Encyclopedia of Experiments: Biology
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- शुरू करने के लिए, एक एनेस्थेटाइज्ड वयस्क फ्लाई से सिर हटा दें। डिकैपिटेड फ्लाई को फास्फेट-बफर खारा, या पीबीएस, और गोजातीय सीरम एल्बुमिन, या बीएसए वाले समाधान के साथ कवर करें, जो desiccation से बचने के लिए। क्षक के साथ छाती से मक्खी को पकड़ें, और फिर पेट को पेट को बेनकाब करने के लिए संदंश की दूसरी जोड़ी के साथ खींचें।
एक बार अलग होने के बाद, पेट को प्रकट करने के लिए फसल को पेट से दूर खींचें। पेट की गुहा से आंत को मुक्त करने के लिए फ्लाई के पीछे के छोर को खींचें। पेट से पूरे ऊतक को बाहर निकालने के लिए पेट को टगिंग जारी रखें । एक बार मुक्त होने के बाद, फोर्गुट, मालपिगियन ट्यूबल, हिंदगुट और अंडाशय को हटा दें, केवल विच्छेदित मिडगुट, फ्लाई के भीतर पाचन की प्राथमिक साइट ।
उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम फ्लोरेसेंस-एक्टिवेटेड सेल सॉर्टिंग, या FACS के माध्यम से आगे विश्लेषण करने के लिए युवा और पुराने वयस्क मक्खियों से मिडगट्स को विच्छेदन करेंगे।
- विच्छेदन शुरू करने से पहले, एक मानक फ्लाई बेड पर कार्बन डाइऑक्साइड के साथ 40 मक्खियों की एक शीशी को एनेस्थेटाइज करें। इसके बाद सभी मक्खियों को काटना और उन्हें एगरल्ड जेल से लेपित विच्छेदन पकवान में स्थानांतरित करने के लिए एक रेजर ब्लेड का उपयोग करें। agarose को कवर करने के लिए डिश में पर्याप्त ठंडा पीबीएस प्लस बीएसए डालें।
फिर, प्रत्येक कीट के लिए, एक फ्लाई पेट को एक जोड़ी संदंश के साथ पकड़ें, और छाती को दूसरे के साथ लें। पेट से छाती को अलग करें। पेट दिखाई देगा, और फसल सबसे अधिक संभावना अभी भी छाती से जुड़ी होगी। इसके बाद पेट को पकड़कर छाती से बाहर निकालें। फिर, फसल को पकड़ो और पेट से थोड़ा पूर्वकाल में उसे प्रकट करने के लिए।
इसके बाद, पेट के पीछे के छोर को हड़पने के लिए संदंश में से एक का उपयोग करें, और दूसरा पूर्वकाल खुले क्यूटिकल के किनारे को समझने के लिए। पीछे के छोर को काटना तोड़ने के लिए दूर खींचें, और पीछे की ओर बहुत धीरे से खींचते रहें, जब तक कि पूरे पेट को पेट की गुहा से बाहर नहीं निकाला जाता है। फोर्गट, माल्पिगियन ट्यूब, हिंडगुट और अंडाशय को हटा दें, नंगे मिडटिट को छोड़ दें।
चूंकि मिडगट्स अलग-थलग होते हैं, इसलिए एक ग्लास पेस्टर पिपेट का उपयोग समय-समय पर कई आंतों के ऊतकों को 1.5-मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करने के लिए करें जिसमें बर्फ पर ठंडा पीबीएस प्लस बीएसए होता है।
