ऑटोलॉगस और अल्लोजीनिक हड्डी ग्राफ्ट का आरोपण प्रमुख craniofacial हड्डी के झड़ने का इलाज करने के लिए दृष्टिकोण को स्वीकार कर लिया गठन। फिर भी neovascularization, सेल भेदभाव और हड्डी गठन के बीच परस्पर क्रिया पर भ्रष्टाचार रचना का प्रभाव स्पष्ट नहीं है। हम भ्रष्टाचार निकटता में एंजियोजिनेसिस-अस्थिजनन अन्योन्याश्रय स्पष्ट करने के उद्देश्य से एक बहुविध इमेजिंग प्रोटोकॉल उपस्थित थे।
एक बोन ग्राफ्टिंग प्रक्रिया की सफलता का निर्धारण एक प्रमुख पैरामीटर भ्रष्टाचार आसपास के क्षेत्र के vascularization है। हम प्रचुर मात्रा में रक्त वाहिनियों के गठन से अधिक से अधिक हड्डी पुनर्जनन उत्पन्न करेगा एक हड्डी ऑटोग्राफ़्ट की है कि आरोपण धारणा। दोष स्थल पर neovascularization पर भ्रष्टाचार के प्रभाव की जांच करने के लिए, हम एक polymerizing विपरीत एजेंट के साथ पशु के प्रणालीगत छिड़काव शामिल है जो रक्त वाहिकाओं के गठन, नव चिह्नित करने के लिए एक सूक्ष्म गणना टोमोग्राफी (μCT) दृष्टिकोण विकसित किया है। इस विधि को अपनी संपूर्णता में एक अंग की विस्तृत संवहनी विश्लेषण में सक्षम बनाता है। इसके अतिरिक्त, रक्त छिड़काव एक रक्त जनित फ्लोरोसेंट एजेंट के प्रतिदीप्ति इमेजिंग (FLI) का उपयोग कर मूल्यांकन किया गया था। हड्डी गठन एक हाइड्रॉक्सियापटाइट-लक्षित जांच और μCT विश्लेषण का उपयोग FLI द्वारा मात्रा था। स्टेम सेल भर्ती osteocalcin प्रमोटर के नियंत्रण के तहत luciferase व्यक्त कि ट्रांसजेनिक चूहों की bioluminescence इमेजिंग (BLI) द्वारा नजर रखी थी।यहाँ हम का वर्णन है और allograft की तैयारी, calvarial दोष सर्जरी का प्रदर्शन, neovascularization अध्ययन और (इसके विपरीत एजेंट के vivo छिड़काव सहित) हड्डी गठन विश्लेषण और डेटा विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल के लिए μCT स्कैनिंग प्रोटोकॉल।
वाहिका की 3 डी उच्च संकल्प विश्लेषण विशेष रूप से धमनिका गठन के लिए सम्मान के साथ, प्रत्यारोपित autografts के साथ पशुओं में काफी अधिक angiogenesis को प्रदर्शन किया। तदनुसार, रक्त छिड़काव सर्जरी के बाद 7 वें दिन से ऑटोग्राफ़्ट समूह में काफी अधिक था। हम autografts प्राप्त किया है कि जानवरों में बेहतर अस्थि खनिज और मापा अधिक से अधिक हड्डी गठन मनाया। कोशिकाओं 7 वें और 10 वें पश्चात दिन के बीच की हड्डी कोशिकाओं के गठन में भेदभाव जहां भ्रष्टाचार मेजबान हड्डी सीवन, के लिए ऑटोग्राफ़्ट आरोपण प्रेरित निवासी स्टेम सेल भर्ती। यह निष्कर्ष बढ़ाया हड्डी गठन के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है कि इसका मतलब हैऑटोग्राफ़्ट आरोपण की विशेषता है कि संवर्धित संवहनी खिला। तरीकों कस घिरा हड्डी गठन और neovascularization के मामले में हड्डी पुनर्जनन अध्ययन करने के लिए एक इष्टतम उपकरण के रूप में सेवा कर सकते हैं दर्शाया।
आघात के कारण, ट्यूमर लकीर, डिकम्प्रेसिव craniotomy, और जन्मजात दोष को Craniofacial हड्डी हानि शायद ही कभी अपने आप से भर देता है और एक स्पष्ट unmet नैदानिक जरूरत को प्रस्तुत करता है। ऑटोलॉगस हड्डी ग्राफ्ट और अल्लोजीनिक हड्डी ग्राफ्ट बड़े पैमाने पर इन शर्तों के 1 के इलाज के लिए उपयोग किया जाता है।
यह व्यापक रूप से अस्थिजनन कसकर angiogenesis 2,3 के साथ युग्मित है कि स्वीकार किया जाता है। इस प्रकार, हड्डी के उत्थान के लिए एक प्रस्तावित चिकित्सा का पूरा अध्ययन पूरे दोष साइट भर के गठन संवहनी पेड़ की एक व्यापक जांच में शामिल करना चाहिए। अनुसंधान मॉडल में vascularization चिह्नित करने के लिए कई उपलब्ध तरीके हैं। संवहनी पेड़ ऊतकीय विश्लेषण द्वारा जांच की जा सकती है। ऊतक विज्ञान ऊतक सेक्शनिंग पर निर्भर है, जिसके परिणामस्वरूप छवि विकृत हो जाएगा कि वहाँ एक उच्च संभावना है। इस समस्या का