機械的にダイナミックな細胞培養のための微細加工プラットフォーム
Summary
このプロトコルでは、我々は技術がベースとなっている垂直方向に変位の記事のマイクロアクチュエータアレイの製作、そしてどのようにこの基盤技術は2次元と3次元の両方の文化の中でハイスループット機械的にダイナミックな細胞培養を実施するように変更することができますを示していますパラダイム。
Abstract
組織工学、創薬や基本的な細胞生物学研究のためのmechanobiological刺激の組み合わせにin vitroでの細胞応答における体系的に調査する能力を同時に培養細胞に機械的なさまざまな刺激を適用することはできません現在のバイオリアクター技術によって制限されます。この問題に対処するために、我々はハイスループットフォーマットで機械的刺激の効果をスクリーニングするために設計された微細なプラットフォームのシリーズを開発した。このプロトコルでは、我々は技術がベースとなっている垂直方向に変位の記事のマイクロアクチュエータアレイの作製を実証し、さらにこの基本技術は二次元と三の両方で高スループットの機械的にダイナミックな細胞培養を行うために変更することができる方法を示しています次元培養パラダイム。
Protocol
A.デバイスの説明と操作デバイスは、ポリジメチルシロキサン（PDMS）で多層ソフトリソグラフィ1を使用して作製し、同時に微細アレイ全体の個々の細胞培養の位置に機械的な条件の範囲を生成することができるされています。このプロトコルでは、空気圧で作動micropostsの配列を作製する手順は、最初に両方の2次元（2D）および三次元（3D）文化のパラダイム?…
Discussion
概念的には単純ですが、デバイス製造ではない、いくつかの実験的な技能と練習が必要。特に2次元細胞培養の場合には、デバイス内の複数の層のアライメントは、特に大面積配列を介して、挑戦することができます。事実上、我々は確実に複数の層で隣接するフィーチャ間の間隔の許容範囲の50μmのデバイスを使用して100％のアライメントの成功率を達成することができます。我々はまた、?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、YSにカナダ自然科学工学研究評議会とカナダ衛生研究所（CHRPJ 323533〜06）、オンタリオ大学院奨学金プログラムのCMに、そしてマイクロナノエンジニアリングシステムにおけるカナダ研究チェアからの財政支援を認めるとCASにMechanobiologyインチ
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard 184 PDMS Monomer and Crosslinker Kit | Dow Corning | |||
| SU-8 masters | ||||
| Silanization agent: (tridecafluoro-1, 1, 2, 2-tetrahydrooctyl)-1-trichlorosilane | United Chemical Technologies | |||
| Foam pads | Craft supply stores, 1-2 mm thick | |||
| Overhead inkjet transparencies | Grand & Toy | |||
| Plexiglass plates | ||||
| C-clamp | hardware store | |||
| Micromanipulator system | Siskiyou | |||
| Custom-made vaccum mount | ||||
| Vision system, Navitar 12x zoom | Navitar | |||
| Connecting tubes | VWR International | Clay Adam Intramedic PE190 | ||
| Blunt 18G needles | Smallparts.com / Amazon Inc. | |||
| Eccentric diaphragm micropump | Schwarzer Precision | SP 500 EC-LC4.5V DC | ||
| Solenoid valves | Pneumadyne | S10MM-30-12-3 | ||
| Solenoid manifold | Pneumadyne | MSV10-1 | ||
| Function generator | ||||
| 3-(trimethoxysilyl) propyl methacrylate | Sigma | |||
| Polyethylene glycol diacrylate 3.4 kDa | Laysan Bio | |||
| Polyethylene glycol 8 kDa | Sigma | |||
| Irgacure 2959 | Ciba Specialty Chemicals | |||
| 1-vinyl-2-pyrolidinone | Sigma | |||
| Standard cell culture reagents |
Referências
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Citar este artigo
Moraes, C., Sun, Y., Simmons, C. A. Microfabricated Platforms for Mechanically Dynamic Cell Culture. J. Vis. Exp. (46), e2224, doi:10.3791/2224 (2010).