成虫ハエからのミドグの解剖:消化管を分離する方法

- まず、麻酔付きの大人のハエから頭を取り除きます。 脱首したハエをリン酸緩衝生理食塩水、PBS、牛セラムアルブミン、BSAを含む溶液で覆い、乾燥を避ける。

切り離したら、腹部から作物を引き離して腸を広げ、ハエの後端を引き離して腹腔から腸を解放し始める。腹部から組織全体を引き出すために腸を引っ張り続ける。解放されたら、前腸、マルピギの尿管、後腸、卵巣だけを取り除き、分裂した中腸、卵巣だけを残す。

このプロトコル例では、老若男女の成虫ハエから中腸を解剖し、蛍光活性化細胞分類(FACS)を介してさらに分析します。

- 解剖を始める前に、標準的なフライベッドに二酸化炭素を持つ40ハエのバイアルを麻酔します。その後、カミソリの刃を使用してすべてのハエを切断し、アガロースゲルでコーティングされた解剖皿に移します。

その後、昆虫ごとに、1組の鉗子でハエ腹部をつかみ、胸郭を腹部から分離します。

次に、鉗子の1つを使って腹部の後端をつかみ、もう一方は前部開いたキューティクルの端をつかみます。

中腸が単離されると、ガラス製のパスツールピペットを使用して、一度にいくつかの腸組織を冷たいPBSと氷の上にBSAを含む1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離管に定期的に移管する。