Summary

知道重要的:无偏体视学在非人类灵长类动物的脑

Published: May 14, 2009
doi:

Summary

在人体正常和病理条件下的灵长类动物的大脑解剖组织可以提供重要的见解。无偏体视学是一种准确,有效地估算总神经元的数量(或其他类型的细胞)在一个给定的参考空间的方法<sup> 1</sup>。

Abstract

非人类灵长类动物是了解人类大脑的正常功能和疾病过程的一个重要平移物种。无偏体视学,接受国家的最先进的生物对象在组织切片进行量化的方法<sup> 2</sup>,生成可靠的结构数据,哺乳动物的大脑中的生物特征<sup> 3</sup>。该方法的关键组件是公正的(系统的,随机)解剖学定义的结构(参考空格)内细胞数量的大小,纤维和毛细血管长度,面积,区域卷和空间分布的生物对象的量化相结合,抽样参考空间<sup> 4</sup>。在前面的方法,这些体视学方法的优点是避免了所有已知的来源系统的(非随机)产生的错误,从错误的假设和非核查的模型。这项研究的文件一个计算机化的视学的生物应用vervet猴脑额叶皮层神经元的总人口估计(<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>),与两个市售体视节目,生命科学BioQuant和Stereologer(图1)的援助。此外对比和比较,从两者的BioQuant的结果和<em> Stereologer</em“>”系统“,这项研究提供了一个详细的协议<em> Stereologer</em>系统。

Protocol

第1部分:前处理的组织应根据伯克等。 (2009)5。 简单地说,组织应该得到很好的多聚甲醛,戊二醛,或福尔马林灌注。这可以通过标准transcardial,通常用于收获其他器官灌注。在本研究的主题是深刻的盐酸氯胺酮(10毫克/公斤,IM)与戊巴比妥钠(25毫克/公斤,四)过量安乐死,镇静剂和用0.1 M PBS灌注,直到完全exsanguinated transcardially人。其次是在PBS的4%多聚甲醛为5分钟(约1?…

Discussion

在灵长类动物的大脑无偏体视学与其它生物标本。然而,由于灵长类动物的大脑的大小,谨慎处理计划建议,因为一个单个半球的vervet猴子在50μm的切片时,产量超过1200节。首先,我们建议stereotaxically阻断大脑切成1cm的块,它提供了一个标准节块和学科之间的平面,最大限度地减少块之间的部分路段 ,并提供管理的5大小的块。一个关键的体视步骤是系统抽样6-10节获得通过参考区域。对?…

Acknowledgements

作者想感谢他持续的技术支持Ikiel Ptito。 NSERC授予到MP。

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Stereologer   Stereology Resource Center (Chester, MD) www.disector.com  
Stereology Tool-Kit Stereologer system   BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)    
StereoInvestigator   MicroBright Field (Willston, VT)    

Referências

  1. West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator. Aat Rec. 231, 482-497 (1991).
  2. Saper, C. B. Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods. J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).
  3. Sterio, D. C. The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector. J Microsc. 134, 127-136 (1984).
  4. Mouton, P. R. . Principles and Practices of Unbiased Stereology. , (2002).
  5. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space. J Vis Exp. 29, (2009).
  6. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Brain banking: Making the most of your research. J Vis Exp. 29, (2009).
  7. Manaye, K. F., Wang, P., O’Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry. AGE. 29, 87-96 (2009).
  8. Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure. Neuroreport. 20, 13-17 (2009).
  9. Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain. J Vis Exp. 29, (2009).

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Citar este artigo
Burke, M., Zangenehpour, S., Mouton, P. R., Ptito, M. Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain. J. Vis. Exp. (27), e1262, doi:10.3791/1262 (2009).

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