지방 조직의 종점에 이식 캡슐화 열 발생 Preadipocytes

요약

여기에서는 복강 내 지방 조직에서 열 생산을 위해 지질을 소비하고 비만 마우스의 에너지 소산을 증가시키는 이화 세포의 캡슐화 프로토콜을 제시합니다.

초록

세포 캡슐화 반투막 내에 생존 세포를 포획하기 위해 개발되었다. 접목 캡슐화 된 세포를 장기 생존율을 달성하기 위해 처리 된 숙주의 조직에 저 분자량 대사를 교환 할 수있다. 반투막 면역계에 의해 거부를 피하기 위하여 캡슐화 된 세포를 접목 허용한다. 캡슐화 과정은 인슐린과 같은 생체 활성 화합물, 기타 호르몬, 사이토 카인의 방출을 제어 할 수 있도록 설계되었다. 여기서 우리는 비만 마우스의 복강 지방 조직에 열 발생과 에너지 손실 (열 발생)에 대한 지질 소비 이화 세포 캡슐화하는 방법을 설명한다. 열 발생 이화 세포의 캡슐화는 비만의 예방 및 치료에 잠재적으로 적용 가능하고 2 형 당뇨병있다. 이화 셀들의 또 다른 잠재적 인 애플리케이션은 알코올 대사 또는 기타 독성 및 환경 오염 물질의 해독을 포함 할 수있다.

서론

만성 질환 ^1의 증가 빈도는 치료 세포 인구 ^2의 이식에 대한 연구를 자극했다. Syngenic 동종 또는 줄기 세포는 이러한 애플리케이션 ^2에 대한 가장 일반적으로 사용되는 세포 유형이다. 그러나 이러한 치료는 이식 후 분화 줄기 세포의 이동의 제어를 허용하지 않는 효율적인 비용이되지 않습니다. 유익한 기능을 가진 유전자 변형 세포의 이식은 많은 질병의 치료 개선을 기대하고있다. 그러나, 유전자 세포 변형이 호스트의 면역 시스템에 의해 인식되고, 따라서, 이러한 치료는 면역 ^{3이 필요합니다.} 인슐린 생성 세포의 캡슐화 박사 창 ^(4)에 의해 개발되었다. 기술은 염화칼슘 수용액에 침지 알긴산 방울 세포의 캡슐화에 기초한다. 알긴산 분자 (G) (M) 만누 및 guluronic 산 구성 및 CA로 연결 될 수 ²⁺. 겔화 후, 비드를 폴리 -L- 라이신 (PLL) 용액에 현탁된다. 이 단계에서, PLL은 캡슐의 멤브레인을 설정 알지네이트 분자에 G와 M에 결합한다. 캡슐의 막의 다공성은 M 및 PLL 농도, 인큐베이션 시간, 온도 변화에 의해 조절 될 수있다. PLL의 결합도 유형과 알긴산의 농도에 따라 달라집니다. ^칼슘 이온과 가교 알긴산 행렬, 생리 학....

프로토콜

연구 프로토콜은 오하이오 주립 대학 윤리위원회에 의해 승인되었다. 동물 실험은 IACUC 프로토콜에 의해 승인되었다. 모든 절차는 층류와 레벨 2 바이오 안전성 캐비닛에서 수행 하였다. 우리는 모든 표준 안전 요구 사항 및 절차를 따랐다. 마이크로 캡슐의 제조를위한 마이크로 캡슐화 ^{기술은, (18) (17)} 기재된 바와 같이 수행되었다.

재료 1. 준비

1. 멸균 생리 식염수 (물 중 0.9 % 염화나트륨)에 2 %의 알긴산 나트륨 용액 10 ㎖를 준비한다. 생리 식염수 0.05 % PLL 솔루션을 준비합니다. 전날 이러한 솔루션을 준비하고 밤새 교반. 사용하기 전에 0.22 μm의 필터를 사용하여 솔루션을 필터링합니다.
2. 50 mM의 시트르산 나트륨 0.9 % 염화나트륨 용액에 100 mM의 _{CaCl2를 준비하고이를} 오토 클레이브.
3. 모든 솔루션, 바늘, 전극 및 비커를 압력솥. 막힘 방지하기 와이어 철저히 바늘.
4. (102 마이크로 캡슐이 아니라 모든 ^CM이 필요한 캡슐 ⁽¹⁸⁾ 당 500 세포가 약가된다) 캡슐에 사용할 세포의 적절한 양을 결정합니다. 이백만 세포 당 알긴산 나트륨 1 ㎖를 사용....

