Transgenik Balık Sağlam Beyin Tespit Edilen nöronlar Elektrik Aktivitesi Kayıt
Summary
Bu video, karmaşık nöral devreleri koruyan bir bütün beyin hazırlık, belirlenen tek nöronlardan elektriksel aktivite kayıt nasıl gösterecektir. Biz gonadotropin salgılatıcı hormon (GnRH) nöronlar genetik sağlam beyin hazırlanmasında tanımlama için bir floresan protein ile etiketlenmiş edildiği transgenik balık kullanabilirsiniz.
Abstract
Karmaşık davranışlar düzenleyen nöral devrelerin hücre fizyolojisi anlayışı bu iş CNS sinir devresi bozulmadan kalır sağlam bir beyin hazırlanmasında yapılabilir hangi model sistemler kullanılarak büyük ölçüde geliştirilmiştir. Biz gonadotropin salgılatıcı hormon (GnRH) nöronlar genetik sağlam beyinde tanımlanması için yeşil flüoresan protein ile etiketlenmiş edildiği transgenik balık kullanabilirsiniz. Balık GnRH nöron birden fazla nüfusa sahip ve işlevleri onların beyindeki yeri ve 1 ifade ettiği GnRH gen bağlıdır. Biz transgenik Medaka balık bozulmamış beyin (Şekil 1B ve C) kullanarak koku ampuller ile ilişkili terminal sinirler (TN) bulunan GnRH3 nöronlar bizim gösteri odaklanmıştır. Çalışmalar Medaka TN-GnRH3 nöronlar merkezi sinir sistemi ile dış çevreden bir bilgi verici olarak hareket eden, nöromodülatör olduğunu göstermektedir; they gibi tanınmış hipotalamik GnRH1 nöronlar 2, 3 yapmak. TN-GnRH3 nöronların spontan aksiyon potansiyeli ateşleme tonik desen içsel bir özellik 4-6, frekans, hipofiz-gonadal fonksiyonları düzenleyen doğrudan bir rol oynamaz hangi conspecifics 2 ve nöropeptid kisspeptin 1 5 ila görsel ipuçları ile modüle edilir. Bu video, TN-GnRH3 nöronların nasıl nöronlar belirlemek ve tüm beyin kendi elektriksel aktivite izlemek için size göstermek için gelişmiş yeşil flüoresan protein 7 bağlantılı Gnrh3 promotor bölgesinde içeren bir transgen ifade edildiği transgenik Medaka istikrarlı bir satırını kullanın Hazırlık 6.
Protocol
Representative Results
Discussion
GnRH 3: GFP transgenik balıklar nöronal entegrasyon ve doğrudan ve dolaylı olarak üreme 3, 8-10 dahil her ikisi de davranışları merkezi kontrol düzenleme altında yatan nörofizyolojik mekanizmaları incelemek için benzersiz modelleri sağlar. Bu model sisteminin önemli avantajlarından biri, GFP ifade eden birçok GnRH3 nöronların sinir devreleri 6, 9, 11, 12 (Şekil bozmadan elektrofizyolojik kayıt için nöronlara nispeten kolay erişim sağlayan, beyin ve…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Teknik yardım için Dr Meng-Çene Lin ve Bayan Yuan Dong teşekkür ederim. Bu çalışma Sağlık HD053767 Ulusal Enstitüsü (NLW için fason), bir hibe ile ve California-Los Angeles Araştırma, Üniversitesi (NLW) için Rektör Yardımcısı fizyolojisi ve Office Bölümü'nden fonları tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope | Olympus | BX50W (Upright) | |
| Amplifier | Axon Instruments | Axoclamp 200B | |
| A-D converter | Computer Interference Corp. | Digidata ITC-18 | |
| Cooled CCD camera | PCO Computer Optics | Sensicam | |
| Xenon lamp | Sutter Instruments Co. | ||
| GFP filter set | Chroma Technologies | ||
| Imaging Software | Intelligent Imaging Innovations | Slidebook software | |
| Electrophysiology Data Acquisition Software | Axon Instruments | Axograph software | |
| Electrophysiology Data Acquisition Software | AD Instruments Inc. | PowerLab | |
| Headstage for electrophysiology | Axon Instruments | CV 203BU | |
