Summary

비 - 인간 메이트 두뇌의 편견 Stereology를 : 중요 한거지 아는

Published: May 14, 2009
doi:

Summary

영장류 두뇌의 해부 학적 조직은 인간의 정상 및 병리 학적 조건에 중요한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 불편 stereology 정확하고 효율적으로 주어진 참조 공간에 총 뉴런 번호 (또는 다른 세포 유형) 계산하는 방법입니다<sup> 1</sup>.

Abstract

비 인간 영장류는 인간 두뇌의 정상적인 기능과 질병 프로세스를 이해하는 중요한 translational 수종입니다. 불편 stereology, 조직 섹션에 생물 학적 개체의 부량을위한 최첨단으로 인정하는 방법<sup> 2</sup> 포유류의 두뇌에 생물 학적 기능에 대한 신뢰할 수있는 구조적 데이터를 생성<sup> 3</sup>. 접근 방식의 주요 구성 요소는 불편하고있는 사이 세포 숫자와 크기, 섬유 및 모세관 길이, 표면 구역, 지역 볼륨 및 생물 학적 개체의 공간적 배포판 부량와 함께 해부학적인 몸의 구조 정의 구조 (참조 공간)의 (체계 – 랜덤) 샘플링 참조 공간<sup> 4</sup>. 이전 방법을 통해 이러한 stereological 접근 방법의 장점 중 하나에 결함이 가정이 아닌 검증 모델에서 발생하는 체계적인 (비 임의의) 오류의 모든 알려진 소스의 회피입니다. 이 연구는 (vervet 원숭이 두뇌의 전두엽 피질에서 전체의 연결 인구를 추정하기 위해 컴퓨터 stereology의 생물 학적 응용 프로그램 문서<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>), 두 상용 stereology 프로그램, BioQuant 생명 과학 및 Stereologer (그림 1)에서 지원. 대비와 BioQuant 모두에서 결과의 비교 및​​ 이외에<em> Stereologer</em> 시스템이 연구에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다<em> Stereologer</em> 시스템.

Protocol

1 부 : 조직의 사전 처리 버크 외에 따라 수행되어야합니다. (2009) 5. 간단히, 조직이 잘 paraformaldehyde, 글루 타 알데히드, 또는 포르말린과 perfused해야합니다. 이것은 일반적으로 다른 장기를 수확하는 데 사용되는 표준 transcardial 재관류를 통해 달성될 수있다. 현재 연구에서 주제가 깊이 나트륨 pentobarbital (25 MG / kg, IV)의 과다로 euthanized 케타민을 하이드로 클로라이드 (10 MG / kg, IM)과 …

Discussion

영장류 두뇌에 불편 stereology 다른 생물 학적 표본의 비슷합니다. 50μm에서 슬라이스 때 vervet 원숭이의 단일 반구 이상 1,200 섹션을 산출 이래 그러나 영장류 두뇌의 크기에 따라,주의 처리 계획을 권장합니다. 먼저 우리는 stereotaxically, 블록과 과목 사이의 섹션의 표준 평면을 제공 블록 사이의 부분 부분을 최소화하고, 관리 크기의 블록 5를 제공 1cm 단위로 머리를 차단하는 것이 좋습니다. …

Acknowledgements

저자는 자신의 지속적인 기술 지원 Ikiel Ptito 감사하고 싶습니다. MP에 NSERC 부여합니다.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Stereologer   Stereology Resource Center (Chester, MD) www.disector.com  
Stereology Tool-Kit Stereologer system   BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)    
StereoInvestigator   MicroBright Field (Willston, VT)    

Referências

  1. West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator. Aat Rec. 231, 482-497 (1991).
  2. Saper, C. B. Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods. J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).
  3. Sterio, D. C. The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector. J Microsc. 134, 127-136 (1984).
  4. Mouton, P. R. . Principles and Practices of Unbiased Stereology. , (2002).
  5. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space. J Vis Exp. 29, (2009).
  6. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Brain banking: Making the most of your research. J Vis Exp. 29, (2009).
  7. Manaye, K. F., Wang, P., O’Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry. AGE. 29, 87-96 (2009).
  8. Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure. Neuroreport. 20, 13-17 (2009).
  9. Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain. J Vis Exp. 29, (2009).

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Citar este artigo
Burke, M., Zangenehpour, S., Mouton, P. R., Ptito, M. Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain. J. Vis. Exp. (27), e1262, doi:10.3791/1262 (2009).

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