Encyclopedia of Experiments: Biology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Для начала снимите голову с обезболивающей взрослой мухи. Обложка обезглавленной мухи с раствором, содержащим фосфат-Buffered солевой, или PBS, и bovine сыворотки Альбумин, или BSA, чтобы избежать высыхания. Держите муху грудной клетки с типсами, а затем вытащить живот со второй парой типсов подвергать кишечника. Так как урожай, или мешок для хранения пищи, будет прикреплен к грудной клетке, мягко вытащить кишечника.
После отсоединения, вытащить урожай от живота, чтобы развернуть кишечник. Вытяните с задней части мухи, чтобы начать освобождать кишечник от брюшной полости. Продолжить дергая кишечника, чтобы вытащить всю ткань из живота. После освобождения, удалить foregut, malpighian трубоубий, hindgut, и яичники, чтобы оставить позади только вскрытый midgut, основной сайт пищеварения в мухе.
В примере протокола, мы будем вскрывать midguts от молодых и старых взрослых мух, которые будут проанализированы дальше через флуоресценции активированной сортировки клеток, или FACS.
- Перед началом вскрытия, анестезировать один флакон из 40 мух с углекислым газом на стандартной мухой кровать. Затем используйте лезвие бритвы, чтобы обезглавить всех мух и передать их в рассечение блюдо, покрытое гелем агарозы. Налейте достаточно холодной PBS плюс BSA в блюдо, чтобы покрыть агарозу. Мухи будут плавать.
Затем, для каждого насекомого, в свою очередь, захватить муху живот с одной парой типсов, а грудная клетка с другой. Отделите грудную клетку от живота. Кишки будут видны, и урожай, скорее всего, все еще будет подключен к грудной клетке.
Далее, используйте один из типсов, чтобы захватить задний конец живота, а другой, чтобы схватить край передней открытой кутикулы. Вытяните задний конец прочь, чтобы сломать кутикулу, и продолжать потянув задней очень осторожно, пока весь кишечник был вытащил из брюшной полости. Удалить передний, мальпигские трубы, hindgut, и яичников, оставляя голый середине.
Как midguts изолированы, использовать стеклянный пастер пипетку периодически передавать несколько кишечных тканей в то время, чтобы 1,5-миллилитровый микроцентрифуг трубки, содержащей холодный PBS плюс BSA на льду.
