Mikrofabrizierten Plattformen für Mechanisch Dynamische Cell Culture
Summary
In diesem Protokoll, zeigen wir die Herstellung eines Mikroaktor Reihe von vertikal versetzt zum Thema, die die Technologie basiert, und wie diese Basistechnologie können modifiziert werden, um High-Throughput-mechanisch dynamischen Zellkultur in beiden zweidimensionalen und dreidimensionalen Kultur durchzuführen Paradigmen.
Abstract
Die Fähigkeit, systematisch Sonde in vitro zelluläre Reaktion auf Kombinationen von mechanobiological Reize für das Tissue Engineering, Drug Discovery oder grundlegende zellbiologische Studien wird durch aktuelle Bioreaktor-Technologien, die nicht gleichzeitig gelten eine Vielzahl von mechanischen Reizen auf kultivierte Zellen begrenzt. Um dieses Problem zu beheben, haben wir eine Reihe von mikrostrukturierten Plattformen entwickelt, um die Auswirkungen von mechanischen Reizen in einem High-Throughput-Format Bildschirm entwickelt. In diesem Protokoll, zeigen wir die Herstellung eines Mikroaktor Reihe von vertikal versetzt zum Thema, die die Technologie ist und weiter zu demonstrieren, wie diese Basistechnologie modifiziert werden, um High-Throughput-mechanisch dynamischen Zellkultur in beiden zweidimensionalen und Durchführung werden drei dimensionale Kultur Paradigmen.
Protocol
Discussion
Obwohl konzeptionell einfach, Bauelementherstellung dauert einige experimentelle Geschick und Übung. Insbesondere im Falle von 2D-Zellkultur kann die Ausrichtung der mehrere Schichten in das Gerät eine Herausforderung sein, vor allem über eine großflächige Arrays. Praktisch gesehen, können wir sicher erreichen eine 100% ige Ausrichtung Erfolgsrate mit Hilfe von Geräten mit 50 um der Toleranz in Abstand zwischen benachbarten Funktionen in mehreren Schichten. Wir haben auch erfolgreich Ausrichtung mit Toleranzen bi…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken für die finanzielle Unterstützung von der Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada und der Canadian Institutes of Health Research (CHRPJ 323533-06), der Ontario Graduate Scholarship-Programm CM, und die Canada Research Chairs in Mikro-und Nano Engineering Systems zu YS, und in Mechanobiologie zu CAS.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard 184 PDMS Monomer and Crosslinker Kit | Dow Corning | |||
| SU-8 masters | ||||
| Silanization agent: (tridecafluoro-1, 1, 2, 2-tetrahydrooctyl)-1-trichlorosilane | United Chemical Technologies | |||
| Foam pads | Craft supply stores, 1-2 mm thick | |||
| Overhead inkjet transparencies | Grand & Toy | |||
| Plexiglass plates | ||||
| C-clamp | hardware store | |||
| Micromanipulator system | Siskiyou | |||
| Custom-made vaccum mount | ||||
| Vision system, Navitar 12x zoom | Navitar | |||
| Connecting tubes | VWR International | Clay Adam Intramedic PE190 | ||
| Blunt 18G needles | Smallparts.com / Amazon Inc. | |||
| Eccentric diaphragm micropump | Schwarzer Precision | SP 500 EC-LC4.5V DC | ||
| Solenoid valves | Pneumadyne | S10MM-30-12-3 | ||
| Solenoid manifold | Pneumadyne | MSV10-1 | ||
| Function generator | ||||
| 3-(trimethoxysilyl) propyl methacrylate | Sigma | |||
| Polyethylene glycol diacrylate 3.4 kDa | Laysan Bio | |||
| Polyethylene glycol 8 kDa | Sigma | |||
| Irgacure 2959 | Ciba Specialty Chemicals | |||
| 1-vinyl-2-pyrolidinone | Sigma | |||
| Standard cell culture reagents |
Referências
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