がんの生産と活性酸素種の検出（ROS）
Summary
ここでは、細胞内の活性酸素種の存在をテストし、評価するための簡単な方法を提案する。
Abstract
活性酸素種は分子に損傷を与えるDNAとRNAの数が含まれており、タンパク質や脂質（脂質のperoxydation）を酸化する。 （OH – ）、hydrochlorous酸（HOCl）、およびヒドロキシルラジカルこれらの反応性分子は、酸素が 含まれており、H 2 O 2（過酸化水素）、NO（一酸化窒素）、O 2が含まれます– – （酸化物アニオン）を、ペルオキシナイトライト（尾さん） 。
酸化種のみならず病理学的状況（癌、/虚血再灌流、神経学的および心血管病変、感染症、炎症性疾患1、自己免疫疾患2、等…）の下だけでなく、細胞の代謝3のような生理的（非病理学的）な状況の間に生産されています、4。確かに、ROSは（増殖、細胞の活性化5、6、マイグレーション7等。）多くの細胞内シグナル伝達経路において重要な役割を果たしている。 ROSは有害です（それはその後と呼ばれています"酸化およびニトロソ化ストレス"）一般的に保護するスーパーオキシドジスムターゼ（SOD）とカタラーゼ（CAT）、グルタチオンペルオキシダーゼ（GPX）とグルタチオン（GSH）と酸化防止剤をアップレギュレートすることによってROSへの応答の細胞内区画と細胞内に多量に生産するときに無害な分子（すなわち水）に危険なフリーラジカルを変換することによって、それら。ビタミンCとEは、ROSのスカベンジャー（抗酸化物質）として記載されている。
フリーラジカルは、低量3で有益です。マクロファージと好中球性免疫応答は、ウイルス、病原体や腫瘍増殖8を阻害NOの産生および放出を伴います。 NOはまた、他のROSと反応していないので、またデトックス（ROSのスカベンジャー）としての役割を持っています。長時間運動9、10〜筋肉の適応のために重要である血流を調節するために船で最後にNOを作用しません。いくつかの出版物はまた、ROSはインシュリンのSENSに関与していることが示されているitivity 11、12。
ROS産生を評価するための多数のメソッドが使用可能です。この記事では、いくつかの、シンプルで速く、そして手頃なアッセイを提案する、これらのアッセイは、多くの出版物によって検証され、日常的に哺乳動物細胞でROSやその効果を検出するために使用されます。これらのアッセイのいくつかは複数のROSを検出しながら、他は単一のROSを検出する。
Protocol
Discussion
このような炎症性疾患、がん、虚血/再灌流を行い、そして、放射線や化学療法などの治療法として、いくつかの病的状態は（すなわちシスプラチン）ROSの過剰産生を誘導する。従って、ROSレベルを検出および測定することは、多くの基本的な、前臨床および臨床研究において重要である。しかし、ROSは非常に短い半減期を持っていると検出するために複雑にすることができます。ここで、我…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国立衛生研究所（CA142664）によってサポートされていました。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 5-(and-6)-carboxy-2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (carboxy-DCFDA) | Molecular Probes | C369 | control |
| carboxy-H2DCFDA | Molecular Probes | C400 | |
| Sulfanilamide | Sigma | S9251-100G | |
| N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride | Sigma | N9125-10G | |
| Nitrite standard | Sigma | 237213-100G | |
| GSH/GSSG-Glo Assay | Promega | V6612 | To quantify oxidized, reduced or oxidized/reduced glutathione |
References
- Guzik, T. J., Korbut, R., Adamek-Guzik, T. Nitric oxide and superoxide in inflammation and immune regulation. J Physiol Pharmacol. 54, 469-487 (2003).
- Perl, A., Gergely, P., Banki, K. Mitochondrial dysfunction in T cells of patients with systemic lupus erythematosus. Int Rev Immunol. 23, 293-313 (2004).
- Valko, M., Leibfritz, D., Moncol, J., Cronin, M. T., Mazur, M., Telser, J. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int J Biochem Cell Biol. 39, 44-84 (2007).
- Droge, W. Free radicals in the physiological control of cell function. Physiol Rev. 82, 47-95 (2002).
- Nakamura, K., Yube, K., Miyatake, A., Cambier, J. C., Hirashima, M. Involvement of CD4 D3-D4 membrane proximal extracellular domain for the inhibitory effect of oxidative stress on activation-induced CD4 down-regulation and its possible role for T cell activation. Mol Immunol. 39, 909-921 (2003).
- Los, M., Droge, W., Stricker, K., Baeuerle, P. A., Schulze-Osthoff, K. Hydrogen peroxide as a potent activator of T lymphocyte functions. Eur J Immunol. 25, 159-165 (1995).
- Deem, T. L., Cook-Mills, J. M. Vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) activation of endothelial cell matrix metalloproteinases: role of reactive oxygen species. Blood. 104, 2385-2393 (2004).
- Pacher, P., Beckman, J. S., Liaudet, L. Nitric oxide and peroxynitrite in health and disease. Physiol Rev. 87, 315-424 (2007).
- Griendling, K. K., Sorescu, D., Lassegue, B., Ushio-Fukai, M. Modulation of protein kinase activity and gene expression by reactive oxygen species and their role in vascular physiology and pathophysiology. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 2175-2183 (2000).
- Loh, K., Deng, H., Fukushima, A., Cai, X., Boivin, B., Galic, S., Bruce, C., Shields, B. J., Skiba, B., Ooms, L. M., Stepto, N., Wu, B., Mitchell, C. A., Tonks, N. K., Watt, M. J., Febbraio, M. A., Crack, P. J., Andrikopoulos, S., Tiganis, T. Reactive oxygen species enhance insulin sensitivity. Cell Metab. 10, 260-272 (2009).
- Goldstein, B. J., Mahadev, K., Wu, X. Redox paradox: insulin action is facilitated by insulin-stimulated reactive oxygen species with multiple potential signaling targets. Diabetes. 54, 311-321 (2005).
