우리는 설치류의 주요 뇌 혈관의 영구 폐색에 대한 높은 재현성 방법을 설명합니다. 이 기술은 거의 주변의 손상을 최소화 혈액 손실, 장기 생존의 높은 속도, 인간의 임상 인구에 상응하는 일관된 경색 볼륨을 수행 할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
뇌졸중은 사망, 장애, 사회 경제적 손실 전세계의 주요 원인이다. 모든 뇌졸중의 대부분은 혈액의 흐름이 중단 (허혈) 1의 결과. 중대 뇌동맥 (MCA)은 피질 (2)의 측면 표면에 혈액의 대다수를 제공하는 인간의 뇌졸중 3의 가장 일반적인 사이트입니다, 그 영토 내에서 허혈은 광범위한 장애 또는 사망 1,4,5 될 수 있습니다. 허혈성 뇌졸중의 생존자는 종종 손실이나 운동 기능의 장애, 감각 결손, 및 경색을 겪고 있습니다. 뇌졸중의 이러한 주요 특성을 포착함으로써 효과적인 치료를 개발하기위한 노력의 일환으로, 강조의 큰 거래는 MCA 허혈 동물 모델에 배치됩니다.
여기에 우리가 영구적으로 대뇌 피질의 표면의 혈관을 폐색하는 방법을 제시한다. 우리는 가장 일반적인 유형, 위치 및 outcom를 모델링하는 관련 혈관 폐색의 예를 사용하여이 방법을 제시합니다인간 뇌졸중, 영구 중간 대뇌 동맥 폐색 (pMCAO)의 전자. 이 모델에서, 우리는 수술 성인 쥐에서 MCA를 노출하고 이후 선박의 이중 합자와 절개를 통해 막다. 이 pMCAO은 MCA 피질 영역, 피질의 큰 부분 모두에서 허혈을 유발 MCA의 근위 대뇌 피질의 분기를 차단합니다. 폐색이 방법은 피질의 작은 지역을 대상으로 더 많은 초점 허혈을 달성하기 위해 대뇌 피질 혈관의 더 많은 말초 부분을 폐색하는 데 사용할 수 있습니다. pMCAO의 주요 단점은 작은 개두술가 MCA에 액세스하는 데 필요한대로 수술은 최소한의 조직 손상이 결과이지만, 다소 침습적이다입니다. 이 모델의 주된 장점은, 그러나,이다 : 폐색의 사이트가 잘 혈류 감소의 정도, 일관된 기능과 손상이 빠르게 발생하는 신경이다, 정의, 경색 크기는 일관성이 있으며 생존의 높은 속도에 대한 장기 허용 장기 만성 평가.
서론
효과적으로 인간의 허혈성 뇌졸중을 모방 허혈 상태를 유발하기 위해 여러 동물 스트로크 모델은 널리 경색의 볼륨 결과를 변화와 함께 사용된다. photothrombotic 모델에서 뇌가 주위 조직 6에서 광 화학적 응집, 조사 혈관의 막힘, 그리고 허혈의 결과로, 감광성 물질 (예 : 로즈 벵골 등)을 정맥 주사 한 후 레이저 조명을 사용하여 그대로 두개골을 통해 조사된다 7. Photothrombosis는 경색의 아주 작은, 고립 된 지역에서 발생할 수 있습니다 일반적으로 모델링 "미니 뇌졸중"또는 "마이크로 스트로크"의 의미로 사용됩니다.
특히 중대 뇌동맥 (MCA)에서 허혈성 뇌졸중을 유도에 대한보다 광범위하게 채택 된 기술은, 필라멘트가 수술 외 경동맥에 도입 팁 MCA의 기본을 폐색까지 진행되는 강내 모노 필라멘트 모델 8입니다. PRI강내 필라멘트 폐쇄 메리 도전은 높은 사망률 9 (MCA는 3 시간, 뇌졸중 연구를위한 중요한 시점에 대한 가려 70 %)입니다. 방법으로 다른 문제는 가능한 지주막 하 출혈, 불완전 폐색, 및 가변 경색 볼륨 10,11 포함되어 있습니다. 이 모델은 피질과 subcortically ....
