암의 생산 및 반응 산소 종의 감지 (ROS)
Summary
여기 우리는 세포의 반응 산소 종의 존재를 테스트하고 평가하는 간단한 방법을 제안합니다.
Abstract
반응 산소 종은 분자의 숫자를 포함 피해 DNA와 단백질 및 lipids (지질 peroxydation)을 RNA와 산화. 이러한 반응 분자가 산소를 포함하고 H 2 O 2 (과산화수소), NO (질산 산화물), O 2 포함 – (산화물 음이온), peroxynitrite (ONOO -), hydrochlorous 산성 (HOCl)과 히드록실를 라디칼 (OH -) .
산화 종뿐만 아니라 병적인 상황 (암 / 허혈성 reperfusion, neurologic 및 심혈관 pathologies, 전염성 질환, 염증성 질환 1, 면역 질환 2, 등 …)에 따라뿐 아니라 세포의 대사 3으로 생리 (비 병적인) 상황 동안 생산됩니다 , 4. 사실, ROS는 (확산, 세포 활성화 5, 6, 7 마이 그 레이션 등.) 수많은 세포 신호 경로에서 중요한 역할을 재생합니다. ROS가 해로운 수 있습니다 (이것은 다음이라고합니다세포내 구획과 세포에 높은 금액에서 생산되는 "산화와 nitrosative 스트레스") 일반적으로 초과 산화물의 dismutase (잔디)와 카탈 라 아제 (CAT), 글루타티온 퍼옥시데이즈 (GPX)와 보호 글루타티온 (GSH)와 같은 산화 억제제를 upregulating하여 ROS에 대응 무해한 분자 (예 : 물)에 위험한 자유 래디 칼을 변환하여. 비타민 C와 E는 ROS의 청소부 (산화 억제제)로 설명되었습니다.
자유 래디 칼은 낮은 금액 3 유용합니다. 대식 세포와 neutrophils – 중재 면역 반응은 바이러스, 병원균과 종양 증식 억제 8 NO의 생산 및 릴리스가 필요합니다. 어떠한 또한 다른 ROS와 반응하지 않으며 따라서, 또한 detoxifier (ROS의 청소)로 역할을하고 있습니다. 오랫동안 운동 9, 10 근육의 적응을위한 중요한 혈액 흐름을 조절하기 위해 선박에 마지막으로 어떠한 행위를하지 않습니다. 여러 출판물은 또한 ROS가 인슐린 SENS에 관련된 것을 증명itivity 11, 12.
ROS 생산을 평가하는 많은 방법이 있습니다. 이 문서에서 우리는 몇 가지 간단하고 신속하고 저렴한 assays을 제안, 이러한 assays는 많은 출판물에 의해 검증되어 있고 정기적으로 포유 동물 세포에 ROS 또는 그 효과를 감지하는 데 사용됩니다. 이러한 assays 중 일부는 여러 ROS를 감지하는 동안, 다른 사람들은 단지 하나의 ROS를 감지합니다.
Protocol
Discussion
같은 염증성 질환, 암, 국소 빈혈 / reperfusion하고, 또한 방사선 또는 화학 요법으로 치료 등 여러 병적인 상황 (즉, cisplatin) ROS의 생산 과잉을 유발. 따라서, 검출 및 ROS의 수준을 측정하는 여러 기본 사전 임상 및 임상 연구에 중요합니다. 그러나, ROS는 매우 짧은 절반 생활을하고 감지하는 복잡한 수 있습니다. 여기, 우리는 포유 동물 세포에 자유 라디칼 생산의 검출을 위해 정기적으로 사용하고 널…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 건강의 국립 연구소 (CA142664)에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 5-(and-6)-carboxy-2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (carboxy-DCFDA) | Molecular Probes | C369 | control |
| carboxy-H2DCFDA | Molecular Probes | C400 | |
| Sulfanilamide | Sigma | S9251-100G | |
| N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride | Sigma | N9125-10G | |
| Nitrite standard | Sigma | 237213-100G | |
| GSH/GSSG-Glo Assay | Promega | V6612 | To quantify oxidized, reduced or oxidized/reduced glutathione |
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