdered milk	Reagent	Any Grocery store
1 ml syringe	Tool	National Scientific Company	S7510-1
Forceps	Tool	Roboz	RS-5060
Scissors	Tool	Roboz	RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline	Reagent	Gibco	14200-075
22 gauge blunt needle	Tool	Give to me