Plataformas microfabricated para cultura de células mecanicamente dinâmico
Summary
Neste protocolo, demonstramos a fabricação de uma matriz microactuator de posts verticalmente deslocadas em que a tecnologia é baseada, e como essa tecnologia base pode ser modificado para conduzir alto rendimento de cultura de células mecanicamente dinâmica em ambos cultura bidimensional e tridimensional paradigmas.
Abstract
A habilidade de sondar sistematicamente in vitro resposta celular a combinações de estímulos mechanobiological para engenharia de tecidos, descoberta de drogas ou estudos biológicos fundamentais célula é limitado pelo biorreator tecnologias atuais, que não pode, simultaneamente, aplicar uma variedade de estímulos mecânicos nas células em cultura. , A fim de resolver este problema, temos desenvolvido uma série de plataformas microfabricated projetado para tela para os efeitos dos estímulos mecânicos em um formato de alto rendimento. Neste protocolo, demonstramos a fabricação de uma matriz microactuator de posts verticalmente deslocadas em que a tecnologia é baseada, e ainda demonstrar como esta tecnologia de base pode ser modificada para conduzir alto rendimento de cultura de células mecanicamente dinâmica em ambos os bidimensionais e três dimensional paradigmas cultura.
Protocol
Discussion
Embora conceitualmente simples, a fabricação de dispositivo faz um pouco de habilidade experimental e prática. Particularmente no caso de cultura de células em 2D, o alinhamento das camadas múltiplas em que o dispositivo pode ser desafiador, especialmente sobre uma matriz de grande área. Praticamente falando, nós podemos confiantemente atingir uma taxa de sucesso de 100% de alinhamento usando dispositivos com 50 mm de tolerância do espaçamento entre as características adjacentes em múltiplas camadas. Temos ta…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Reconhecemos o apoio financeiro da Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council of Canada e da Canadian Institutes of Health Research (CHRPJ 323533-06), o programa de Bolsas de Pós-Graduação Ontário a CM, e os presidentes do Canadá Pesquisa em Micro e Nano Engenharia de Sistemas de YS, e em Mechanobiology a CAS.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard 184 PDMS Monomer and Crosslinker Kit | Dow Corning | |||
| SU-8 masters | ||||
| Silanization agent: (tridecafluoro-1, 1, 2, 2-tetrahydrooctyl)-1-trichlorosilane | United Chemical Technologies | |||
| Foam pads | Craft supply stores, 1-2 mm thick | |||
| Overhead inkjet transparencies | Grand & Toy | |||
| Plexiglass plates | ||||
| C-clamp | hardware store | |||
| Micromanipulator system | Siskiyou | |||
| Custom-made vaccum mount | ||||
| Vision system, Navitar 12x zoom | Navitar | |||
| Connecting tubes | VWR International | Clay Adam Intramedic PE190 | ||
| Blunt 18G needles | Smallparts.com / Amazon Inc. | |||
| Eccentric diaphragm micropump | Schwarzer Precision | SP 500 EC-LC4.5V DC | ||
| Solenoid valves | Pneumadyne | S10MM-30-12-3 | ||
| Solenoid manifold | Pneumadyne | MSV10-1 | ||
| Function generator | ||||
| 3-(trimethoxysilyl) propyl methacrylate | Sigma | |||
| Polyethylene glycol diacrylate 3.4 kDa | Laysan Bio | |||
| Polyethylene glycol 8 kDa | Sigma | |||
| Irgacure 2959 | Ciba Specialty Chemicals | |||
| 1-vinyl-2-pyrolidinone | Sigma | |||
| Standard cell culture reagents |
Referências
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