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프로토콜
1. 시작하기 : 필요한 수술 도구
그림 4 참조
- 치과 드릴 (KAVO 치과 장비 모델 : UMXL-TM), 2 비트 드릴, 3 비트 드릴
- 두 개의 ~ 30 게이지 피하 주사 바늘
- 톱니 핀셋 곡선 팁 선택 사항 (도움이되지만 필수적이지 수 있습니다)
- 두 개의 좋은 팁 핀셋
- 전선 절단기
- 봉합 실
- 마이크로 가위
2. 외과 창 만들기
- 마취 절차 NIH 가이드 라인을 준수하고 UC 어바인 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 실험 대상은 2백95~4백그램 남성의 Sprague Dawley 계 흰쥐 (찰스 리버 연구소, 윌 밍턴, MA, USA) 다음과 같은 마취 절차가 사용되어야합니다 :
- H에서 아트로핀의 근육 주사 (0.05 ㎎ / ㎏, BW) 다음에 나트륨 펜 토바 비탈 알약 (55 ㎎ / ㎏ BW)와 쥐의 복강 주사IND 다리, 그리고 피하 물에 5 % 포도당의 관리 3.0 CC.
- 펜 토바 비탈 나트륨 (27.5 ㎎ / ㎏, BW) 주사 필요에 따라 보충....
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결과
선박의 성공적인 폐색 다른 혈액 흐름 이미징 기술 중 영상 (LSI)를 반점 레이저를 이용하여 확인할 수 있습니다. MCA의 주요 대뇌 피질 분지에서 혈액 흐름 레코딩 시스템의 소음과 기술의 민감도 수준에 따라 ~ 25 기준선 % 이하 다음 폐색에 드롭해야한다. MCA 폐색 전후 MCA의 대뇌 피질 분기의 세그먼트의 대표 LSI 이미지의 그림 3을 참조하십시오. 설명 폐색 기술은 모두 대뇌 피질의 MCA 지점을 차단, M1 세그먼트에서 MCA에 적용, 감각 자극 ~ 5 시간 다음 폐색을 방지 할 때, 그 결과는 28.4의 대뇌 피질 경색는 ± 2.4 mm 3 (대표 코로나 슬라이스 2,3,5 - 트리 페닐-tetrazolium 염화 [TTC] 기술 손상 스테인드 뇌, 그림 2 참조; 창백한 흠 지역) 25 경색에 해당합니다.
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토론
이 프로토콜은 설치류 피질에서 허혈을 유발하고, 실험 과목 최소한의 주변 영향이를 위해 개발되었습니다. 이중 폐색과 절개 방법은 용기가 영구적으로 폐색 된 것을 시각적으로 확인 할 수 있습니다, 과도한 침입이나 조직의 손상없이, 높은 생존율을 수행 할 수 있습니다. 이 폐색 프로토콜은 특정 대뇌 피질의 도메인 내에서 허혈을 유도하기 위해 개두술을 통해 액세스 할 수있는 대뇌 피질의 선박에 적용 할 수 있습니다. 동물이 같은 기능 영상 또는 전기 생리학 녹음 등 다양한 조사 기법의 동시 사용을 허용 정위 장치에있는 동안 또한, 이러한 폐색을 수행 할 수 있습니다. 이 안에 피사체 조사 등 실험적인 디자인의 넓은 범위에 적용이 폐색 기술을합니다. 예를 들어, 평가는 arter 주변 장소에 봉합 초기에 실시 할 수있다Y는 (하지만 전에 봉합을 확보 끊어 버렸네까지), 허혈성 발병시 및 사후 폐색 시점에서 요구.
이 폐색의 성공적인 실행은 두 가지 중요한 단계에 달려있다. 대상 선박.......
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공개 사항
저자는이 시점에서 공개하는 게 없다.
감사의 글
이 작품은 미국 심장 협회 Predoctoral 원정대 788808-41910, NIH-NINDS NS-066001과 NS-055832, 연구 NIH 연수 보조금 1T32DC010775-01 청각위한 센터에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 엑스트라 파인 그레이프 펜치 - 0.5mm 팁 약간의 곡선 (1) | 파인 사이언스 툴 | 11151-10 | |
| 세라믹 코팅 듀몽 #5 펜치 (2) | 파인 사이언스 툴 | 11252-50 | |
| 엑스트라 파인 본 가위, 스트레이트 (1) | 파인 사이언스 툴 | 14084-08 | |
| 라운드 3/8 (16 mm) 봉합 바늘 | 파인 사이언스 툴 | 12050-02 | |
| 6-0 브레이디드 실크 봉합사 | 파인 사이언스 도구 | NC9071061 Harvard Apparatus 번호:510461 | |
| 30 게이지 바늘, ½ " 길이 | 파인 사이언스 도구 | NC9867376 번호: ZT-5-030-5-L/COL |
참고문헌
- Caplan, L. R. Caplan's Stroke, A Clinical Approach. , 4th edn, Saunder's & Elsevier. (2009).
- Blumenfeld, H. Neuroanatomy Through Clinical Cases. , Sinauer Associates. (2002).
- Roger, V. L., et al. Heart Disease and Stroke Statistics--2011 Update: A Report From the American Heart Assoc....
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재인쇄 및 허가