| Micromanipulator | Sutter Instrument Co | MP-285 | |
| Recording Chamber Platform | Warner Instrument Corp. | P1 | |
| Recording Chamber | Warner Instrument Corp. | RC-26G | |
| Electrode Puller | Sutter instruments | P87 | |
| Filament for electrode puller | Sutter Instruments | FB330B | 3.0 mm wide trough filament |
| 1.5 mm glass capillaries | World Precision Instruments | 1B150-4 | Microelectrode for recording |
| Syringe | Becton Dickinson | 309586 | 3 ml |
| MS-222 | Sigma | E10521-10G | Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt |
| Fish saline | mM: 134 NaCl; 2.9 KCl; 2.1 CaCl2; 1.2 MgCl2; 10 HEPES | ||
| Electrode solution (loose-patch) | mM: 150 NaCl; 3.5 KCl; 2.5 CaCl2; 1.3 MgCl2; 10 HEPES; 10 glucose | ||
| Electrode solution (whole-cell patch) | mM: 112.5 K-gluconate; NaCl; 17.5 KCl; 0.5 CaCl2; 1 MgCl2; 5 MgATP; 1 EGTA; 10 HEPES; 1 GTP; 0.1 leupeptin;10 phospho-creatine |
References
- Kah, O., Lethimonier, C., Lareyre, J. J. Gonadotrophin-releasing hormone (GnRH) in the animal kingdom. J. Soc. Biol. 198 (1), 53-60 (2004).
- Ramakrishnan, S., Wayne, N. L. Social cues from conspecifics alter electrical activity of gonadotropin-releasing hormone neurons in the terminal nerve via visual signals. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 297 (1), R135-R141 (2009).
- Abe, H., Oka, Y. Mechanisms of neuromodulation by a nonhypophysiotropic GnRH system controlling motivation of reproductive behavior in the teleost. 57 (6), 665-674 (2011).
- Oka, Y. Tetrodotoxin-resistant persistent Na+ current underlying pacemaker potentials of fish gonadotrophin-releasing hormone neurones. J. Physiol. 482 (Pt. 1), 1-6 (1995).
- Zhao, Y., Wayne, N. L. Effects of Kisspeptin1 on Electrical Activity of an Extrahypothalamic Population of Gonadotropin-Releasing Hormone Neurons in Medaka. PLoS One. 7 (5), e37909 (2012).
- Wayne, N. L., et al. Whole-cell electrophysiology of gonadotropin-releasing hormone neurons that express green fluorescent protein in the terminal nerve of transgenic medaka (Oryzias latipes). Biol. Reprod. 73 (6), 1228-1234 (2005).
- Okubo, K., et al. Forebrain gonadotropin-releasing hormone neuronal development: insights from transgenic medaka and the relevance to X-linked Kallmann syndrome. Endocrinology. 147 (3), 1076-1084 (2006).
- Okubo, K., et al. A novel form of gonadotropin-releasing hormone in the medaka, Oryzias latipes. Biochem. Biophys. Res. Commun. 276 (1), 298-303 (2000).
- Ramakrishnan, S., et al. Acquisition of spontaneous electrical activity during embryonic development of gonadotropin-releasing hormone-3 neurons located in the terminal nerve of transgenic zebrafish (Danio rerio). Gen. Comp. Endocrinol. 168 (3), 401-407 (2010).
- Abraham, E., et al. Targeted gonadotropin-releasing hormone-3 neuron ablation in zebrafish: effects on neurogenesis, neuronal migration, and reproduction. Endocrinology. 151 (1), 332-340 (2010).
- Wayne, N. L., Kuwahara, K. Beta-endorphin alters electrical activity of gonadotropin releasing hormone neurons located in the terminal nerve of the teleost medaka (Oryzias latipes. Gen. Comp. Endocrinol. 150 (1), 41-47 (2007).
- Oka, Y. Three types of gonadotrophin-releasing hormone neurones and steroid-sensitive sexually dimorphic kisspeptin neurones in teleosts. J. Neuroendocrinol. 21 (4), 334-338 (2009).
- Molleman, A. . Patch Clamping: An Introductory Guide To Patch Clamp Electrophysiology. , (2003).