결과

도 1은 마이크로 비드 제조의 모든 단계가 현미경으로 제어 될 수 있음을 나타낸다.도 2a는 공동 배양하는 방법을 지방 세포를 캡슐화 된 세포의 단층으로 도시한다.도 2b는 지방 세포 / 마이크로 공동 배양을 이용하여 정량적 연구의 대표적인 예이며 그 지방 세포는 웨스턴 블롯을 이용하여 분석 하였다 제 5 해물에 설명했다. 캡슐화 된 세포는 본 실험에서 분석되지 않았다. 1,000 희석 차 ATGL와 β-액틴 항체는 1에서 사용되었다. ATGL의 비율은 β - 굴지의 정보는 다음의 제품에 3 개의 독립적 인 실험으로 평균 SD를 표시됩니다. 유사 공동 배양 방법은 공동 배양에 캡슐화 세포 및 지방 세포 상호 작용의 효과를 mRNA를 분석하고 연구하는데 사용될 수있다. - / - 지방 세포 encapsula에 비해 지방 세포에서 ATGL 리파제 및 지질 분해 ^(18)의 훨씬 높은 수준을 유도 열 발생 <.......

토론

다양한 건조 방법, 압출, 및 에멀젼을 포함하여 ¹⁹ 세포를 캡슐화하는데 사용되어왔다. 이 방법에서는, 알기 네이트 비드는 PLL로 코팅 및 알지네이트 코어 캡슐화를 완료 용해되고, 바늘 통해 압출된다. 이 방법이 수년 동안 사용되었지만, 원하는 크기와 형상으로 구형 비드의 형성은 여전히​​ 도전. 캡슐의 크기는 알긴산 나트륨 용액, 압출기는 직경 바늘 끝과 _CaCl2를 용액 ⁽²⁰⁾ 사이의 거리의 점도에 크게 의존한다. 니들 팁과 _CaCl2를 용액의 표면 사이에 더 짧은 거리가 작은 구슬 일어난다된다. 설명 프로토콜은 기공 (<32 kD의)와 APL의 생산 효율을 높일 수있다. 기공 크기는 실험적으로 미리 ¹⁸ 바와 같이 형광 면역 글로불린 (> 32 kD의) 형광 작은 펩티드를 사용하여 테스트 할 수있다. 이이야기공의이지는 2 주 동안 적어도 팔십일 ¹⁸ 지방 조직으로 주입 한 후 생체 내.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
캡슐화 장치 (VAR V1)	Nisco	LIN-0042	없음
KD 과학 주사기 펌프	KD 과학	780100Y	없음
올림푸스 현미경	Olympus Optical	IX70-S8F2	없음
알긴산 나트륨	시그마	MKBP8122V	없음
폴리-L-라이신 하이드로 브로마이드 (PLL)	시그마	020M5006V	없음
염화칼슘	그마	SLBJ2662V	없음
구연산 나트륨 삼염기 이수화물	시그마	030M0200	없음
염화나트륨	시그마	SLBD2595V	없음
Mini-PROTEAN TGX Gels	Bio-Rad	456-1093	없음
ATGL 1차 항체(토끼에서)	Cell Signaling	2138S	없음
2차 항체(토끼 방지)	LI-COR	926-68071	없음
Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) buffer	Boston BioProducts	D25Y6Z	None
Phosphate buffered 식염수 (PBS)	Sigma	RNBD2893	없음
Trypsin	Gibco	25200-056	없음
Cortizone 10 anti-itch ointment	Cortizone 10	C4029138	없음
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)	Gibco	11965-092	None
Newborn calf serum (CS)	Sigma	N4762	None
Fetal bovine serum (FBS)	Sigma	F4135	없음
3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)	Sigma	I0516	없음
덱사메타손	Sigma	D4902	없음
인슐린(소)	Sigma	I5879
없음 프로테아제 억제제 칵테일 정제	Roche	4693159001	없음

시