समाधान करने के लिए, intravital माइक्रोस्कोपी छवि बरकरार रक्त वाहिकाओं 4 करने के लिए किया जा सकता है; हालांकि, इस पद्धति हैएक विमान इमेजिंग के लिए सीमित। इसके विपरीत एजेंट के साथ भरकर रखा एक जानवर से प्राप्त नमूनों की μCT स्कैनिंग उत्थान साइट 5 खिलाती है कि संवहनी नेटवर्क के 3 डी इमेजिंग की अनुमति देता है। यह दृष्टिकोण एक पूरे के रूप में एक अंग की वाहिका का एक अत्यंत विस्तृत प्रदर्शन, साथ ही रक्त वाहिका वितरण की एक सावधानीपूर्वक विश्लेषण की अनुमति देता है। इसके अलावा, μCT रक्त वाहिकाओं के विभिन्न उपप्रकार विशेषताएँ जो रक्त वाहिकाओं के विभिन्न व्यास, के बीच भेदभाव सक्षम बनाता है।
हम एक allograft का आरोपण से अधिक से अधिक neovascularization प्रेरित करेगा एक calvarial ऑटोग्राफ़्ट की है कि आरोपण धारणा है, और यह है कि हम तकनीक की एक किस्म कार्यरत इस परिकल्पना को आगे बढ़ाने formation.To बढ़ाया हड्डी के लिए, बारी में, neovascularization नेतृत्व करेंगे वृद्धि हुई है। हम एक μCT आधारित विश्लेषण प्रदर्शन से नवगठित संवहनी पेड़ के पैटर्न की जांच की। हम एक रक्त पूल फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग रक्त छिड़काव मापा। अगला, हम गधेएक हाइड्रॉक्सियापटाइट निर्देशित जांच और μCT विश्लेषण के FLI द्वारा एसईडी हड्डी के ऊतकों खनिज। अंत में, हम luciferase osteocalcin पॉजिटिव कोशिकाओं में व्यक्त किया जाता है, जिसमें ट्रांसजेनिक चूहों में BLI प्रदर्शन, स्टेम सेल भर्ती और भेदभाव पर नजर रखी।
यहाँ वर्णित बहुविध इमेजिंग दृष्टिकोण का उद्देश्य कपाल बोन ग्राफ्टिंग के संदर्भ में angiogenesis-अस्थिजनन अक्ष की सावधानीपूर्वक जांच के लिए सक्षम है। Neovascularization पूरे कपाल दोष खिला संवहनी पेड़ की एक सटीक उच्च सं?…
The authors have nothing to disclose.
The authors acknowledge funding from the NIDCR (Grant No. DE019902) and from the Israeli Science Foundation (Grant No. 382/13).
C57BL/C Mice | Harlan laboratories | 57 | |
FVB/n Mice | Harlan laboratories | 862 | |
Phenobarbital | West waro | NDC 0641-0477-25 | |
Rodent hair clipper | Wahl animal | 8786-451A | |
Scalpel 11 | Miltex | 27111504 | |
Dental micro motor | marathon III | ||
5mm trephine | Fine Science tools | 18004-50 | |
Hair removing cream | Veet | ||
KetaVed (Ketamine) | Vedco | NDC 50989-996-06 | |
Domitor | Zoetis | NADA 141-267 | |
carprofen | Norbrook | 02000/4229 | |
Eye ointment | Puralube | NDC 17033-211-38 | |
Operating binocular | Kent scientific | KSCXTS-1121 | |
Fine scissors | Fine Science tools | 14060-11 | |
Curve tweezers | Fine Science tools | 11274-20 | |
Spoon shaped spatula | Fine Science tools | 10090-13 | |
Tisseel Fibin gel kit | Baxter | 718971 | |
needle holder | Fine Science tools | 12060-01 | |
vicryl suture 4-0 | Ethicon | J392H | |
Antisedan | Zoetis | NADA#141033 | |
Heparin | Sigma | H3393 | |
20ml luerlock | BD | 302830 | |
23G scalp vein set (butterfly needle) | BD | 367342 | |
Hemostat | Fine Science tools | 13008-12 | |
Syringe pump | Harvard apparatus | PHD 2000 | |
3sec gel glue | Scotch | ||
rodent dissection board | Leica | 38DI02313 | |
Microfil MV-122 | flow-tech | MV-122 | |
uCT40 scanner | Scanco | uCT40 | |
TCA6% | Sigma | T6399 | |
Osteosense 680 | PerkinElmar | NEV10020EX | |
Angiosense750 | PerkinElmar | NEV10011 | |
Oxigen 100% medical grade | |||
isoflurane (furane) | Baxter | 1001936040 | |
IVIS kinetics | Xenogen | ||
Beetle luciferin | Promega | E160A |